一种凝花菜愈伤组织的诱导方法
【专利摘要】本发明公开了一种凝花菜愈伤组织的诱导方法，包括以下步骤：外植体暂养、外植体消毒、接种诱导、愈伤组织增殖或储存；本发明采用聚维酮碘和次氯酸钠配合使用的方法对凝花菜外植体进行消毒，可以获得大量无菌的外植体，采用本发明对凝花菜外植体进行诱导，有75%的外植体可以形成愈伤组织，愈伤组织不但可以进一步增殖，增殖的大量优质培养基可以进一步分化成再生芽或植株，愈伤组织还可以储存作为凝花菜的种质资源。
【专利说明】一种凝花菜愈伤组织的诱导方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养【技术领域】，具体涉及一种凝花菜愈伤组织的诱导方法。【背景技术】
[0002]凝花菜acerosa (Forsskal))是工业生产琼脂产品的重要原材料之一。凝花菜的琼脂凝胶产量很高，每平方厘米的叶状体的产量可以达到600g，如此高的琼脂产量使人们更青睐于用凝花菜作为提取琼脂的原材料。每年，从自然种群收获的200-300吨凝花菜干材料用来本土琼脂生产，由于生物技术工业在国内的兴起，对琼脂的需求日益增多，导致其他琼脂海藻的使用，也导致了为了满足凝花菜日益增长的市场需求而带来的过度采集。因为凝花菜分布局限，固有生长和繁殖慢，因此恢复和保护过度开发的凝花菜自然藻床的努力受抑制。因此，为了发展可行的本土的凝花菜大型养殖栽培技术，在沿海海域开展了在人工基质上栽培凝花菜。
【发明内容】
[0003]针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种凝花菜愈伤组织的诱导方法，为凝花菜无性繁殖和筛选快速生长品系提供充足的种质资源，提高凝花菜整体生产力和栽培领域的经济前景。
[0004]为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案:一种凝花菜愈伤组织的诱导方法，包括如下步骤:
(1)外植体的暂养:选择健康的、分枝少的植株用作组织培养，用手工刷去除附生植物和其他微生物；将凝花菜叶状体切成4-5cm长的切段，并将切段于添加GeO2的PES培养液的充气瓶中培养I周，培养温度保持在20-22° C，光强为白色荧光灯2000-3000LX，光照时间为12h ；
(2)外植体消毒:将步骤I中培养I周的凝花菜切段用1%的聚维酮碘浸泡l_5min，再用1%的次氯酸钠溶液浸泡l_5min,无菌海水冲洗干净；
(3)接种诱导:将步骤3中消毒后的外植体置于无菌操作台中，切成3-5_的接种段，将接种段接种于固体PES诱导培养基中诱导愈伤组织的形成，培养条件为全黑暗、温度保持在 20-22° C ；
(4)愈伤组织增殖或储存:步骤3中获得的愈伤组织用作增殖或用作种质资源储存。
[0005]进一步的，步骤I中所述的GeO2的浓度为10mg/L。
[0006]进一步的，步骤3中所述的固体PES诱导培养培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖 15-20g、琼脂 5-8g、IAAl-3mg、ΚΤ0.5_2mg。
[0007]进一步的，步骤4中所述的愈伤组织增殖培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖20-40g、琼脂5-8g、IAA 0.5-1.5mg、KT 0.2_lmg，增殖培养条件为:培养温度保持在23-25° C，光强为白色荧光灯2000-3000LX，光照时间为12h。
[0008]进一步的，所述的愈伤组织储存培养基为ILPES培养基中添加蔗糖10_15g、KT0.l-0.5mg，所述的储存条件为12-15° C，光强为白色荧光灯500_800Lx，光照时间为12h。
[0009]本发明的有益效果是:
本发明采用聚维酮碘和次氯酸钠配合使用的方法对凝花菜外植体进行消毒，可以获得大量无菌的外植体，采用本发明对凝花菜外植体进行诱导，有75%的外植体可以形成愈伤组织，愈伤组织不但可以进一步增殖，增殖的大量优质培养基可以进一步分化成再生芽或植株，愈伤组织还可以储存作为凝花菜的种质资源。
【具体实施方式】
[0010]以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果:
实施例1:
一种凝花菜愈伤组织的诱导方法，包括如下步骤:
(1)外植体的暂养:选择健康的、分枝少的植株用作组织培养，用手工刷去除附生植物和其他微生物；将凝花菜叶状体切成4-5cm长的切段，并将切段于添加浓度为10mg/LGeO2的PES培养液的充气瓶中培养I周，培养温度保持在20-22° C，光强为白色荧光灯2000-3000Lx，光照时间为 12h ；
(2)外植体消毒:将步骤I中培养I周的凝花菜切段用1%的聚维酮碘浸泡2min，再用1%的次氯酸钠溶液浸泡2min，无菌海水冲洗干净；
(3)接种诱导:将步骤3中消毒后的外植体置于无菌操作台中，切成3-5_的接种段，将接种段接种于固体PES诱导培养基中诱导愈伤组织的形成，培养条件为全黑暗、温度保持在20-22° C ;固体PES诱导培养培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖18g、琼脂6g、IAA 2mg、KT Img ;共接种100块接种段，其中有75块形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为75% ；
(4)愈伤组织增殖或储存:步骤3中获得的愈伤组织用作增殖或用作种质资源储存，增殖培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖35g、琼脂7g、IAA lmg、KT 0.5mg，增殖培养条件为:培养温度保持在23-25° C，光强为白色荧光灯2000-3000LX，光照时间为12h ;储存培养基为ILPES培养基中添加蔗糖12g、KT0.3mg，所述的储存条件为12-15° C，光强为白色荧光灯500-800LX，光照时间为12h。
[0011]实施例2:
方法同实施例1，所不同的是，固体PES诱导培养培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖18g、琼脂6g、IAA 3mg、KT 2mg ;共接种100块接种段，其中有70块形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为70%。
[0012]实施例3:
方法同实施例1，所不同的是，固体PES诱导培养培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖18g、琼脂6g、IAA Img、KT 0.5mg ;共接种100块接种段，其中有68块形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为68%。
[0013]实施例4:
方法同实施例1，所不同的是，固体PES诱导培养培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖18g、琼脂6g、IAA lmg、KT 2mg ;共接种100块接种段，其中有60块形成愈伤组织，愈伤组织诱导率为60%。
[0014] 上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实 质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种凝花菜愈伤组织的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)外植体的暂养:选择健康的、分枝少的植株用作组织培养，用手工刷去除附生植物和其他微生物；将凝花菜叶状体切成4-5cm长的切段，并将切段于添加GeO2的PES培养液的充气瓶中培养I周，培养温度保持在20-22° C，光强为白色荧光灯2000-3000LX，光照时间为12h ； (2)外植体消毒:将步骤I中培养I周的凝花菜切段用1%的聚维酮碘浸泡l_5min，再用1%的次氯酸钠溶液浸泡l_5min,无菌海水冲洗干净； (3)接种诱导:将步骤3中消毒后的外植体置于无菌操作台中，切成3-5_的接种段，将接种段接种于固体PES诱导培养基中诱导愈伤组织的形成，培养条件为全黑暗、温度保持在 20-22° C ； (4)愈伤组织增殖或储存:步骤3中获得的愈伤组织用作增殖或用作种质资源储存。
2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，步骤I中所述的GeO2的浓度为IOmg/L0
3.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，步骤3中所述的固体PES诱导培养培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖15-20g、琼脂5-8g、IAAl_3mg、KT0.5_2mg。
4.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，步骤4中所述的愈伤组织增殖培养基的配方为，ILPES培养基中添加蔗糖20-40g、琼脂5-8g、IAA 0.5-1.5mg、KT 0.2_lmg，增殖培养条件为:培养温度保持在23-25° C，光强为白色荧光灯2000-3000LX，光照时间为12h。
5.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述的愈伤组织储存培养基为ILPES培养基中添加蔗糖10-15g、 KT0.1-0.5mg，所述的储存条件为12-15° C，光强为白色荧光灯500-800Lx，光照时间为12h。
【文档编号】A01H4/00GK103733988SQ201310584618
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】张明 申请人:青岛佰众化工技术有限公司