马精液稀释液及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种马精液稀释液及其制备方法，本发明的马精液稀释液包含以下重量份的原料：葡萄糖45~75份，双糖2.5~5.5份，棉籽糖1.5~3.5份，柠檬酸钠0.4~0.8份，柠檬酸钾0.5~0.9份，Hepes9.5~9.6份，水1000份，相对于1000份水相同体积的脱脂奶，以及相对1000ml稀释液，用量为100万-300万国际单位的抗生素。其制备方法为将上述组分溶解于水中，高压灭菌，冷却，与经加热、过滤并冷却的脱脂奶混合，然后加入抗生素，密封即得。本发明的马精液稀释液可有效延长马精子的存活时间，提高保存质量和活率，提高精子的质膜完整性和顶体完整性，进而提高母马受胎率。
【专利说明】马精液稀释液及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种马精液稀释液，该马精液稀释液用于马精液稀释后常温或者低温体外保存及母马的人工授精，属于动物繁殖【技术领域】。
【背景技术】
[0002]我国是世界养马大国且资源丰富，据畜禽遗传品种志(2010)统计，我国拥有41个马种和29个驴种，但是生产方式较为落后，繁殖技术多年停滞不前，甚至有些地区出现严重倒退。近些年，随着国内马术运动、休闲骑乘及娱乐观赏马业的逐渐兴起，全国有大小型养马场、马术俱乐部、马匹改良站(点)等上万家，由国外进口的优质种公马数量有所增加，但仍无法满足我国对优质种公马育种需求日益扩大的新形势的需要，且地域分布极不平衡。由于各地运动用马繁育种马运输成本过高，严重妨碍了优质种公马的利用，亟需推广现代马属动物人工授精技术体系。
[0003]目前，马精液保存技术主要分为液态保存和冷冻保存两种。液态保存主要以低温保存为主，随着国外的马种登记委员会允许使用低温和冷冻精液配种获得的幼驹进行登记，精液低温保存运输技术得到快速发展。低温保存技术可以保证马精液在短时间内(3-5天)保持较高的活率，其受胎率与自然交配相近，故使用广泛。此外，马精液冷冻保存技术可以最大程度克服地域和时间的制约，长时间保存马品种的遗传资源。但是其应用技术推广仍远不如牛等家畜普及，主要因为很多优秀的种公马精液不适合冷冻保存，且精液冷冻制作程序较为复杂，技术性较强，解冻后精子活率较低温保存精液低，且人工授精率较鲜精低。
[0004]早期进行人工授精及精液保存时主要使用以葡萄糖或蔗糖为基础的稀释液，其保存时间短、精液保存时间也短。后改为以奶类为主的稀释液进行保存，但是其只使用奶类作为稀释液成分，未添加葡萄糖等糖类及缓冲物质来调节保存过程中稀释液的PH值变化，对精子的保存时间和质膜完整性产生不良的影响。
[0005]用于马精液保存的稀释液种类很多，大多数是以牛奶、卵黄或乳脂/明胶为基础的稀释液。虽然卵黄稀释液能够获得类似的牛奶稀释液效果，但是其制作工艺较为复杂，通常也不能提高精子质量或受胎率，因此使用较少。近些年，人们开始研究确定成分的稀释液来减少其中的有害物质，而这些物质可能同样存在于复杂的生物物质(如牛奶和卵黄)中。对于低温保存后精液质量较差的种公马，应使用不同的稀释液进行保存实验以找到最适合这匹种公马的稀释液。国内关于马精液稀释液的报道较少且较早，稀释液配制单一，效果较差；目前，国外精液保存技术已经商业化，主要的稀释液有INRA96?、INRA82、Kenney、E-Z Minxin'\Universal 等。
[0006]海藻糖是由两个葡萄糖分子构成的非还原性双糖，其在抗逆性强的生物体内含量丰富，可在极端环境(高温、高渗透压和低温)下对精子起到保护作用。人们在小鼠、兔和牛的精液冷冻保存中添加海藻糖，通过检测解冻后精子的活率、质膜完整性和顶体完整性等发现，海藻糖可显著提高精子冻后的生物功能，减少低温对其造成的损伤。人们还发现海藻糖不仅可以为精子的代谢提供能量物质，还可以在脱水精子外形成一保护膜，防止精子因脱水而受到损伤。
[0007]但是，如前所述，当用作动物精液稀释液时，稀释液的组成、渗透压、不同成分与精液的成分之间存在复杂的相互作用，甚至稀释液中不同的成分之间也存在复杂的相互作用，因而制约了其在实际生产中的应用。另外，由于动物精液中存在复杂的生理成分，对于不同的动物种类来说，同样的稀释液往往显示出相差很大的效果，其中的具体机理目前仍然有待于进一步的研究。目前，将海藻糖等双糖用于马精液稀释液具有何种效果的报道尚未见明确报道。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于针对目前国内现有技术的不足，提供一种马精液稀释液。
[0009]本发明提供的马精液稀释液，包含以下重量份的组分:
[0010]
【权利要求】
1.一种马精液稀释液，其特征在于，其原料包含以下重量份的组分:
2.如权利要求1所述的马精液稀释液，其特征在于，包含以下重量份的组分:
3.如权利要求1所述的马精液稀释液，其特征在于，所述的双糖为海藻糖、蔗糖或乳糖。
4.如权利要求1所述的马精液稀释液，其特征在于，使用的水为超纯水。
5.如权利要求1所述的马精液稀释液，其特征在于，脱脂奶为脱脂牛奶或脱脂奶粉水溶液。
6.如权利要求1所述马精液稀释液，其特征在于，其制备方法包括如下步骤: (1)将所述配比的葡萄糖、双糖、棉子糖、柠檬酸钠、柠檬酸钾和Hepes溶解于水中，高温灭菌； (2)将所述量的脱脂奶加热15~25min，用消毒纱布过滤，冷却； (3 )将步骤(1)和步骤(2 )的稀释液混合，加入抗生素，密封保存。
7.如权利要求5所述的马精液稀释液，其特征在于，所述的双糖为海藻糖、蔗糖或乳糖，所述制备过程均在无菌条件下进行。
8.如权利要求5所述的马精液稀释液，其特征在于，步骤(1)中所述配比的各组分，溶于水中，待其全部溶解后，115°C高压灭菌15-20min，冷却至30°C以下；步骤(2)中的处理参数为:取与水等体积的脱脂奶于92°C _97°C水浴加热，使用61层消毒纱布过滤，冷却至30°C以下。
9.权利要求1-8任意一项的马精液稀释液的制备方法，其特征在于，制备过程包括如下步骤: (1)将所述配比的葡萄糖、双糖、棉子糖、柠檬酸钠、柠檬酸钾和Hepes溶解于水中，高温灭菌； (2)将所述量的脱脂奶加热15-25min，并用消毒纱布过滤，冷却； (3 )将步骤(1)和步骤(2 )的稀释液混合，加入抗生素，密封保存。
10.如权利要求1-8任一所述的马精液稀释液在用于常温或冷冻保存马精液中的用途。`
【文档编号】A01N1/02GK103858858SQ201210533842
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2012年12月11日 优先权日:2012年12月11日
【发明者】韩国才, 张翔, 段洪云, 李平岁 申请人:中国农业大学