专利名称：一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法
技术领域：
本发明涉及一种，即利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。
背景技术：
在现有技术中，长白山杜胃$花属植物包括牛皮杜胃$ {Rhododendron chrysanthumPall.)、短果杜醇{Rhododendron brachycarpum D. Don)、照白杜醇{Rhododendronmicranthum Turcz.)、小叶杜匿$ {Rhododendron parvifolium Adams.)、大字杜匿${Rhododendron schlippenbachii Maxim.)、兴安杜匿$ {Rhododendron dauricum L.)、迎红杜匿$ {Rhododendron mucronulaturn Turcz.)、毛租杜匿$ {Rhododendron confertissimumNakai)和荀叶杜醇{Rhododendron redowskianum Maxim.)等共有9个种,均为吉林省重点保护植物，其中牛皮杜鹃和苞叶杜鹃为我国国家三级保护的珍贵稀有植物，短果杜鹃为长 白山区珍贵稀有植物，牛皮杜鹃、毛毡杜鹃、照白杜鹃和小叶杜鹃是常绿灌木，短果杜鹃为常绿小乔木，兴安杜鹃为半常绿灌木。牛皮杜鹃、苞叶杜鹃和毛毡杜鹃分布海拔达2500米高，属高山杜鹃。牛皮杜鹃、大字杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、迎红杜鹃和兴安杜鹃全株挥发油含量较高，为精油和药用植物。这9种杜鹃均可通过人工引种驯化为园林绿化植物。以上9种杜鹃对水土保持和维持生态平衡起重要作用，是杜鹃花育种的种质资源。但其在我国分布甚狭，仅在长白山有较大种群分布，其它地区仅为零星分布，由于人们乱采乱挖，野生资源遭到极大威胁。这9种杜鹃花种子细小，萌发率低，萌发后形成的小苗成活率极低；扦插繁殖需要大量的野生杜鹃枝条，对野生资源破坏极大，且生根率和移栽成活率极低，开发和利用受到极大限制。目前，9种杜鹃花的离体繁殖报道较多，通过愈伤组织再分化芽苗、腋芽丛生和直接再生等途径具有增殖系数高等优点，但仍存在外植体诱导愈伤组织再分化、腋芽丛生和直接再生周期较长，获得不定芽再进一步生根速度较慢、步骤复杂、成本高、可操作性差，长期连续增殖极易发生退化和变异等缺点。
发明内容
本发明的目的是针对上述不足而提供一种方法可行、步骤简捷、成本低和繁殖速度快的利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。本发明的技术解决方案是一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(1)10月下旬采集牛皮杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5°C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为培养基+KT O. 13 O. 14mg · Γ1 + IBA 0. 05 O. 08 mg · Γ1 + NAA O. 02 O. 05 mg · Γ1 + GA3 2. 70 I. 90mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g吨―1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。—种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(1)10月下旬采集短果杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)短果杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 09 O. 12mg · Γ1 + IBA O. 03 O. 07 mg · Γ1 + NAA O. 04 O. 06 mg · Γ1 + GA3 2. 80 3. 00mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(1)10月下旬采集照白杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)照白杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 17 O. 25mg · I/1 + IAA O. 20 O. 25 mg · Γ1 + NAA O. 02 O. 05 mg · Γ1 + GA3 2. 30 2. 60mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下(1)10月下旬采集小叶杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)小叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 08 O. 12mg · Γ1 + IBA O. 15 O. 20 mg · Γ1 + NAA O. 03 O. 05 mg · Γ1 + GA3 2. 00 2. 30mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g吨―1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(1)10月下旬采集大字杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)大字杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 07 O. 10mg · Γ1 + IAA O. 20 O. 25 mg · Γ1 + NAA O. 01 O. 03 mg · Γ1 + GA3 2. 20 2. 50mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(1)10月下旬采集兴安杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)兴安杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 04 O. 07mg · I/1 + NAA O. 02 O. 04 mg · Γ1 + GA3 I. 00 I. 50 mg · Γ1 ;培养基中附加琼脂粉
7.8g· L_\添加蔗糖10. O g · L—1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 h · cf1、光照强度1000 Ix和温度23 + 2 °C条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · Γ1 (NH4)2SO4,375 mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · IZ1CaCl2 · 2H20，245 mg · IZ1MgSO4 · 7H20,436 mg · IZ1KH2PO4 ；18. 4 mg · IZ1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4mg · IZ1MnSO4 · 4H20，7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3, 0. 32 mg · IZ1KI，0. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25
mg · L-1甘氨酸。一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(1)10月下旬采集迎红杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)迎红杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 03 0.06 mg · I/1 + NAA O. 03 O. 07 mg · Γ1 + GA3 O. 09 I. 30 mg · Γ1 ;培养基中附加琼脂粉
7.8g· L_\添加蔗糖10. O g · L—1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 h · cf1、光照强度1000 Ix和温度23 + 2 °C条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · Γ1 (NH4)2SO4,375 mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · IZ1CaCl2 · 2H20，245 mg · IZ1MgSO4 · 7H20,436 mg · IZ1KH2PO4 ；18. 4 mg · IZ1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4mg · IZ1MnSO4 · 4H20，7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3, 0. 32 mg · IZ1KI，0. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(1)10月下旬采集毛毡杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)毛毡杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 08 O. 12mg · I/1 + IAA O. 12 O. 15 mg · Γ1 + NAA O. 05 O. 07 mg · Γ1 + GA3 I. 80 2. 00mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
(I)10月下旬采集苞叶杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10 -5 °C,60d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用；
(2)苞叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ KT O. 17 O. 20mg · I/1 + IAA O. 14 O. 18 mg · Γ1 + GA3 I. 30 I. 80 mg · Γ1 ;培养基中附加琼脂粉7.8 g· L_\添加蔗糖10. O g · L—1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 h · cf1、光照强度1000 Ix和温度23 + 2 °C条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · Γ1 (NH4)2SO4,375 mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · IZ1CaCl2 · 2H20，245 mg · IZ1MgSO4 · 7H20,436 mg · IZ1KH2PO4 ；18. 4 mg · IZ1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4mg · IZ1MnSO4 · 4H20，7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3, 0. 32 mg · IZ1KI，0. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。 本发明的优点是1、而相对于愈伤组织再分化芽苗、腋芽丛生和直接再生等途径，嫩茎生根和腋芽萌发生长同步进行的繁殖方式不仅成苗速度快、繁殖系数高，而且遗传稳定、步骤简捷、成本低、可操作性强，可大大提高种苗生产效率，属一步成苗，可直接应用于杜鹃花工厂化育苗。2、经统计计算，9种杜鹃花小植株成活率可达到90. 3% 98. 5%。下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
具体实施例方式利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下
以牛皮杜鹃一步成苗开展的实验为例
I材料与方法 1.1材料及处理
10月下旬，于长白山国家级自然保护区采牛皮杜鹃枝条，并将枝条用塑料袋包好后放入冰柜内低温休眠，温度控制在-10 -5 °C, 60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长。待侧芽萌发长至2. 50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用75%乙醇(体积分数)涮洗60 S，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成I叶I段作为外植体备用。1.2牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长、高频植株再生和炼苗
培养基成分和含量87 mg · Γ1 (NH4) 2S04, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245 mg · L-1MgSO4 · 7H20，436 mg · L-1KH2PO4 ；18. 4 mg · L-1FeSO4 · 7H20,24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4 mg · IZ1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20, 5. 7mg · L-1H3BO3,0. 32 mg · L-1KI，0. 05 mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · L-1 盐酸硫胺素(VB1)，0. 25mg七1烟酸，75 mg七1肌醇，0.25 mg吨―1甘氨酸。培养基中附加激动素KT (O. 03 O. 010mg *L :)、卩引噪丁酸 IBA(O. 10 O. 45 mg *L :)、蔡乙酸 NAA(O. 06 O. 13 mg .L O 和赤霉素GA3 (I. 40 2. 60 mg · L-1)，琼脂粉 7. 8 g · L—1，添加蔗糖 10.0 g · L—1，调节 pH 值至 5. 6，牛皮杜鹃嫩茎段在光照周期9 h · Cf1、光照强度1000 Ix和温度(23±2) °C条件下培养。为提高牛皮杜鹃嫩茎段生根的速度及生根率和腋芽萌发生长速度及长度，通过均匀设计法设计实验，选用U13 (134)均匀表，每个处理接种10个嫩茎段，重复3次，筛选牛皮杜鹃茎段生根和腋芽萌发生长的激动素、吲哚丁酸、萘乙酸和赤霉素最佳浓度配比。茎段培养35 d统计生根率和腋芽萌发后生长长度。生根率=(生根的茎段数/接种的茎段总数)X 100%，茎段腋芽长度为I个培养周期过程中，茎段腋芽萌发生长后的长度(不包括原茎段长度)。待茎段生根和腋芽萌发生长至3. 50 cm，腋芽发出6 8个叶时，在超净工作台上打开培养瓶，将腋芽留I叶剪下苗干，再将苗干切割成I叶I段后，再次将小茎段转接到茎段生根和腋芽萌发生长培养基中，计算出每瓶中每个茎段生根和腋芽萌发生长的平均增殖倍数和周期。当牛皮杜鹃试管苗增殖到需要的数量且小植株长至2. 00 2. 50 cm时，将小植株从培养瓶中取出，放在杀毒矾溶液(浓度为2 mg · L—1)中洗净根上的琼脂，将小植株栽植到经多菌灵(150倍液)消毒过的草炭土、腐烂松针和河砂(2: 3: I)的混合基质中，覆盖透光性能好的无滴塑料薄膜进行保湿保温，控制温度为(18±2) °C，保持相对湿度在70% 75%之间，13 h · Cf1的自然光照，湿度过高或中午温度升高时，将薄膜打开小口进行换气通风，湿度降低时，可在早上喷洒适量清水。 2结果与分析
2.I KT、IBA、NAA和GA3浓度交叉配比对牛皮杜鹃茎段生根的影响数据(表I)经均匀设计软件分析处理后可得回归方程为7=81. 8 + 22U, - 17. 5為一IllX3，显著性水平a = O. 05，复相关系数TP= O. 9536，剩余标准差S= 2. 0600，检验值&=30. 12 >临界值/Vo5J9) = 3. 863，回归方程具有显著性，激动素、吲哚丁酸和萘乙酸对茎段的生根影响具有显著性，赤霉素对茎段的生根影响不显著。通过计算激动素、吲哚丁酸和萘乙酸对生根的贡献值和贡献率可知，U1 = 256，UJU = 66. 4% 'U2 = 29. 5，UjU = 7. 66% ；U, = 48. 7，UJU= 12. 6%，但从贡献率数值来看，激动素远大于吲哚丁酸和萘乙酸对茎段生根的影响，吲哚丁酸和萘乙酸差距不大，说明吲哚丁酸和萘乙酸均在牛皮杜鹃茎段生根起不可缺少的重要作用。因激动素与生根率呈正相关，而吲哚丁酸和萘乙酸与生根率呈负相关。猜测质量浓度高于O. 10 mg · L-1的激动素，吲哚丁酸和萘乙酸质量浓度分别低于O. 10mg-T1和O. 06 mg -T1时，生根率可能更高。为验证此猜测的可能性，又以激动素为O. 10、O. 11,0. 12,0. 13,0. 14 和 O. 15 mg · Λ 吲哚丁酸质量浓度为 O. 10,0. 09,0. 08,0. 07,0. 06、O. 05,0. 04,0. 03,0. 02,0. 01 和 O. 00 mg · Γ1，萘乙酸质量浓度为 O. 06,0. 05,0. 04,0. 03、O. 02,0. 01和O. 00 mg · L—1开展11个水平的验证试验，重复3次。具体操作按I. I和I. 2方法，结果发现，激动素质量浓度为(O. 12 O. 14 mg · L—1)、吲哚丁酸质量浓度为(O. 03
O.08 mg · Γ1)和萘乙酸质量浓度为(O. 02 O. 05 mg · Γ1)时，牛皮杜鹃嫩茎段生根率最高，平均生根率达99. 9%。均高于表I所列13个处理的生根率。
表I牛皮杜鹃嫩茎段生根和腋芽萌发生长激素筛选的U13 (134)试验设计与结果Tablel U13(134)test design and result of hormone for rooting and axillarybud growing of stems of Rhododendron chrysan thum
权利要求
1.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (1)以牛皮杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为培养基+KT O. 13 O. 14mg · Γ1 + IBA O. 05 O. 08 mg · Γ1 + NAA O. 02 O. 05 mg · Γ1 + GA3 2. 70 2. 90mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g吨―1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
2.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (O以短果杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)短果杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ KT O. 09 O. 12mg · Γ1 + IBA O. 03 O. 07 mg · Γ1 + NAA O. 04 O. 06 mg · Γ1 + GA3 2. 80 3. 00mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
3.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (O以照白杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)照白杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ KT O. 17 O. 25mg · I/1 + IAA O. 20 O. 25 mg · Γ1 + NAA O. 02 O. 05 mg · Γ1 + GA3 2. 30 2. 60mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
4.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (1)以小叶杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)小叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 08 O. 12mg · Γ1 + IBA O. 15 O. 20 mg · Γ1 + NAA O. 03 O. 05 mg · Γ1 + GA3 2. 00 2. 30mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量:87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；,12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
5.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (O以大字杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)大字杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ KT O. 07 O. 10mg · Γ1 + IAA O. 20 O. 25 mg · Γ1 + NAA O. 01 O. 03 mg · Γ1 + GA3 2. 20 2. 50mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g · Λ调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；12. 4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
6.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (O以兴安杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)兴安杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+ KT O. 04 O. 07mg · I/1 + NAA O. 02 O. 04 mg · Γ1 + GA3 I. 00 I. 50 mg · Γ1 ;培养基中附加琼脂粉7.8g· L_\添加蔗糖10. O g · L—1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 h · cf1、光照强度1000 Ix和温度23 + 2 °C条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · Γ1 (NH4)2SO4,375 mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · IZ1CaCl2 · 2H20，245 mg · IZ1MgSO4 · 7H20,436 mg · IZ1KH2PO4 ；18. 4 mg · IZ1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4mg · IZ1MnSO4 · 4H20，7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3, 0. 32 mg · IZ1KI，0. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
7.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (1)以迎红杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)迎红杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 03 0.06mg · I/1 + NAA O. 03 O. 07 mg · Γ1 + GA3 O. 09 I. 30 mg · Γ1 ;培养基中附加琼脂粉7.8g· L_\添加蔗糖10. O g · L—1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 h · cf1、光照强度1000 Ix和温度23 + 2 °C条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · Γ1 (NH4)2SO4,375 mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · IZ1CaCl2 · 2H20，245 mg · IZ1MgSO4 · 7H20,436 mg · IZ1KH2PO4 ；18. 4 mg · IZ1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4mg · IZ1MnSO4 · 4H20，7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3, 0. 32 mg · IZ1KI，0. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
8.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下(1)以毛毡杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)毛毡杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 08 O. 12mg · I/1 + IAA O. 12 O. 15 mg · Γ1 + NAA O. 05 O. 07 mg · Γ1 + GA3 I. 80 2. 00mg·!/1 ;培养基中附加琼脂粉7. 8 g·!/1，添加蔗糖10.0 g吨―1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 hM'光照强度1000 Ix和温度23±2 1条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · L-1 (NH4)2SO4, 375 mg · L-1NH4NO3,180 mg · L-1KNO3, 320 mg · L-1CaCl2 · 2H20, 245mg .L-1MgSO4 ·7Η20，436 mg .L-1KH2PO4 ；18. 4 mg .L-1FeSO4 ·7Η20，24. 9 mg .L-1Na2 .EDTA ·2Η20 ；·12.4 mg · L-1MnSO4 · 4H20, 7. 2 mg · L-1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3jO. 32 mg · L-1KLO. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
9.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下 (1)以苞叶杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用； (2)苞叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是培养基+KT O. 17 O. 20mg · I/1 + IAA O. 14 O. 18 mg · Γ1 + GA3 I. 30 I. 80 mg · Γ1 ;培养基中附加琼脂粉·7.8g· L_\添加蔗糖10. O g · L—1，调节pH值至5. 6，嫩茎段在光照周期9 h · cf1、光照强度·1000 Ix和温度23 + 2 °C条件下培养茎段35 d ;培养基成分和含量87 mg · Γ1 (NH4)2SO4,·375 mg · IZ1NH4NO3,180 mg · IZ1KNO3, 320 mg · IZ1CaCl2 · 2H20，245 mg · IZ1MgSO4 · 7H20,·436 mg · IZ1KH2PO4 ；18. 4 mg · IZ1FeSO4 · 7H20, 24. 9 mg · IZ1Na2 · EDTA · 2H20 ；12. 4mg · IZ1MnSO4 · 4H20，7. 2 mg · IZ1ZnSO4 · 7H20，5. 7 mg · L^1H3BO3, 0. 32 mg · IZ1KI，0. 05mg · L-1Na2MO4 · 2H20 ；0. 3 mg · I71 盐酸硫胺素 VB1,0. 25 mg · I71 烟酸,75 mg · I71 肌醇,0. 25mg · L-1甘氨酸。
全文摘要
本发明涉及一种植物繁殖，即一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。以牛皮杜鹃为例，其步骤如下(1)10月下旬采集牛皮杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，水培促其侧芽萌发生长，处理后切割成1叶1段作为外植体备用；牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为培养基＋KT 0.13～0.14mg·L-1＋IBA0.05～0.08mg·L-1＋NAA 0.02～0.05mg·L-1＋GA3 2.70～2.90mg·L-1；具有步骤简捷、成本低、可操作性强，提高种苗生产效率，可直接应用于杜鹃花工厂化育苗。
文档编号A01H4/00GK102960250SQ20121050294
公开日2013年3月13日 申请日期2012年11月30日 优先权日2012年11月30日
发明者顾地周, 杨丽娟, 朱俊义, 姜云天, 冯颖, 郭志欣, 陆爽, 潘雨, 禚玲玲, 张学士 申请人:通化师范学院