一种红翎菜外植体的消毒方法
【专利摘要】本发明公开了一种红翎菜外植体的消毒方法，包括如下步骤：以红翎菜的四分孢子体作为外植体，将外植体冲洗干净后在添加1-5μg/L的环丙沙星和50-90μg/L土霉素的VS培养液中培养24h，然后用体积浓度为0.1-0.5%的次氯酸钠溶液消毒2-5min，然后用灭菌海水冲洗数次。经本发明方法，可以获得80%的无菌外植体，为红翎菜组织培养提供充足的无菌外植体。
【专利说明】一种红翎菜外植体的消毒方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养【技术领域】，具体涉及一种红翎菜外植体的消毒方法。
【背景技术】
[0002]红翎菜是红藻门、杉藻目、红翎菜科、红翎菜属中的一种大型经济海藻，是获得卡拉胶的主要藻源。卡拉胶广泛应用于食品工业、化学工业及生化、医学研究等领域中，卡拉胶具有形成亲水胶体、凝胶、增稠、乳化、威膜、稳定分散等特性，因而被广泛应用于乳制品、冰淇淋、果汁饮料、面包、水凝胶(水果冻)、肉食品、调味品、罐头食品等方面，可调配成果冻粉、软糖粉、布丁粉、爱玉粉、西式火腿调配粉等，其独特性能是不能被其它树脂所代替，使得卡拉胶工业迅速发展，现在世界卡拉胶的年总产量已远远超过琼脂的产量。
[0003]而红翎菜主要以野生资源为主，人工栽培技术即为不成熟，限制人工栽培的主要因素是不能保证充足而稳定的种质资源。组织培养技术植物组织培养技术可以快速繁殖，周年生产，不受季节限制；种苗整齐度高，可以进行新品种培育，所需材料较少，繁殖系数大，可以在一年内由一个茎段培养出数百万种苗。海洋植物的组织培养技术比较落后，究其主要原因是无法获得大量无菌且可行的外植体，海藻主要是由细胞组成，虽然大型海藻的结构相对复杂，但是消毒剂的种类和剂量对外植体的影响非常显著，剂量高容易杀死外植体，而剂量低又不容易杀死进入到海藻细胞内部的细菌或真菌。
【发明内容】
[0004]针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种红翎菜外植体的消毒方法，为组织培养技术提供稳定而充足的外植体来源。
[0005]为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种红翎菜外植体的消毒方法，包括如下步骤:以红翎菜的四分孢子体作为外植体，将外植体冲洗干净后在添加1-5 μ g/L的环丙沙星和50-90 μ g/L 土霉素的VS培养液中培养24h，然后用体积浓度为0.1-0.5%的次氯酸钠溶液消毒2-5min，然后用灭菌海水冲洗数次。
[0006]本发明还提供一种鉴定红翎菜外植体无菌性的方法，以上述消毒方法获得的外植体作为实验对象，在实验对象的顶端部位切取长度为2-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加4g琼脂、IOg葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。
[0007]优选的，所述的环丙沙星和土霉素的浓度分别为I μ g/L,50 μ g/L,次氯酸钠的浓度为0.1%、消毒时间为2min。
[0008]优选的，所述的环丙沙星和土霉素的浓度分别为5 μ g/L、90 μ g/L,次氯酸钠的浓度为0.5%,消毒时间为5min。
[0009]优选的，所述的环丙沙星和土霉素的浓度分别为2 μ g/L、60 μ g/L,次氯酸钠的浓度为0.2%,消毒时间为3min。
[0010]优选的，所述`的环丙沙星和土霉素的浓度分别为3 μ g/L,70 μ g/L,次氯酸钠的浓度为0.3%,消毒时间为4min。
[0011]本发明的有益效果是:
在培养液中添加环丙沙星和土霉素，培养外植体的24h，然后次氯酸钠溶液消毒外植体，既可以杀死外植体细胞表面的细菌和真菌，也可以杀死外植体细胞内的细菌和真菌，并且可以维持外植体的可用性，通过本发明方法，可以获得高达80%的无菌外植体。
【具体实施方式】
[0012]以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果:
实施例1:
一种红翎菜外植体的消毒方法，包括如下步骤:以红翎菜的四分孢子体作为外植体，将外植体冲洗干净后在添加I μ g/L的环丙沙星和50 μ g/L 土霉素的VS培养液中培养24h，然后用体积浓度为0.1%的次氯酸钠溶液消毒2min，然后用灭菌海水冲洗数次。在上述消毒方法获得的外植体的顶端部位切取长度为2-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加4g琼脂、IOg葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有50块被污染，可以获得50%的无菌外植体。
[0013]实施例2:
一种红翎菜外植体的消毒方法，包括如下步骤:以红翎菜的四分孢子体作为外植体，将外植体冲洗干净后在添加5 μ g/L的环丙沙星和90 μ g/L 土霉素的VS培养液中培养24h，然后用体积浓度为0.5%的次氯酸钠溶液消毒5min，然后用灭菌海水冲洗数次。在上述消毒方法获得的外植体的顶端部位切取长度为2-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加4g琼脂、IOg葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有8块被污染，22块变黑死亡，可以获得70%的无菌外植体。
[0014]实施例3:
一种红翎菜外植体的消毒方法，包括如下步骤:以红翎菜的四分孢子体作为外植体，将外植体冲洗干净后在添加2 μ g/L的环丙沙星和60 μ g/L 土霉素的VS培养液中培养24h，然后用体积浓度为0.2%的次氯酸钠溶液消毒3min，然后用灭菌海水冲洗数次。在上述消毒方法获得的外植体的顶端部位切取长度为2-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加4g琼脂、IOg葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有12块被污染，10块变黑死亡，可以获得78%的无菌外植体。
[0015]实施例4:
一种红翎菜外植体的消毒方法，包括如下步骤:以红翎菜的四分孢子体作为外植体，将外植体冲洗干净后在添加3 μ g/L的环丙沙星和70 μ g/L 土霉素的VS培养液中培养24h，然后用体积浓度为0.3%的次氯酸钠溶液消毒4min，然后用灭菌海水冲洗数次。在上述消毒方法获得的外植体的顶端部位切取长度为2-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加4g琼脂、IOg葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。每个切段单独接种于一个培养皿中，共接种100块，其中有8块被污染，12块变黑死亡，可以获得80%的无菌外植体。
[0016]上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。`
【权利要求】
1.一种红翎菜外植体的消毒方法，其特征在于，包括如下步骤:以红翎菜的四分孢子体作为外植体，将外植体冲洗干净后在添加1-5 μ g/L的环丙沙星和50-90 μ g/L 土霉素的VS培养液中培养24h，然后用体积浓度为0.1-0.5%的次氯酸钠溶液消毒2-5min，然后用灭菌海水冲洗数次。
2.一种鉴定红翎菜外植体无菌性的方法，其特征在于，以按照权利要求1所述的消毒方法获得的外植体作为实验对象，在实验对象的顶端部位切取长度为2-5mm的切段，将切段接种于无菌检测培养基中培养I周检测无菌性；所述的无菌检测培养基的配方为，IL VS培养基中添加4g琼脂、IOg葡萄糖和IOg细菌培养用蛋白胨。
3.根据权利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的环丙沙星和土霉素的浓度分别为I μ g/L、50l.! g/L，次氯酸钠的浓度为0.1%、消毒时间为2min。
4.根据权利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的环丙沙星和土霉素的浓度分别为5 μ g/L、90 μ g/L,次氯酸钠的浓度为0.5%，消毒时间为5min。
5.根据权利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的环丙沙星和土霉素的浓度分别为2 μ g/L、60 μ g/L,次氯酸钠的浓度为0.2%，消毒时间为3min。
6.根据权利要求1所述的消毒方法，其特征在于，所述的环丙沙星和土霉素的浓度分别为3 μ g/L,70 μ g/L,次氯酸钠的浓度为0.3%，消毒时间为4min。
【文档编号】A01H4/00GK103718956SQ201310584765
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】张明 申请人:青岛佰众化工技术有限公司