一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基及诱导方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，特别涉及一种提高藏红花愈伤组织诱导率的 培养基，还涉及一种提高藏红花愈伤组织诱导率的诱导方法。
【背景技术】
[0002] 藏红花是一种名贵的中草药，由于其只是柱头入药，产量极低，同时又因为其资源 极其有限，但用途广泛，致使其价格昂贵，一直被誉为"植物黄金"，所以对藏红花的快速繁 殖研究极其重要。
[0003] 目前的藏红花快速繁殖方法多数采用组织培养，但是目前的组织培养第一个环节 外植体诱导中藏红花的诱导率很低，造成大量的外植体浪费，也严重影响藏红花的组培快 繁效率。
【发明内容】
[0004] 基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养 基及其诱导方法，该培养基以MS培养基为基础培养基，并添加了 PAA(苯乙酸）、6-BA(6-苄基 腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉，该方法在外植体消毒时使用PAA(苯乙酸)作为消毒剂，本 发明提供的培养基和诱导方法具有外植体成活率高、诱导率的优点。
[0005] -种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其以MS培养基为基础培养基，并添加 了 PAA(苯乙酸）、6-BA(6_苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉。
[0006] PAA(苯乙酸）的浓度为l-4mg/L、6-BA(6-苄基腺嘌呤）的浓度为2-6 mg/L、香蕉泥 的浓度为100-400 mg/L、蔗糖的浓度为30-90g/L和琼脂粉的浓度为5-8g/L。
[0007] PAA(苯乙酸）的浓度为2-3mg/L、6-BA(6-苄基腺嘌呤）的浓度为3-5 mg/L、香蕉泥 150-250 mg/L、蔗糖的浓度为40-70g/L和琼脂粉的浓度为6-7g/L。
[0008] 提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的pH值是5.5-6.5。
[0009] -种使用上述提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的诱导方法，其包括以下步 骤： 步骤SlO:取当年生的新鲜藏红花小球茎为外植体，置于-4°c冰箱中低温春化48小时， 取出小球茎用水冲洗干净，用滤纸吸干表面水分，备用； 步骤S20:将步骤SlO所得的小球茎用浓度为75%酒精摇动浸泡30秒，取出小球茎，用蒸 馏水冲洗3次，再使用1%的HgCl2浸泡4分钟，取出小球茎，用蒸馏水冲洗3次，再使用10 mg/L PAA(苯乙酸)溶液浸泡5分钟，将小球茎取出，备用； 步骤S30:将步骤S20所得的小球茎用无菌手术刀切成0.5-1厘米的小块，并接种于上述 的提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基中，并放于人工气候箱中进行常规诱导培养。
[0010] 步骤SlO还包括步骤Sll，用自来水冲洗干净表面泥土、表皮膜和病斑;步骤S12再 用蒸馏水浸泡冲洗1分钟。
[0011] 本发明的有益效果是:PAA(苯乙酸)是一种植物生长调节剂，同时具有一定的灭菌 作用，在外植体消毒先使用PAA(苯乙酸)浸泡，既可以更彻底地清理外植体表面的细菌，也 可以先一步调节藏红花球茎的生理状态，以方便后续诱导培养;另外在培养基刚添加了PAA (苯乙酸）和香蕉泥，PAA(苯乙酸）替代了常用的2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸），更好地促进外 植体脱分化，香蕉泥中具有多种维生素和天然植物激素，可以进一步促进诱导藏红花愈伤 组织。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的描述。
[0013] 实施例一:配制提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基。
[0014]根据表1所示的MS培养基成分和用量以及表2所示的提高藏红花愈伤组织诱导率 的培养基成分和用量，配制本发明所述的提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基。
[0015] 用天平称取MS培养基中的各成分以及PAA(苯乙酸）、6-BA(6-苄基腺嘌呤）、香蕉 泥、蔗糖和琼脂粉，置于三角瓶中，加入适量蒸馏水，搅拌溶解，并用HCL和KOH调节pH值至 6.0,定容至1000mL。将三角瓶封口，置于高压灭菌锅中，于121°C灭菌20min，然后置于超净 工作台中自然冷却，备用。
[0016] 将冷却到50_60°C时将培养基分装至组织培养瓶中，晾凉，待其凝固后将组织培养 瓶封口，备用。
[0017] 表1 MS培养基的成分和用量。
[0018] 表2提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基成分及用量。
[0019] 实施例二:藏红花球茎诱导培养。
[0020] 按实施例一所述的方法配制提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，备用。
[0021 ]取当年生的新鲜、健康的藏红花小球茎为外植体，置于-4°c的冰箱中低温春化48 小时，然后取出小球茎用水冲洗干净，用滤纸吸干表面水分，备用。
[0022] 将上述所得的小球茎用浓度为75%酒精摇动浸泡30秒，取出小球茎，用蒸馏水冲洗 3次，再使用1%的HgCl 2浸泡4分钟，再取出小球茎，用蒸馏水冲洗3次，再使用10 mg/L PAA (苯乙酸)溶液浸泡5分钟，将小球茎取出，备用。
[0023] 将上述所得的小球茎用无菌手术刀切成0.5-1厘米的小块，并接种于配制好的提 高藏红花愈伤组织诱导率的培养基中，每块外植体间隔1-1.5厘米，并放于人工气候箱中进 行常规诱导培养，培养环境条件是，光照/黑暗时间：14/10小时，培养温度是23°C。
[0024] 培养到30天的时候将外植体取出更换新培养基，直至70日统计愈伤组织诱导率， 到第45日开始有外植体成功诱导出愈伤组织，到70日时愈伤组织诱导率达到98%，比对照组 的诱导时间提早了 10日，且诱导率提高了 10%以上。
【主权项】
1. 一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特征在于，其以MS培养基为基础培养 基，并添加了PAA(苯乙酸）、6-BA( 6-苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉。2. 根据权利要求1所述的一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特征在于，PAA (苯乙酸）的浓度为l-4mg/L、6-BA(6-苄基腺嘌呤）的浓度为2-6 mg/L、香蕉泥的浓度为100-400 mg/L、蔗糖的浓度为30-90g/L和琼脂粉的浓度为5-8g/L。3. 根据权利要求2所述的一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特征在于，PAA (苯乙酸）的浓度为2-3mg/L、6-BA(6-苄基腺嘌呤）的浓度为3-5 mg/L、香蕉泥的浓度为150-250 mg/L、蔗糖的浓度为40-70g/L和琼脂粉的浓度为6-7g/L。4. 根据权利要求1至3其中之一所述的一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基，其特 征在于，提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的pH值是5.5-6.5。5. -种使用上述提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的诱导方法，其特征在于，其包 括以下步骤： 步骤S10:取当年生的新鲜藏红花小球茎为外植体，置于-4°C冰箱中低温春化48小时， 取出小球茎用水冲洗干净，用滤纸吸干表面水分，备用； 步骤S20:将步骤S10所得的小球茎用浓度为75%酒精摇动浸泡30秒，取出小球茎，用蒸 馏水冲洗3次，再使用1%的HgCl2浸泡4分钟，取出小球茎，用蒸馏水冲洗3次，再使用10 mg/L PAA(苯乙酸)溶液浸泡5分钟，将小球茎取出，备用； 步骤S30:将步骤S20所得的小球茎用无菌手术刀切成0.5-1厘米的小块，并接种于上述 的提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基中，并放于人工气候箱中进行常规诱导培养。6. 根据权利要求5所述的一种使用上述提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基的诱导方 法，其特征在于，步骤S10还包括步骤S11，用自来水冲洗干净表面泥土、表皮膜和病斑;步骤 S12再用蒸馏水浸泡冲洗1分钟。
【专利摘要】本发明提供一种提高藏红花愈伤组织诱导率的培养基及其诱导方法，属于植物组织培养技术领域，该培养基以MS培养基为基础培养基，并添加了PAA（苯乙酸）、6-BA（6-苄基腺嘌呤）、香蕉泥、蔗糖和琼脂粉，该方法在外植体消毒时使用PAA（苯乙酸）作为消毒剂，本发明提供的培养基和诱导方法具有外植体成活率高、诱导率的优点。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105519436
【申请号】CN201610010907
【发明人】何志铿
【申请人】佛山市金蓝领教育科技有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年1月9日