用于治疗自闭症的方法和组合物的制作方法
【专利摘要】本文公开了用于治疗自闭症的方法和组合物。本文公开了用于治疗自闭症谱系疾患(autism spectrum disorder)的方法和组合物。
【专利说明】用于治疗自闭症的方法和组合物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2011年11月11日提交的美国临时专利申请号61/558, 486、2011年 11月10日提交的美国临时专利申请号61/558, 094、以及2011年10月31日提交的美国临 时专利申请号61/553, 509的优先权，所述申请以其整体并入本文。
[0003] 关于联邦政府资助的研究的声明
[0004] 本发明根据由约翰霍普金斯麦库西克内森遗传医学研究所和公共卫生署（Johns Hopkins McKusick-Nathans Institute of Genetic Medicine and Public Health Service)授予的GM077456、HD10981和HD20961在政府的支持下完成。政府在本发明中具 有某些权利。
[0005] 背景
[0006] 自闭症（autism)是目前被归入广泛发育性疾患（Pervasive Developmental Disorders, TOD)范围内的五大疾患之一，广泛发育性疾患是一类以发育的几个区域中的 严重和广泛的损害为特征的神经疾患。自闭症是通常在前两年的生活中出现并影响大脑 行使功能的复杂的发育性残疾，影响社交互动和沟通能力的发展。在自闭症谱系（autism spectrum)上，儿童和成人均通常显示语言和非语言沟通、社交互动、和休闲或游戏活动方 面的困难。自闭症不分种族、民族或社会边界，并能影响任何家庭和任何孩子。
[0007] 来自美国疾病控制和预防中心（U. S. Centers for Disease Control and Prevention，⑶C)的自闭症统计鉴定约88分之I的美国儿童在自闭症谱系上-40年内的盛 行率（prevalence)中增长了 10倍。仔细研究表明，这种增长仅部分地通过改进的诊断和 意识被解释。研究还表明，自闭症在男孩中比在女孩中更常见，为女孩中的4至5倍。据估 计，在美国每54名男孩中的1名和252分之1的女孩被诊断患有自闭症。
[0008] 尽管自闭症谱系疾患（ASD)的基因研究方面有进展，直接治疗ASD中潜在异常的 细胞机制仍不可能。遗传相关性最多仅与?20%的ASD患者相关。这表明大量的临床异 质性，其可能由于多重细胞机制。ASD中一些临床和实验室发现结果表明，不同类型的细胞 功能障碍，包括神经炎症（Vargas等人，2005)、氧化应激（James等人，2009)、和线粒体异常 (Weissman等人，2008)、以及异常突触可塑性和连通度（connectivity) (Weng等人，2010), 涉及很多相关的、相互作用的代谢途径。
[0009] 目前用于治疗自闭症和自闭症谱系疾患的药物和治疗是针对症状的；不存在这些 药物改善核心特征（例如，社交反应（social responsiveness))或影响神经发育轨迹的证 据。因此，尽管加强努力，但是没有可用的用于治疗或预防自闭症的有效方法。
[0010] 所需要的是基于机制的策略、其靶向固有细胞应激反应并调节导致自闭症和自闭 症谱系疾患症状的代谢缺陷。
[0011] 概述
[0012] 本文公开了治疗自闭症的方法，所述方法包括向诊断患有自闭症的受试者施用 有效量的组合物，所述组合物包含在受试者的至少一个细胞中诱导普遍性细胞应激反应 (general cellular stress response)的化合物；并允许受试者的被治疗或被影响的细胞 恢复到施用化合物之前存在的细胞内稳态（cellular homeostasis)。组合物可包括药物 组合物、天然产物组合物、医疗食品、营养补充剂、或包含赋形剂、稀释剂、酶、辅因子、及递 送媒介物添加剂的组合物。用本文公开的化合物治疗受试者包括通过被治疗和/或被影响 的细胞恢复至与治疗前被治疗的细胞的状态基本上相似的状态，本文称为恢复到细胞内稳 态。在作为整体的被治疗的受试者中，受试者的自闭症或自闭症谱系疾患的症状和状态通 过此治疗被降低，从而使受试者具有减弱的、或较少的自闭症或自闭症谱系疾患的属性。
[0013] 本文公开了治疗自闭症的方法，所述方法包括向诊断患有自闭症的受试者的至少 一个细胞施用有效量的组合物，所述组合物包含在受试者的至少一个细胞中诱导普遍性细 胞应激反应的化合物；并允许细胞恢复到施用化合物之前存在的内稳态。组合物可包括药 物组合物、天然产物组合物、医疗食品、营养补充剂、或包含赋形剂、稀释剂、酶、辅因子、及 递送媒介物添加剂的组合物。
[0014] 本文公开了治疗自闭症的方法，所述方法包括向诊断患有自闭症的受试者施用有 效量的调节行为症状的可测量效果的组合物。组合物可包括药物组合物、天然产物组合物、 医疗食品、营养补充剂、或包含赋形剂、稀释剂、酶、辅因子、及递送媒介物添加剂的组合物。
[0015] 本文公开了治疗自闭症的方法，所述方法包括向诊断患有自闭症的受试者施用有 效量的调节受治疗的受试者的社交反应的组合物。组合物可包括药物组合物、天然产物组 合物、医疗食品、营养补充剂、或包含赋形剂、稀释剂、酶、辅因子、及递送媒介物添加剂的组 合物。
[0016] 本文公开了治疗一种或多种自闭症谱系疾患的方法，所述方法包括向诊断患有一 种或多种自闭症谱系疾患的受试者施用有效量的组合物，所述组合物包含在人的至少一个 细胞中诱导普遍性细胞应激反应的化合物。组合物可包括药物组合物、天然产物组合物、医 疗食品、营养补充剂、或包含赋形剂、稀释剂、酶、辅因子、及递送媒介物添加剂的组合物。
[0017] 本文公开了治疗一种或多种自闭症谱系疾患的方法，所述方法包括向诊断患有一 种或多种自闭症谱系疾患的受试者施用有效量的调节行为症状的可测量效果的组合物。组 合物可包括药物组合物、天然产物组合物、医疗食品、营养补充剂、或包含赋形剂、稀释剂、 酶、辅因子、及递送媒介物添加剂的组合物。
[0018] 本文公开了治疗一种或多种自闭症谱系疾患的方法，所述方法包括向诊断患有一 种或多种自闭症谱系疾患的受试者施用有效量的调节受治疗的受试者的社交反应的组合 物。组合物可包括药物组合物、天然产物组合物、医疗食品、营养补充剂、或包含赋形剂、稀 释剂、酶、辅因子、及递送媒介物添加剂的组合物。
[0019] 本文公开了用于确定化合物在治疗自闭症或自闭症相关的疾患中的效力的方法， 所述方法包括向第一细胞施用有效量的待被测试的化合物、比较第一细胞的反应与用诱导 普遍化的应激反应（generalized stress response)的化合物治疗的相同细胞的反应、以 及确定测试的化合物是否诱导细胞中的普遍性细胞应激反应。
[0020] 本文公开了用于治疗自闭症或一种或多种自闭症谱系疾患的医疗食品。
[0021] 本文公开了用于治疗自闭症或一种或多种自闭症谱系疾患的膳食或营养补充剂。
[0022] 本文公开了可用于组合物中以治疗自闭症或一种或多种自闭症谱系疾患的来源 于天然或合成来源的化合物。
[0023] 附图简述
[0024] 被并入并构成本说明书的一部分的附图，阐述了本发明的几个方面并与以下描述 一起用于解释本发明的原理。
[0025] 图1显示XALD和K562细胞中的有益反应涉及线粒体功能的药理学诱导。
[0026] 图2显示通过4PBA、HU、TSA、或SFN诱导的线粒体生物发生（mitochondrial biogenesis)是 JNK-依赖性的。
[0027] 图3显示通过4PBA、HU、TSA、或SFN处理诱导了热休克反应（heat shock response)〇
[0028] 图4显示通过用4ΡΒΑ、HU、TSA、或SFN处理激活解折叠蛋白反应（unfolded protein response)〇
[0029] 图5显示通过用4PBA、HU、TSA、或SFN处理诱导了自噬和抗氧化反应（autophagy and the antioxidant response)〇
[0030] 图6显示HU和SFN未抑制I类和11类组蛋白脱乙酰酶活性。
[0031] 图7显示通过4BPA、HU、TSA、和SFN在脊髓性肌萎缩成纤维细胞中诱导线粒体生 物发生。
[0032] 图8显示通过SFN诱导的FL-SMN和SMN的表达依赖于JNK途径、自噬、线粒体生 物发生、和SIRTl活性。
[0033] 图9显示生物化学SIRTl活性并非是通过4BPA、HU、TSA、和SFN诱导应激蛋白质 组所需的。
[0034] 描述
[0035] A.自闭症和自闭症谱系疾患
[0036] 自闭症谱系疾患（ASD)和自闭症两者均是指一组复杂的脑发育疾患的一般术语。 这些疾患的特点为社交互动、语言和非语言沟通以及重复性行为方面的不同程度的困难。 这些疾患包括，但不限于，自闭症疾患、Rett综合征、儿童期崩解性疾患、待分类的广泛性发 育疾患（Pervasive Developmental Disorder-Not Otherwise Specified，PDD-N0S)和阿 斯伯格综合征（Asperger syndrome)。ASD可与智力残疾、动作协调困难、以及注意力和身 体健康问题如睡眠和胃肠道功能紊乱有关。一些患有ASD的人擅长视觉技巧、音乐、数学和 艺术。（参见，例如，Wiggins等人2011，在此通过引入以其整体并入本文，并且其显示患有 ASD的青少年具有默认网络的后中心（posterior hub of the default network)和右额上 回之间的较弱的连通度）。虽然不希望受任何特定理论的约束，人们认为，自闭症谱系疾患 可起因于多种影响相关的代谢途径的非致命的遗传性疾患和表观遗传效应。
[0037] 诸如自组织映射（S0M)，以创建用于每个参与者的参考以计算连通度。我 们使用由SOM算法鉴定的个体化静息态集群以证实先前ASD组中较弱的后-前 (posterior-anterior)连通度的发现结果，及检查ASD和对照组中的年龄相关的变化。39 名患有ASD的青少年和41名对照进行10分钟、睁眼、静息态功能MRI扫描。此外，相比ASD 组，对照具有随着年龄的增长连通度中较大的增加。这些发现结果表明，SOM是用于计算临 床群体中连接度的互补方法。此外，相比对照，患有ASD的青少年具有不同的默认网络的发 育轨迹。
[0038] 在发热发作期间，38% (Miles2010)至83% (Curran等人，2007)的自闭症儿童的 行为短暂地改善。减少的刻板行为和不恰当的言语方面的改善是最显著的。改善与发热的 程度或疾病的严重程度不相关（Curran等人，2007,通过该引用以其整体被并入）。发热刺 激HSP，其对CNS中多种细胞过程，包括突触传递是重要的（Stetler等人，2010)。
[0039] 细胞应激蛋白质组是参与应答各种应激源诸如发热、辐照和缺氧途径一系列相互 作用蛋白（a complex of interacting proteins),并行使功能以再建立内稳态。应激反应 途径不是应激源特异性的，并包括细胞器生物发生、MPK信号传导、抗氧化剂产生、热休克 蛋白、解折置蛋白反应、和自噬（Stetler等人，2010)。
[0040] B.组合物
[0041] i)硫代葡糖酸盐（glucosinolate)
[0042] 本发明包括用于治疗自闭症和自闭症谱系疾患的方法和组合物，所述组合物包 含硫代葡糖酸盐。虽然不希望受任何特定理论的约束，但人们目前认为，十字花科植物的 益处是其异硫氰酸盐及其前体分子硫代葡糖酸盐的含量。硫代葡糖酸盐通过酶诸如硫葡 糖苷酶例如黑芥子酶被转化为异硫氰酸盐。通常，在植物细胞中，黑芥子酶和硫代葡糖酸 盐在细胞中被分开，且如果细胞被破坏，例如通过昆虫捕食，随着区室化丢失，黑芥子酶或 其它类似地起作用的酶与硫代葡糖酸盐接触，然后将其转化为异硫氰酸盐。黑芥子酶，EC 3. 2. 1. 147, CAS编号9025-38-1，被本领域技术人员已知为转化前体分子如硫代葡糖酸盐 为更具活性的化合物如异硫氰酸盐如莱菔硫烷的起类似作用的酶。
[0043] 本发明包括用于治疗自闭症和自闭症谱系疾患的方法和组合物，所述组合物包含 一种或多种酶、和/或一种或多种类型的酶、及任选的代谢途径中的辅因子或其它酶。本发 明涉及的酶，在本文称为本发明的酶，包括但不限于，黑芥子酶、硫葡糖苷酶、谷胱甘肽转移 酶、NAD(P)H:醌还原酶（QR)和葡萄糖醛酸基转移酶，它们具有类似的活性或在相关的途径 中。例如，如本领域已知的，在水的存在下，黑芥子酶裂解来自硫代葡糖酸盐的葡萄糖基团。 剩余的分子随后转化为硫氰酸盐、异硫氰酸盐或腈；这些是作为植物防御的活性物质。取决 于不同的生理条件诸如pH和某些辅因子的存在，硫代葡糖酸盐通过黑芥子酶或本发明的 其它酶或起类似作用的酶的水解可产生各种产物。已经观察到反应共享初始步骤。首先， 通过黑芥子酶裂解β-葡糖硫苷连键（β-thioglucoside linkage)，释放D-葡萄糖。所得 的糖苷配基经历自发的洛森状重排（Lossen-like rearrangement),释放硫酸盐。取决于 反应发生所处的生理条件，机制中的最后一步经受最大的变化。在中性pH时，主要产物是 异硫氰酸盐。在酸性条件（pH〈3)下，并且在亚铁离子或环硫特化蛋白（epithiospecifer protein)的存在下，反而腈的形成是有利的。
[0044] 提取天然产物作为化合物诸如莱菔硫烷的来源的方法，包括相对于通过化学合成 方法制备的那些，从植物来源诸如从植物来源诸如十字花科蔬菜提取的方法，包括但不限 于蔬菜在冷水中匀浆、冻干、用乙腈提取所得粉末、过滤和蒸发浓缩。从植物中提取化合物 的其它方法是本领域已知的，并涵盖在本发明中，且可以包括，例如，提取种子和芽以制备 本发明的化合物，例如由美国专利号5, 725, 895所教导的，其全部内容被并入本文。用于提 取天然产物，特别从十字花科植物提取天然产物的已知方法，包括包含沸水萃取所需化合 物的提取方法。
[0045] 虽然不希望受任何特定理论的约束，但是目前人们认为，硫代葡糖酸盐是无活性 的前体分子，其然后通过酶转化成有活性的形式，例如异硫氰酸盐诸如莱菔硫烷（其在本 文可被称为更具活性的化合物，因为该化合物在特定的分析中比其前体分子的活性更为活 跃）。本发明的组合物包括一种或多种前体化合物，诸如硫代葡糖酸盐，和/或可包括多种 活性分子例如通过针对硫代葡糖酸盐的酶活性所制造的产物，例如莱菔硫烷，或一种或多 种前体化合物和一种或多种活性化合物两者，且还可任选地包括使用前体化合物或更具活 性的化合物作为底物的一种或多种酶，和/或此类酶的辅因子。目前人们认为，在人类中， 食物中的硫代葡糖酸盐通过肠道微生物至少部分地转化至异硫氰酸盐。例如，本发明的组 合物可包含一种或多种前体化合物，诸如硫代葡糖酸盐，用于治疗自闭症和自闭症谱系疾 患。组合物还可包含一种或多种酶，其中在组合物中所提供的化合物是一种或多种酶的底 物分子。组合物可以在单一的递送媒介物提供，或可以在两种或多种递送媒介物中被提供， 其可被同时地、顺序地提供，或以其它施用方法提供。
[0046] ii)十字花科植物来源
[0047] 适于在本文所公开的方法和组合物中使用的植物来源可以是十字花科植物的任 何部分，包括但不限于细胞、种子、芽（sprout)、叶、茎（stalk)、根、花和其它植物结构。本 发明涉及的植物来源包括，但不限于，来自十字花科例如芸苔族（Brassiceae)并包括芸 苔亚族（Brassicinae)的植物。例如，植物来源可以是除了其它的以外选自以下的品种 的组的甘蓝（Brassica oleracea):羽衣甘蓝（acephala)(羽衣甘蓝（kale)、羽衣甘蓝 (collards)、甘蓝（wild cabbage)、曲羽衣甘蓝（curly kale))、髓莖甘蓝（medullosa) (髓莖甘蓝（marrowstem kale))、千头羽衣甘蓝（ramosa)(千头羽衣甘蓝（thousand head kale))、芥兰（alboglabra)(中国甘蓝（Chinese Kale))、花挪菜（botrytis)(菜花 (cauliflower)、花莖甘蓝（sprouting broccoli))、葡萄牙羽衣甘蓝（costata)(葡萄牙甘 蓝（Portuguese kale))、抱子甘蓝（gemmifera)(球芽甘蓝（Brussels sprouts))、球莖甘 蓝（gongylodes)(球莖甘蓝（kohlrabi))、花莖甘蓝（italica)(西兰花（broccoli))、泽西 羽衣甘蓝（palmifolia)(泽西羽衣甘蓝（Jersey kale))、皱叶卷心菜（sabauda)(皱叶甘 蓝（savoy cabbage))、甘蓝种萨贝利卡变种（sabellica)(羽衣甘蓝（collards))、以及甘 蓝种西兰夏变种（selensia)(羽衣甘蓝（borecole))。
[0048] 被用于本文公开的方法和组合物的有用的西兰花品种是传奇（Saga)、得西 科（DeCicco)、埃佛勒斯（Everest)、翠绿城（Emerald City)、帕克曼（Packman)、海防 舰（Corvet)、花花公子早期（Dandy Early)、皇帝（Emperor)、水手（Mariner)、绿彗 星（Green Comet)、格林福莱特（Green Valiant)、亚卡叠（Arcadia)、卡拉布利斯卡 拉维尔（Calabrese Caravel)、强斯勒（Chancellor)、希特新（Citation)、克鲁伊斯 (Cruiser)、早紫发芽红箭（Early Purple Sprouting Red Arrow)、优利卡（Eureka)、埃 克塞斯尔（Excelsior)、盖利昂（Galleon)、金加（Ginga)、哥里亚斯（Goliath)、格林杜 克（Green Duke)、格林贝尔特（Greenbelt)、意大利发芽（Italian Sprouting)、晚紫发 芽（Late Purple Sprouting)、晚冬发芽白星（Late Winter Sprouting White Star)、雷 金德（Legend)、利普里强（Leprechaun)、马拉森（Marathon)、马利娜（Mariner)、密纳利 特（Minaret (Romanesco))、帕拉宫（Paragon)、爱国者（Patriot)、普利姆克落普（Premium Crop)、拉品（Rapine(Spring Raab))、罗萨林德（Rosalind)、萨雷德（Salade(Fall Raab))、 萨姆莱（Samurai)、秀根（Shogun)、斯普林特（Sprinter)、苏丹（Sultan)、台壳（Taiko)JtI 特莱谢（Trixie)。然而，许多其它西兰花品种是适用的。
[0049] 被用于本文公开的方法和组合物的有用的菜花品种是阿佛达（Alverda)、亚美金 (Amazing)、安德斯（Andes)、布干迪葵因 （Burgundy Queen)、堪迪恰姆（Candid Charm)、 卡许美尔（Cashmere)、克里斯马怀特（Christmas White)、多密南特（Dominant)、埃尔 比（Elby)、特早雪球（Extra Early Snowball)、复利蒙特（Fremont)、因克莱（Incline)、 密克维密特曼（Milkyway Minuteman)、拉许摩尔（Rushmore)、S_207、色拉诺（Serrano)、 斯拉内华达（Sierra Nevada)、斯利亚（Siria)、斯诺克郎（Snow Crown)、斯诺福雷克 (Snow Flake)、斯诺格雷斯（Snow Grace)、斯诺布雷德（Snowbred)、苏莱德（Solide)、台 番（Taipan)、外类特葵因 （Violet Queen)、怀特巴隆（White Baron)、怀特比肖普（White Bishop)、怀特肯特萨（White Contessa)、怀特克落那（White Corona)、怀特德福（White Dove)、怀特福莱士（White Flash)、怀特福克斯（(White Fox)、怀特耐特（White Knight)、 怀特莱特（White Light)、怀特葵因 （White Queen)、怀特洛克（White Rock)、怀特塞而斯 (White Sails)、怀特萨姆（White Summer)、怀特脱普（White Top)、优肯（Yukon)。然而，许 多其它菜花品种是适用的。
[0050] iii)莱菔硫烧
[0051] 本发明的组合物包含莱菔硫烷，一种有机硫化合物（1-异硫氰酰基-4R-(甲基亚 磺酰基）丁烷），本领域已知的衍生物如二硫代氨基甲酸酯/盐（dithiocarbamate)衍生 物和本文公开的其它衍生物，和本领域已知的和/或本文所公开的类似物。莱菔硫烷是 一种毒物兴奋药物（hormetic drug),虽然不希望受任何特定理论的约束，其被认为诱导 了普遍性"细胞保护性"反应。莱菔硫烷是许多植物的活性成分，并且例如，可从西兰花芽 (broccoli sprout)中提取，或可通过化学合成方法制备。莱菔硫烧可以从冻干的、冷冻干 燥的3日龄的西兰花芽提取物获得。西兰花芽在世界各地被非常大量的个体广泛地消费， 没有任何不良作用的报道。人体实验研究也未显示由施用莱菔硫烷的任何显著的不良作 用。
[0052] 莱菔硫烷穿过血脑屏障。研究已经证明莱菔硫烷针对脑、外周神经系统、和神经细 胞的生物利用率。小鼠和大鼠的各种品系（strain)中的研究已经证明在多种施用途径后 莱菔硫烷（及其二硫代氨基甲酸酯/盐代谢物）在脑中的积累（Zhao等人，2005和Clarke 等人，2011，两者都通过此引用以其整体被并入）。
[0053] 虽然不希望受任何特定理论的约束，人们认为莱菔硫烷可提供针对氧化和炎性应 激的保护，例如针对氧化损伤、热休克保护细胞的系统的干扰、以及由蛋白质错误折叠引起 的干扰的保护。这些保护机制被认为是通过转录因子Nrf2所介导的，其经由Keapl/Nrf2/ ARE调节系统控制人类基因组的基因的表达。该系统可在许多组织包括脑中通过莱菔硫烷 被上调。（参见，例如Baird等人，2011，其通过该引用以其整体被并入）。
[0054] 数据表明，莱菔硫烷处理后，诱导了小鼠中热休克蛋白和泛素26s蛋白酶体亚基 (subunit) (Hu等人，2008)。热休克因子I(HSFl)及HSP27的表达通过莱菔硫烷被扩增。在 HeLa细胞中，莱菔硫烷上调HSP70和HSP90。其它研究已经发现，Keapl-Nrf2途径可被涉 及（Baird 等人，2011)。
[0055] 本领域熟悉莱菔硫烷类似物，其包括，但不限于以下：6_异硫氰酰基-2-己酮、 外-2-乙酰基-6-异硫氰酰基降冰片烷、外-2-异硫氰酰基-6-甲基磺酰基降冰片烷、6-异 硫氰醜基 _2_己醇、1-异硫氰醜基_4_二甲基勝醜基丁烧、外_2_(1轻基乙基）_5_异硫 氰酰基降冰片烷、外-2-乙酰基-5-异硫氰酰基降冰片烷、1-异硫氰酰基-5-甲基磺酰基戊 烷、顺-3-(甲基磺酰基）环己基甲基异硫氰酸酯和反-(甲基磺酰基）环己基甲基异硫氰 酸酯。
[0056] iv)本发明的化合物
[0057] 本发明的组合物可包含本文公开的一种或多种化合物，例如，组蛋白脱乙酰酶抑 制剂、I类和II类组蛋白脱乙酰酶抑制剂、及非组蛋白脱乙酰酶抑制剂的化合物，如羟基 脲、莱菔硫烷和/或其衍生物和类似物。本发明的组合物可包含调节细胞的普遍性细胞应 激反应的一种或多种方面的化合物。目前人们认为，一种或多种途径可参与调节细胞的普 遍性细胞应激反应，并且本发明涵盖如本文所述并如本领域通常理解的上调细胞的普遍性 细胞应激反应的化合物，包括但不限于本文公开的那些。
[0058] 例如，在一个方面，组合物包括4-苯基丁酸酯/盐（4-phenylbutyrate)。在一个 方面，组合物包括丁酸钠。在一个方面，组合物包括羟基脲。在一个方面，组合物包括莱菔 硫烷。在一个方面，组合物包括莱菔硫烷的衍生物。在一个方面，组合物包括莱菔硫烷的类 似物。在一个方面，组合物包括曲古抑菌素 A。在一个方面，组合物包括本文所公开的化合 物的组合，例如包括以下的一种或多种的组合：羟基脲、莱菔硫烷、4-苯基丁酸酯/盐、丁酸 钠、和/或曲古抑菌素 A。例如，组合物包括包含苯基丁酸酯/盐（phenylbutyrate)和丁 酸钠的组合。在一个方面，组合物包括包含苯基丁酸酯/盐和曲古抑菌素 A的组合。在一 个方面，组合物包括包含丁酸钠和曲古抑菌素 A的组合。在一个方面，组合物包括包含羟基 脲、苯基丁酸酯/盐、丁酸钠的组合。在一个方面，组合物包括包含羟基脲和莱菔硫烷的组 合。在一个方面，组合物包括包含羟基脲和莱菔硫烷的如已知的和/或本文所公开的衍生 物或类似物的组合。在一个方面，组合物包括包含羟基脲、莱菔硫烷、苯基丁酸酯/盐、丁酸 钠和曲古抑菌素 A的组合。在一个方面，组合物包括包含莱菔硫烷、苯基丁酸酯/盐、丁酸 钠和曲古抑菌素 A的组合。在一个方面，组合物包括包含莱菔硫烷衍生物或类似物，以及以 下的一种或多种的组合：苯基丁酸酯/盐、丁酸钠和曲古抑菌素 A。
[0059] 本发明的组合物可包括如由下式表示的结构所示的化合物：
[0060]
【权利要求】
1. 一种治疗自闭症或一种或多种自闭症谱系疾患的方法，所述方法包括， 向诊断患有自闭症或一种或多种自闭症谱系疾患的受试者施用有效量的组合物，所述 组合物包含在所述受试者的至少一个细胞中诱导普遍性细胞应激反应的化合物；以及 允许所述受试者的所述细胞恢复到基本上等同于施用所述化合物前所述细胞中存在 的状态的内稳态。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中在所述受试者的至少一个细胞中，应激蛋白质组 被刺激。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中在所述受试者的至少一个细胞中，增加的一氧化 氮产生被测量。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中在所述受试者的至少一个细胞中，应激感知细胞 器自所述组合物的所述施用之前的量增加。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中应激感知细胞器是线粒体。
6. 根据权利要求4所述的方法，其中应激感知细胞器是过氧化物酶体。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中普遍性细胞应激反应包括以下的至少一种：线粒 体生物发生、过氧化物酶体增殖、应激蛋白质组的激活、基因和由以下编码的蛋白质的转录 和/或翻译：包括热休克和解折叠蛋白质的基因、自噬反应的基因、抗氧化反应的基因、和 c-jun-N-末端激酶途径的基因。
8. 根据权利要求7所述的方法，其中热休克蛋白质的基因包括热休克蛋白质40、热休 克蛋白质70、和/或热休克蛋白质90家族成员。
9. 根据权利要求7所述的方法，其中解折叠蛋白质基因包括葡萄糖调节蛋白78 (BIP)、 蛋白质激酶RNA-样内质网激酶（PERK)、需肌醇酶1 (IRE1)、及激活转录因子6。
10. 根据权利要求7所述的方法，其中所述自噬反应的基因包括beclin-1 (BCN1)、自噬 蛋白质5 (ATG5)和微管相关蛋白1轻链3 (LC3或APG8)。
11. 根据权利要求7所述的方法，其中抗氧化反应的基因包括核因子红细胞2-样 2 (NFE2L2)、血红素加氧酶1 (HMOX1)和超氧化物歧化酶2 (SOD2)的表达。
12. 根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者的所述至少一个细胞位于所述受试 者的脑中。
13. 根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包括羟基脲。
14. 根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包括莱菔硫烷。
15. 根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包括莱菔硫烷衍生物、二硫代氨基甲 酸酯/盐代谢物、莱菔硫烷的类似物、或其一种或多种的组合。
16. 根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包括以下的至少一种：组蛋白脱乙酰 酶抑制剂、I类组蛋白脱乙酰酶抑制剂、II类组蛋白脱乙酰酶抑制剂、4-苯基丁酸酯/盐、 曲古抑菌素 A、羟基脲、莱菔硫烷、或类似物、衍生物或莱菔硫烷二硫代氨基甲酸酯/盐代谢 物。
17. 根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包括如由下式表示的结构所示的化 合物：
亚组或药学上可接受的盐。
18. 根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物是药物组合物、医疗食品或膳食补充 剂。
19. 一种治疗自闭症或一种或多种自闭症谱系疾患的方法，所述方法包括： 向诊断患有自闭症或一种或多种自闭症谱系疾患的受试者施用有效量的调节行为症 状的可测量效果的药物组合物。
20. 根据权利要求19所述的方法，其中有效量的所述组合物的施用调节受治疗的所述 受试者的社交反应。
21. 根据权利要求19所述的方法，其中有效量的所述组合物的施用诱导所述人的至少 一个细胞中的普遍性细胞应激反应。
22. 根据权利要求19所述的方法，其中有效量的所述组合物的施用调节行为症状的可 测量效果。
23. -种用于确定化合物在治疗自闭症或一种或多种自闭症相关的疾患中的效力的方 法，所述方法包括： 将第一细胞与有效量的测试化合物接触， 比较所述第一细胞的反应与任选地相同的第二细胞的反应，所述第二细胞与已知在所 述细胞中诱导普遍化的应激反应的化合物相接触，以及 确定所述测试化合物是否诱导细胞中的普遍性细胞应激反应。
24. 根据权利要求23所述的方法，其中所述细胞是正常人成纤维细胞。
25. 根据权利要求23所述的方法，其中所述细胞是XALD成纤维细胞。
26. 根据权利要求23所述的方法，其中所述细胞是K562细胞。
27. 根据权利要求23所述的方法，其中所述接触发生在体外。
28. 根据权利要求23所述的方法，其中所述接触发生在体内。
【文档编号】A01N47/46GK104349676SQ201280065167
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2012年10月31日 优先权日:2011年10月31日
【发明者】保罗·塔拉雷, 安德鲁·W·齐默尔曼, 柯尔比·D·史密斯 申请人:约翰霍普金斯大学