专利名称：红掌以芽繁芽组织培养培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种红掌以芽繁芽组织培养培养基。
背景技术：
红掌(anthurium)又名安祖花、火鹤花等,属天南星科花烛属，原产于南美洲的热带雨林地区，现欧洲、亚洲、非洲皆有广泛栽培。特性是喜暖畏寒、喜湿怕旱，喜阴忌晒。其花朵独特，有佛焰花序，色泽鲜艳华丽，色彩丰富，叶形苞片，常见的苞片颜色有红色、粉红、白色等，有极大的观赏价值。可用播种、分株等法繁殖。红掌的花语是大展宏图、热情、热血。红掌是重要的热带切花，佛焰花序，其佛焰花苞硕大，肥厚具蜡质，色泽有红、粉、 白、绿、双色等。其色泽鲜艳，造形奇特，应用范围广，经济价值高，是目前全球发展快、需求量较大的高档热带切花和盆栽花卉。在红掌原产地热带雨林，红掌可用种子繁殖，但进入开花时间长。分株繁殖是红掌以前繁殖的主要方式。红掌植株基部长出吸芽，产生根系后可分株，每年可分3-4株，繁殖系数较低，很难满足规模化生产所需的种苗。现在红掌种苗生产主要通过组织培养进行种苗的快速繁殖，也就是红掌的克隆技术。这样可以在比较短的时间内生产整齐一致的优质种苗，供应生产的需要。通过组织培养技术生产红掌种苗主要有再生体系的建立、增殖培养、壮苗生根、移栽和温室育苗等技术环节。目前国内外对红掌组织培养的研究报道均是以叶片、叶柄、茎段等器官进行愈伤组织诱导，然后再诱导愈伤组织分化不定芽，通过这种途径获得的不定芽在增殖过程中容易出现变异，影响了种苗原有的优良遗传性状。而以芽繁芽的方式是直接诱导茎段分化侧芽，再诱导侧芽分化不定芽进行增殖，通过这种途径获得的不定芽能有效避免继代增殖过程中出现的变异，更好地保持母株原有的优良性状。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种红掌以芽繁芽组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1350mg/L、二水氯化钙350mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰2L 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6. Omg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、核黄素(VB2) 6. Omg/L、盐酸卩比卩多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ；(4)植物生长调节剂6_苄基腺嘌呤O. 5-2. Omg/L、萘乙酸O. 2-0. 8mg/L ；余量为蒸馏水。每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾900mg/L、硝酸铵675mg/L、二水氯化钙175mg/L、七水硫酸镁160mg/L、磷酸二氢钾75mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6mg/L、碘化钾O. 83mg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)O. lmg/L、盐酸批口多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L ；(4)植物生长调节剂萘乙酸O. 3-0. 6mg/L ；余量为蒸馏水。本发明红掌以芽繁芽组织培养培养基中的继代、生根培养基的配制方法为I母液的配制与保存 I. I为便于取样，宜先配制各种母液，分为大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和各种植物生长调节剂母液。蔗糖、琼脂不宜配成母液，需要时直接称样；I. 2大量元素母液浓度成100倍溶液，有机物、微量元素母液配成200倍溶液，植物生长调节试剂母液的浓度配成lmg/ml ；I. 3母液选用无菌的蒸馏水、去离子水或超纯水配制，大量生产时用煮沸过的水；I. 4配制大量元素母液时，每个组分应单独溶解，后按氮、钙、镁、磷的顺序逐个混合，否则容易引起沉淀；I. 5微量元素、有机物、植物生长调节剂母液应用棕色瓶装好并置于冰箱中保存；I. 6母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过I个月；I. 7发现母液有沉淀，或有微生物生长，或有藻类生长，应废弃不用。2培养基的配制2. I依照培养基配方，按比例量取各种母液；2. 2在定量容器内放入准备配制培养基总量的约1/2以上的纯净水，并加入适量的糖，然后边搅拌边逐一加入所需量的母液；2. 3琼脂可加热熔化后加入，如有搅拌设备时也可直接加入琼脂粉，然后用纯净水补足所需配制培养基的总量，搅拌均匀即可；2. 4培养基中的糖，在大量组培苗生产中，一般可用市售白糖，但最好是用蔗糖而不要用甜菜糖；2. 5用I. O摩尔/升的盐酸或I. O摩尔/升的氢氧化钠调节培养基的pH值至5. 8 ；2. 6配制好的培养基要尽快分装到培养容器中，以免培养基凝固或变稠而难以分装；2. 7分装培养基时应注意避免培养基粘在瓶口上，如果粘有培养基，在盖瓶盖或瓶塞前必须用干净纱布擦净瓶口。3培养基消毒灭菌3. I将分装好的培养基装于高压灭菌锅内消毒；3. 2加热初期，当消毒锅消毒室的气压达O. 05Mpa时，打开冷凝阀，排尽消毒室内冷空气；3. 3当消毒室内气压达到O. llMpa、温度达121°C时，开始计时，保持温度与压力消毒15-20分钟；3. 4关闭加热电源开关，按慢排气方式排放热气，待消毒室内的气压降至大气压时打开消毒锅盖或门，取出培养基；3. 5培养基应置于空气少流动和少灰尘的干净环境冷却，否则在降温进气过程中导致霉菌孢子进入培养器皿，产生霉菌污染。4培养基储藏4. I培养基应尽量现配现用；4. 2可在空气干净且不流动的环境短时间储藏培养基，但储藏超过I个月的培养基应废弃不用。本发明红掌以芽繁芽组织培养的方法为I.芽的诱导 于晴天剪取生长健壮、无病虫害的红掌嫩茎作为外植体，剪去叶片，用加有少许洗洁精的水清洗1-2次，并用软毛刷轻轻刷洗节间，再用流水冲洗干净，然后在超净工作台上将莖段用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次,再用O. 1%升萊消毒IOmin,无菌水冲洗5 6次。将已经消毒好的材料剪切成带有1-2个侧芽的节段，然后基部向下接种于诱导芽的培养基中。外植体初次培养时，需全暗培养10天左右，再放到弱光下进行培养，大约经过20天左右的培养茎段可诱导出新芽，然后再移至见光的地方培养。2.芽的增殖培养将诱导获得的新芽接种至继代培养基上诱导分化丛生芽进行芽的继代增殖，一般40天继代一次，继代材料均放在培养室内培养，培养室温度为(25±2) V，光照12h. Cf1，光照度15001x。3.生根的诱导芽条长至月2. Ocm时，将较健壮的芽苗由丛生芽上单个切下转至生根培养基上诱导生根，其余芽苗转至继代培养基上继续进行增殖培养。生根培养需要在弱光下培养10天左右，此时小苗的基部形成白色突起，并逐渐伸长，15天后可形成明显幼根，逐渐长成完整的小植株，此时期宜逐步增加光照使小苗变得粗壮。4.生根苗的移栽待生根小苗充分木质化，叶片舒展，叶色浓绿，茎轴伸长，苗高约3. Ocm时即可进行大棚移栽。移栽时先取出小苗，洗净基部的培养基后，移栽于经O. 1%高锰酸钾消毒过的用育苗托装好的育苗基质上，每托移植约100-120株小苗，浇透定根水，保持一定的温度和湿度，温度控制在25°C ±5°C，湿度70%左右，基质见干见湿为好，太湿会引起烂根，太干会出现叶片干枯，并要定期进行喷药进行防病处理。本发明的优点是I、首次采用不经愈伤组织脱分化，直接以芽繁芽诱导无菌芽和扩繁增殖，该技术比通过愈伤组织获得无菌芽材料更快、更容易，而且能有效避免继代增殖过程中出现的变异，保证了种苗的品质和质量，有利于种质资源保存和生产利用；2、以继代培养基进行红掌以芽繁芽增殖培养，夏天培养温度保持在25-28 °C，冬天培养温度保持20°C左右，继代苗月增殖3. 8倍，年繁殖系数为3. 812，继代苗直接分化芽多，芽健壮，生长整齐，叶色浓绿；3、用生根培养基进行生根苗培养生根率达99%，温度为25_28°C时，15天左右可出根，根系发达，平均出根量有6-8条，30天可移栽，移栽成活率达95. 5%。
具体实施例方式下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。实施例I :红掌以芽繁芽组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1350mg/L、二水氯化钙350mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6. Omg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；
(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、核黄素(VB2) 6. Omg/L、盐酸批P多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ；(4)植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤O. 5mg/L、萘乙酸O. 2mg/L ；余量为蒸馏水。每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾900mg/L、硝酸铵675mg/L、二水氯化钙175mg/L、七水硫酸镁160mg/L、磷酸二氢钾75mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6mg/L、碘化钾O. 83mg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)O. lmg/L、盐酸批口多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L ；(4)植物生长调节剂萘乙酸O. 3mg/L ；余量为蒸馏水。实施例2 红掌以芽繁芽组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1350mg/L、二水氯化钙350mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6. Omg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、核黄素(VB2) 6. Omg/L、盐酸批P多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ；(4)植物生长调节剂6_苄基腺嘌呤2. Omg/L、萘乙酸O. 8mg/L ；余量为蒸馏水。每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾900mg/L、硝酸铵675mg/L、二水氯化钙175mg/L、七水硫酸镁160mg/L、磷酸二氢钾75mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6mg/L、碘化钾O. 83mg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；
(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)O. lmg/L、盐酸批口多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L ；(4)植物生长调节剂萘乙酸O. 6mg/L ；余量为蒸馏水。实施例3 红掌以芽繁芽组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1350mg/L、二水氯化钙350mg/L、七水硫酸 镁320mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6. Omg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、核黄素(VB2) 6. Omg/L、盐酸批P多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ；(4)植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤O. 5mg/L、萘乙酸O. 2mg/L ；余量为蒸馏水。每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾900mg/L、硝酸铵675mg/L、二水氯化钙175mg/L、七水硫酸镁160mg/L、磷酸二氢钾75mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6mg/L、碘化钾O. 83mg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)O. lmg/L、盐酸卩比口多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L ；(4)植物生长调节剂萘乙酸O. 3mg/L ；余量为蒸馏水。实施例4:红掌以芽繁芽组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1350mg/L、二水氯化钙350mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6. Omg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、核黄素(VB2) VB26. Omg/L、盐酸卩比口多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ；(4)植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤2. Omg/L、萘乙酸O. 8mg/L ；余量为蒸馏水。每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾900mg/L、硝酸铵675mg/L、二水氯化钙175mg/L、七水硫酸镁160mg/L、磷酸二氢钾75mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6mg/L、碘化钾O. 83mg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)O. lmg/L、盐酸卩比口多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L ；(4)植物生长调节剂萘乙酸0.6mg/L ；余量为蒸馏水。对比例通过愈伤组织获得无菌芽的培养基，该培养基包括诱导培养基、继代培养基和生根培养基，其中每升(L)诱导培养基的组分及各组分的含量如下
(I)大量元素硝酸钾1900mg/L、硝酸铵1650mg/L、二水氯化钙400mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰22. 3mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水钥酸钠O. 25mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 025mg/L、六水氯化钴O. 025mg/L ；(3)有机物肌醇100. Omg/L、甘氨酸2. Omg/L、盐酸卩比卩多醇(VB6) O. 5mg/L、烟酸O. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ；(4)植物生长调节剂6_苄基腺嘌呤O. 8-1. 2mg/L、2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)O. 1-0. 2mg/L ；每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾1900mg/L、硝酸铵1650mg/L、二水氯化钙400mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰22. 3mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水钥酸钠O. 25mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 025mg/L、六水氯化钴O. 025mg/L ；(3)有机物肌醇100. Omg/L、甘氨酸2. Omg/L、盐酸吡哆醇(VB6) O. 5mg/L、烟酸O. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ；(4)植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤I. 5-2. Omg/L、激动素(KT) O. 5-1. Omg/L ；余量为蒸馏水。每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下(I)大量元素硝酸钾950mg/L、硝酸铵825mg/L、二水氯化钙200mg/L、七水硫酸镁185mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L ；(2)微量元素四水硫酸锰21. 5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6mg/L、碘化钾
O.83mg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80. Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)O. lmg/L、盐酸卩比口多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L ；(4)植物生长调节剂萘乙酸O. 3-0. 6mg/L ；余量为蒸馏水。利用上述实施例I和对比例制成的培养基，对红掌进行组织培养，从下表的结果可以看出，实施例的技术指标远超过对比例。
权利要求
1.一种红掌以芽繁芽组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其特征在于 每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下 Cl)大量元素硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1350mg/L、二水氯化钙350mg/L、七水硫酸镁320mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、；(2)微量元素四水硫酸锰21.5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6. Omg/L、二水钥酸钠O.2mg/L、碘化钾O. 83mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ；(3)有机物肌醇80.Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、核黄素(VB2) 6. Omg/L、盐酸吡哆醇(VB6)O.45mg/L、烟酸 O. 45mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L ； (4)植物生长调节剂6_苄基腺嘌呤O.5-2. Omg/L、萘乙酸O. 2-0. 8mg/L ； 余量为蒸馏水。
2.根据权利要求I所述的红掌以芽繁芽组织培养培养基，其特征在于 每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下 Cl)大量元素硝酸钾900mg/L、硝酸铵675mg/L、二水氯化钙175mg/L、七水硫酸镁160mg/L、磷酸二氢钾75mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、七水硫酸亚铁27. 5mg/L ； (2)微量元素四水硫酸锰21.5mg/L、七水硫酸锌8. 3mg/L、硼酸6mg/L、碘化钾O. 83mg/L、二水钥酸钠O. 2mg/L、五水硫酸铜O. 02mg/L、六水氯化钴O. 02mg/L ； (3)有机物肌醇80.Omg/L、甘氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素(VB1) O. lmg/L、盐酸批卩多醇(VB6) O. 45mg/L、烟酸 O. 45mg/L ； (4)植物生长调节剂萘乙酸O.3-0. 6mg/L ； 余量为蒸馏水。
全文摘要
本发明公开了一种红掌以芽繁芽组织培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基。首次采用不经愈伤组织脱分化，直接以芽繁芽诱导无菌芽和扩繁增殖，该技术比通过愈伤组织获得无菌芽材料更快、更容易，而且能有效避免继代增殖过程中出现的变异，保证了种苗的品质和质量，有利于种质资源保存和生产利用。
文档编号A01H4/00GK102823503SQ201210363349
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者何贵整, 陈丽文, 时群, 吴红英, 陈乃明, 张树明, 王华宇, 赖崇健, 杨利平, 荣薏, 巫明忠 申请人:钦州市林业科学研究所