专利名称：一种建鲤配组繁殖的方法
技术领域：
本发明属于鱼类分子标记辅助育种领域，涉及一种建鲤配组繁殖的方法。
背景技术：
建鲤(Cyprinus carp I o vat. jian)具有生长快、体型好、青灰色、肉质肉味好、饲料转化率高、适应性抗逆能力强等优点，它是通过家系选育，多系杂交及雌核发育相结合的综合育种技术所培育成功的遗传性状稳定的一个鲤鱼品种。建鲤虽然有较全面的优良性状，但由于养殖面的扩大和繁育技术不规范，使得建鲤出现近交衰退现象，如生长减慢、抗病力下降、性成熟个体变小等。分子标记辅助选择，是在分子遗传标记的辅助下，综合利用遗传标记信息、个体数量性状信息、遗传距离等通过连锁分析，来选配亲本组合，可以提高生产性能、避免近亲交配，能缩短育种进程。
发明内容
本发明的目的是提供一种建鲤配组繁殖的方法，有助于提高建鲤生产性能、避免近亲交配、维持较高的遗传多样性，在建鲤育种和种质保护中有极大的应用价值。为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案为一种建鲤配组繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤(I)对建鲤繁殖群体采血液或鳍条，采用DNA提取法提取基因组DNA ；(2)根据6个与建鲤增重相关的SNP位点，用步骤⑴的基因组DNA为模板，构建 PCR-RFLP法对其SNPs进行基因型检测；(3)选择含有4 6个增重较快基因型的个体作为侯选亲本；(4)对侯选亲本PCR-RFLP法电泳检测酶切条带，用遗传分析软件进行进行数字化分析处理，获得每个个体之间的遗传距离，并构建进化树；(5)选择侯选亲本遗传距离大于群体平均遗传距离、性腺发育成熟以及配组的后代能富集4个以上体重增重较快基因型的个体进行配组繁殖。所述步骤(2)PCR-RFLP法中，PCR扩增条件为总体积12. 5 μ L，内含基因组DNA 50 lOOng，其余组份按照Taq酶说明书添加，反应结束取3 5 μ L PCR液在I. 0%琼脂糖凝胶电泳检测其浓度和条带单一性。步骤(2)PCR-RFLP法中，PCR扩增程序为94°C预变性2min ;94°C变性30s，退火 40s，72。。延伸lmin,30个循环；72°C延伸8分钟，4°C保存。步骤⑵PCR-RFLP法中，RFLP检测条件为5 μ L PCR液在总体积10 μ L中进行酶切，内含限制性内切酶2U，根据使用说明推荐的温度酶切3 5h，然后终止酶切反应，用
I.2 2. 0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切条带，进行基因型判定。步骤(4)中，使用的遗传分析软件为populations软件和MEGA软件。步骤⑵PCR-RFLP法中，6个与建鲤增重相关SNP位点名称、弓I物序列、限制性内切酶和酶切产物条带以及步骤⑶中，6个与建鲤增重相关SNP位点增重较快的基因型选择如下表所示
权利要求
1.一种建鲤配组繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤(1)对建鲤繁殖群体采血液或鳍条，采用DNA提取法提取基因组DNA；(2)根据6个与建鲤增重相关的SNP位点，用步骤(I)的基因组DNA为模板，构建 PCR-RFLP法对其SNPs进行基因型检测；(3)选择含有4飞个增重较快基因型的个体作为侯选亲本；(4)对侯选亲本PCR-RFLP法电泳检测酶切条带，用遗传分析软件进行数字化分析处理，获得每个个体之间的遗传距离，并构建进化树；(5)选择侯选亲本遗传距离大于群体平均遗传距离、性腺发育成熟以及配组的后代能富集4个以上体重增重较快基因型的个体进行配组繁殖。
2.根据权利要求I所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于所述步骤(2)PCR-RFLP 法中，PCR扩增条件为总体积12. 5 μ ,内含基因组DNA 5(Tl00 ng，其余组份按照Taq酶说明书添加，反应结束取3 5 μ PCR液在I. 0%琼脂糖凝胶电泳检测其浓度和条带单一性。
3.根据权利要求I所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于所述步骤(2)PCR-RFLP 法中，PCR扩增程序为94°C预变性2min ;94°C变性30s，退火40s，72°C延伸lmin，30个循环；72°C延伸8分钟，4°C保存。
4.根据权利要求I所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于，所述步骤(2)PCR-RFLP法中，RFLP检测条件为5 μ PCR液在总体积10 PL中进行酶切，内含限制性内切酶2 U， 根据使用说明推荐的温度酶切:Γ5 h，然后终止酶切反应，用I. 2 2. 0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切条带，进行基因型判定。
5.根据权利要求I所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于所述步骤(2)PCR-RFLP 法中，与6个与建鲤增重相关SNP位点名称、引物序列分别为位点(I) JlGHSRla EI-A4S0C，上游引物CAATTCGCATCCTGCTATATATTCG下游引物TTAGTATCCCACGAGTTTGTCCCA，位点(2) jIGHSRla上游引物TGGTTTGGGTCTCCAGCATCTTT下游引物TGTGGATTTGGAGATCAGGTAACG，位点(3) jIGHSRlb E1-G159T, 上游引物TCAGACCTTCCAAAGCTGCCAT下游引物CACACTGAGAGCAGTGATGTTCAGA，位点(4) jlGHRlaI3~A43G,上游引物ACAGCAGTATTCCTTTTACATAGTAGTAGCAG下游引物CACAATACTGTTACTTTAATAGCTGCCTAG，位点(5) jlGHRlBe8-C12T,上游引物AAACAACCCTCGTACTCTGTITTTAGAGCA下游引物AGCTAGCACGACCCGAATCGTTGTC，位点(6) JlIGFBP3bI2~G30T,上游引物GGCAATAGAGACCATAGATCCTATGCGG下游引物TGTGGATTTGGAGATCAGGTAACG。
6.根据权利要求I所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于步骤(4)中使用的遗传分析软件为populations软件和MEGA软件。
全文摘要
本发明涉及一种建鲤配组繁殖的方法，过程如下对建鲤繁殖群体采样血液或鳍条，提取基因组DNA，根据6个与建鲤增重相关的SNP位点，以提取的基因组DNA为模板，构建PCR-RFLP法对其SNPs进行基因型检测。用琼脂糖凝胶电泳检测酶切条带，进行基因型判定。选择含有4个以上增重较快基因型基的个体作为侯选亲本，对侯选亲本PCR-RFLP法电泳检测酶切条带进行数字化处理，用遗传分析软件进行分析，获得每个个体之间的遗传距离，并构建进化树。选择侯选亲本遗传距离较大、性腺发育较好以及配组的后代能富集4个以上体重增重较快基因型的个体进行配组繁殖。有助于提高建鲤生产性能、避免近亲交配、加快建鲤的选育进程。
文档编号A01K61/00GK102586451SQ20121006070
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月9日 优先权日2012年3月9日
发明者俞菊华, 唐永凯, 李建林, 李红霞 申请人:中国水产科学研究院淡水渔业研究中心