专利名称：一种亲本青虾与秋繁苗的区分方法
技术领域：
本发明涉及一种亲本青虾与秋繁苗的区分方法，具体涉及一种通过中性红活体染色方法以区分亲本青虾与秋繁苗的方法，属于渔业繁殖技术领域。
背景技术：
青奸，学名日本沼奸(Macrobrachium nipponense)，隶属十足目(Decapoda),长臂虫下科(Palaemonidae)、沼奸属(Macrobrachium),广泛分布于全国各地，是我国重要的淡水养殖虾类。近年来，随着养殖产业的不断扩大，青虾种质资源退化严重，规格小、性早熟等现象成为制约青虾养殖业可持续发展的关键问题。青虾性成熟早，繁殖能力强，每年的4-9月份均可产卵繁殖。秋季抱卵，亲虾日常所摄食的营养大部分用于胚胎发育，生长速度自然减慢；再者，产生的大量秋繁苗与亲虾争食、争空间，必然会相互制约生长，严重影响青虾养殖的经济效益。并且，秋繁苗对青虾种质资源的保护有很多不利的影响，很大程度上阻碍了青虾养殖的持续、健康发展。青虾苗种生产多半是单家独户自繁自育，种虾未经选育，有些养殖户采取一次性放苗、全年捕捞或多年捕捞，造成青虾三代同塘，近亲繁殖的概率增大，青虾种质的退化现象已逐步明显，具体表现为个体偏小，怀卵量减少，性成熟提早，抗病力下降等。另一方面，青虾苗种的无序流动，种质混杂，逃苗入河对天然资源库的污染等，虾苗的杂化是不言而喻的，种质的退化和杂化，将导致苗种生产的恶性循环，苗种的质量难以保证。解决青虾种质资源退化的关键是找出一个合理的办法区分青虾亲本与秋繁苗，减少近亲繁殖的概率，以达到青虾种质资源的保护，实现青虾养殖业的持续，健康发展。活体染色(vital staining)—般是选用无毒或毒性很小的染料，在不影响细胞的正常生命活动的前提下而使活细胞的某些结构着色的一种实验方法，最早进行活体染色的是Paul Ehrlich (1885)他把瞰切下的新鲜组织浸泡在亚甲基蓝(美蓝)溶液中，再用显微镜来观察尚处在生活状态下的活细胞结构。中性红(Neutral red)，是细胞活体染色和酸碱性指示剂的一种碱性吩嗪染料。中性红是一种弱碱性PH指示剂在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象，相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。因此，开展中性红作为活体染料以区分亲本青虾与秋繁苗的研究，对与减少近亲繁殖的概率，以达到青虾种质资源的保护，实现青虾养殖业的持续，健康发展起重要的作用。中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度
I.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。
发明内容
本发明的目的是克服上述不足之处，提供一种青虾中性红活体染色方法，并提供最适的染色时间及染色浓度，以达到稳定的染色并不影响健康青虾的活力。利用本发明提供的中性红最适染色时间及染色浓度可区分青虾亲本与秋繁苗，对实现青虾家系选育提供理论基础，减少近亲繁殖的概率，以达到青虾种质资源的保护，实现青虾养殖业的持续，健康发展，为青虾良种繁育奠定理论基础。按照本发明提供的技术方案，一种亲本青虾与秋繁苗的区分方法，步骤为
(1)中性红溶液的配置取中性红粉末，倒入试验缸，边搅拌边注入自来水，注水速度为40 60 dm3/h，搅拌速度为10(T200r/min，配制成中性红水质量比为I 4000 7000的中性红溶液；
(2)青虾饲养取健康的青虾在步骤(I)配置的中性红溶液中饲养6tT5d，饲养过程中不断充氧并喂食，每天喂食两遍。步骤(I)中注水速度为50 dm3/h,搅拌速度为150 r/min。所述中性红水质量比为I 4000 5000。所述中性红水质量比为I : 4000、I 4500或I : 5000。步骤(2)所述饲养时间为5d，溶氧量为5 7 mg/L。所述溶氧量为6. 5 mg/L。利用中性红作为活性染色剂安全的证明见实质审查参考资料I。本发明具有如下优点本发明以中性红为材料,成功摸索出了中性红青虾活体染色的最适染料浓度及最适染色时间，获得了一种效果较好的青虾活体染色方法，可用于区分青虾亲本及秋繁苗，减少近亲繁殖的概率，以达到青虾种质资源的保护，实现青虾养殖业的持续，健康发展，为青虾良种繁育奠定理论基础并促进其他活体染料在青虾活体染色中的应用。
具体实施例方式本发明公开了中性红青虾活体染色的最适染料浓度及染色时间。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。实施例I
(1)中性红溶液的配置取中性红粉末,倒入试验缸,边搅拌边注入自来水,注水速度为4(T60 dm3/h，搅拌速度为10(T200r/min ;配制中性红水质量比为1:4000、1:4500、1:5000、1:6000及1:7000浓度的中性红染料以确定最佳的中性红染料浓度；
(2)青虾饲养取健康的青虾在步骤(I)配置的中性红溶液中饲养染色，在染色过程中仍不断充氧并喂食；不同时间梯度的青虾中性红活体染色时间为6小时、I天、2天、3天及5天；饲养过程中不断充氧并喂食(溶痒量为6. 5mg/L)，每天喂食2遍；
实验青奸在1:4000、1:4500及1:5000浓度的中性红染料中染色5天，实验青奸具有较好的染色效果，全身呈明显红色；捞出后清水中饲养2个后，红色仍清晰可见，且实验青虾活力较好，可用于区分亲本青虾与秋繁苗的研究；但相对来说实验青虾在1:4500染料浓度中的染色效果更好。其他染色时间段的实验青虾在清水中饲养一段时间后均出现褪色现象，直至与普通青虾无明显差别为止，无法应用于区分亲本青虾与秋繁苗的研究。在1:6000及1:7000浓度的中性红染料中染色的所有实验青虾，无论染色时间长短，在清水中实验一段时间后均出现褪色现象，直至与普通青虾无明显差别为止，无法应用于区分亲本青虾与秋繁苗的研究。固最适的青奸中性红染色染料浓度为1:4000,1:4500及1:5000也可用于亲本青虾与秋繁苗的区分；最适的中性红染料染色时间为5天。实验青虾在此染料浓度及染色时间内染色可获得较为稳定的染色效果，可用开展区分亲本青虾与秋繁苗的研究，对与减少近亲繁殖的概率，以达到青虾种质资源的保护，实现青虾养殖业的持续，健康发展起重要的作用。实施例2
(I)中性红溶液的配置取中性红粉末,倒入试验缸,边搅拌边注入自来水,注水速度为40 60 dm3/h，搅拌速度为10(T200r/min，配制成中性红水质量比为1:4000,1 ;4500、
1:5000、1:6000及1:7000浓度的中性红染料。(2)青虾饲养取健康的青虾在步骤(I)配置的中性红溶液中饲养，饲养过程中不断充氧并喂食，每天喂食两遍。青虾中性红活体染色挑取健康的青虾，饲养于已配制而成的每个不同浓度梯度(每个浓度梯度15只)的中性红染液中。青虾不同时间梯度的染色实验分别于6小时，I天，2天，3天及5天从每个不同浓度梯度的中性红然也中取出3只虾，饲养于清水中并充氧(溶痒量为6. 5mg/L)。每天进行换水并投喂螺丝，标准为青虾不饿，并每天记录活体染色青虾的健康，蜕皮及褪色现象。青虾最适的中性红活体染色浓度为1:4000，1:4500及1:5000的中性红染料浓度也可获得较为稳定的染色效果；最适的中性红活体染色时间为5天。实验青虾在此染料浓度及染色时间内染色可获得较为稳定的染色效果，可用开展区分亲本青虾与秋繁苗的研究，对与减少近亲繁殖的概率，以达到青虾种质资源的保护，实现青虾养殖业的持续，健康发展起重要的作用。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。实施例3 —种亲本青虾与秋繁苗的区分方法
(1)中性红溶液的配置取中性红粉末，倒入试验缸，边搅拌边注入自来水，注水速度为50 dm3/h，搅拌速度为150r/min，配制成中性红水质量比为I : 4000的中性红溶液；
(2)青虾饲养取健康的青虾在步骤(I)配置的中性红溶液中饲养5d，饲养过程中不断充氧并喂食，每天喂食两遍；溶氧量为6. 5 mg/L ο
权利要求
1.一种亲本青虾与秋繁苗的区分方法，其特征是步骤为 (1)中性红溶液的配置取中性红粉末，倒入试验缸，边搅拌边注入自来水，注水速度为40 60 dm3/h，搅拌速度为10(T200r/min，配制成中性红水质量比为I 4000 7000的中性红溶液； (2)青虾饲养取健康的青虾在步骤(I)配置的中性红溶液中饲养6tT5d，饲养过程中不断充氧并喂食，每天喂食两遍。
2.如权利要求I所述亲本青虾与秋繁苗的区分方法，其特征是步骤(I)中注水速度为50 dm3/h，揽拌速度为 150 r/min。
3.如权利要求f2之一所述亲本青虾与秋繁苗的区分方法，其特征是所述中性红水质量比为I : 4000 5000。
4.如权利要求3所述亲本青虾与秋繁苗的区分方法，其特征是所述中性红水质量比为 I 4000、I 4500 或 I 5000。
5.如权利要求Γ4之一所述亲本青虾与秋繁苗的区分方法，其特征是步骤(2)所述饲养时间为5d，溶氧量为5 7 mg/L。
6.如权利要求5所述亲本青虾与秋繁苗的区分方法，其特征是所述溶氧量为6.5 mg/L0
全文摘要
本发明涉及一种亲本青虾与秋繁苗的区分方法，具体涉及一种通过中性红活体染色方法以区分亲本青虾与秋繁苗的方法，属于渔业繁殖技术领域。其以中性红为材料，成功摸索出了中性红青虾活体染色的最适染料浓度及最适染色时间，获得了一种效果较好的青虾活体染色方法，可用于区分青虾亲本及秋繁苗，减少近亲繁殖的概率，以达到青虾种质资源的保护，实现青虾养殖业的持续，健康发展，为青虾良种繁育奠定理论基础并促进其他活体染料在青虾活体染色中的应用。
文档编号A01K61/00GK102919171SQ20121043275
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月3日 优先权日2012年11月3日
发明者金舒博, 傅洪拓, 乔慧, 龚永生, 蒋速飞, 熊贻伟 申请人:中国水产科学研究院淡水渔业研究中心