一种芦竹组织培养专用培养基及培养方法
【专利摘要】本发明提供了一种芦竹组织培养专用培养基，包含组分及含量如下：MS基本培养基、琼脂6g/l、吲哚丁酸(IBA)0.5?1mg/l、活性炭0.1?0.5mg/l、噻苯隆0.5?1mg/l。在芦竹组培繁殖过程中，本申请首次在培养基中添加了低剂量的TDZ，在增殖培养阶段，同时会产生大量的芽，增繁量为不添加TDZ的培养基时的1.3?1.5倍。
【专利说明】
一种芦竹组织培养专用培养基及培养方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，主要涉及一种芦竹组织培养过程中提高繁殖 效率专用培养基及培养方法。
【背景技术】
[0002] 目前，芦竹(Arundo donax)为禾本科芦竹属多年生高大丛生草本植物，具有发达 的根状茎。其适应能力强，对盐碱、干旱、贫瘠具有一定的忍耐力，被称为低洼盐碱地的"先 锋植物"。芦竹不仅具有防治土壤退化和增加土壤含碳量及有机质的生态效益，对于修复湿 地重金属污染也具有较大潜力。近年来，芦竹作为清洁生物能源的利用价值也在逐渐受到 人们的重视，多年生草本木质纤维素植物被认为最符合生物质生物能源生产。
[0003] 由于芦竹不能靠种子繁育，传统的分蘖繁殖，远不能满足园林需求及生态需求。因 此，利用植物组织培养技术通过研发专用培养基及培养方法，加速芦竹的繁殖周期，提高繁 殖效率，是芦竹大规模工厂化生产关键。
【发明内容】
[0004] 为解决上述【背景技术】中存在的繁殖效率低的问题，本发明提供了一种芦竹组织培 养过程中提高繁殖效率专用培养基及其芦竹的培养方法。
[0005] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0006] -种芦竹组织培养专用培养基，包含组分及含量如下：
[0007] MS基本培养基、琼脂6g/l、吲哚丁酸（IBA)O · 5-lmg/l、活性炭0 · 1-0 · 5mg/l、噻苯隆 (TDZ)0.5-lmg/l。
[0008] -种利用上述专用培养基的芦竹组织的培养方法，包括如下步骤：
[0009] (1)外植体的选择和消毒
[0010] 选取芦竹腋芽作为外植体，在流水下冲洗1.5-3小时后，移入超净工作台中，在70-75%的酒精中浸泡20-60秒，移入装有次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡5-7分钟，再用 无菌水冲洗2-5次；
[0011] (2)接种及无菌系的培养
[0012] 在无菌条件下，切取0.5-2cm带芽茎段，接种到装有专用培养基的培养瓶中，13-15 天后，获得无菌系；
[0013] ⑶转接与扩繁
[0014] 将步骤（2)的无菌系中的无菌芽在无菌条件下剥取5-10毫米带顶端生长点的组 织，接种在专用培养基上，进行增殖培养，3-4周重复继代一次；
[0015] ⑷生根培养及驯化
[0016] 取步骤(3)中获得的无菌芽2-3株为一组移至生根培养基中，继续培养2-3周后将 植株取出洗净使用多菌灵稀释液浸泡5-20分钟后，移栽至育苗基质中，之后采用50%遮阳 率的遮阳网遮光7-10天。
[0017] 优选地，所述步骤(1)中次氯酸钠溶液的浓度为5-10%。
[0018] 优选地，所述次氯酸钠溶液的浓度为8%。
[0019] 优选地，所述步骤(2)中的无菌系培养条件:光照强度为2500-30001US，温度为白 天25°C，夜间16°C，光照时间为11小时/天。
[0020] 优选地，所述专用培养基为权利要求1所述的芦竹组织培养专用培养基。
[0021] 优选地，所述步骤(3)中专用培养基的容器为10*13cm不透气培养袋。
[0022]优选地，所述步骤(4)中生根培养基的容器为10*13cm不透气培养袋。
[0023]优选地，所述步骤(4)中的多菌灵稀释液的浓度为0.1-0.3%。
[0024]优选地，所述步骤（4)中生根培养基成分为MS基本培养基、0.1-0.3mg/l萘乙酸 (NAA)、0 · 3-0 · 8mg/l活性炭。
[0025]本发明的有益效果：
[0026] 1、在芦竹组培繁殖过程中，首次在培养基中添加了低剂量的TDZ，对芦竹芽萌发具 有明显的促进作用;在增殖培养阶段，同时会产生大量的芽，增繁量为不添加 TDZ的培养基 时的1.3-1.5倍;TDZ浓度在0.5-lmg/l芦竹不定芽萌发具有明显的促进作用。接种后7-10天 在培养基上就可见在接种芽的基部有不定芽发生，3-4周可形成丛生芽诱导生成，继代周期 缩短1-2周。TDZ浓度低于0.5mg/l，外植体表现为高度的增加与叶片的增长，仅有少量芽发 生。TDZ浓度高于lmg/1培养基内的幼苗则开始出现组织玻璃化现象（即幼苗的叶、嫩梢水浸 状，呈水晶状半透明，植株矮小，失绿，叶片皱缩卷曲，脆弱易碎）。
[0027] 2、在增殖培养阶段，采用10*13cm培养袋作为培养容器，将继代周期从4-5周缩短 到3-4周，加快了繁殖速度；
[0028] 3、本发明能够显著提高芦竹的繁殖效率，为降低组培成本，为芦竹工厂化规模生 产奠定了坚实的基础。
【具体实施方式】
[0029] 为了更好地说明本发明，下面结合本发明实施例对本发明的技术方案进行清楚、 完整地描述。
[0030] 实施例1
[0031] 一种芦竹组织培养专用培养基，包含组分及含量如下:MS基本培养基、琼脂6g/l、 口引噪丁酸（IBA)0.8mg/l、活性炭0.3mg/l;噻苯隆：lmg/1。
[0032] -种芦竹组织培养过程中提高繁殖效率的培养方法，步骤如下：
[0033] 1、外植体的选择和消毒
[0034]选取饱满无病害的芦竹的腋芽作为外植体，在流水下冲洗2小时后，移入超净工作 台中，在75%的酒精中浸泡30秒，移入装有8%的次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡6分 钟，再用无菌水冲洗4次；
[0035] 2、接种及无菌系的建立
[0036]在无菌条件下，切取lcm带芽茎段，接种到装有上述专用培养基的培养瓶中。2周 后，茎段上芽点萌发膨大，获得无菌系；
[0037] 3、转接与扩繁
[0038]将上述步骤获得的无菌系中的的无菌芽在无菌条件下剥取6毫米带顶端生长点的 组织，接种在上述专用培养基上，培养容器更换为l〇*13cm培养袋，培养袋不透气，进行增殖 培养，3周重复继代一次；
[0039] 4、生根培养及驯化
[0040] 将上述步骤获得无菌芽2-3株为一组转至生根培养基中，生根容器为10*13cm培养 袋，继续培养2周后将植株取出洗净培养基，使用0.1 %多菌灵浸泡10分钟后，移栽至育苗基 质中。之后采用50%遮阳率的遮阳网遮光10天。移栽45天后完成驯化过程。生根培养基的成 分为MS基本培养基、0.1mg/l萘乙酸(NAA)、0.5mg/l活性炭。
[0041 ] 实施例2
[0042] 一种芦竹组织培养专用培养基，包含组分及含量如下:MS基本培养基、琼脂6g/l、 口引噪丁酸（IBA)lmg/l、活性炭0· lmg/1;噻苯隆:0.8mg/l。
[0043] -种芦竹组织培养过程中提高繁殖效率的培养方法，步骤如下：
[0044] 1、外植体的选择和消毒
[0045] 选取饱满无病害的芦竹的腋芽作为外植体，在流水下冲洗2.2小时后，移入超净工 作台中，在73 %的酒精中浸泡40秒，移入装有8 %的次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡5 分钟，再用无菌水冲洗5次；
[0046] 2、接种及无菌系的建立
[0047] 在无菌条件下，切取2cm带芽茎段，接种到装有上述专用培养基的培养瓶中。13天 后，茎段上芽点萌发膨大，获得无菌系；
[0048] 3、转接与扩繁
[0049]将上述步骤获得的无菌系中的的无菌芽在无菌条件下剥取5毫米带顶端生长点的 组织，接种在上述专用培养基上，培养容器更换为l〇*13cm培养袋，培养袋不透气，进行增殖 培养，4周重复继代一次；
[0050] 4、生根培养及驯化
[0051] 将上述步骤获得无菌芽2-3株为一组转至生根培养基中，生根容器为10*13cm培养 袋，继续培养2周后将植株取出洗净培养基，使用0.1 %多菌灵浸泡15分钟后，移栽至育苗基 质中。之后采用50%遮阳率的遮阳网遮光10天。移栽45天后完成驯化过程。生根培养基的成 分为MS基本培养基、0.1mg/l萘乙酸(NAA)、0.5mg/l活性炭。
[0052]本申请实施例1-2与普通培养基的对比试验统计表
[0053]
[0054] 以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换， 都应该涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护 范围为准。
【主权项】
1. 一种芦竹组织培养专用培养基，其特征在于，包含组分及含量如下： MS基本培养基、琼脂6g/l、吲哚丁酸（IBA)0.5-lmg/l、活性炭0.1-0.5mg/l、噻苯隆 (TDZ)0.5-lmg/l。2. -种利用权利要求1所述专用培养基的芦竹组织的培养方法，其特征在于，包括如下 步骤： (1) 外植体的选择和消毒 选取芦竹腋芽作为外植体，在流水下冲洗1.5-3小时后，移入超净工作台中，在70-75% 的酒精中浸泡20-60秒，移入装有次氯酸钠溶液的超声波清洗机中震荡5-7分钟，再用无菌 水冲洗2-5次； (2) 接种及无菌系的培养 在无菌条件下，切取〇.5-2cm带芽茎段，接种到装有专用培养基的培养瓶中，13-15天 后，获得无菌系； (3) 转接与扩繁 将步骤(2)的无菌系中的无菌芽在无菌条件下剥取5-10毫米带顶端生长点的组织，接 种在专用培养基上，进行增殖培养，3-4周重复继代一次； (4) 生根培养及驯化 取步骤(3)中获得的无菌芽2-3株为一组移至生根培养基中，继续培养2-3周后将植株 取出洗净使用多菌灵稀释液浸泡5-20分钟后，移栽至育苗基质中，之后采用50%遮阳率的 遮阳网遮光7-10天。3. 根据权利要求2所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述步骤（1)中次氯酸钠 溶液的浓度为5-10 %。4. 根据权利要求3所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述次氯酸钠溶液的浓度 为8% 〇5. 根据权利要求2所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中的无菌系 培养条件:光照强度为2500-30001us，温度为白天25°C，夜间16°C，光照时间为11小时/天。6. 根据权利要求2所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述专用培养基为权利要 求1所述的芦竹组织培养专用培养基。7. 根据权利要求2所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中专用培养 基的容器为l〇*13cm不透气培养袋。8. 根据权利要求2所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述步骤(4)中生根培养 基的容器为l〇*13cm不透气培养袋。9. 根据权利要求2所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述步骤(4)中的多菌灵 稀释液的浓度为0.1-0.3%。10. 根据权利要求2所述的芦竹组织的培养方法，其特征在于，所述步骤(4)中生根培养 基成分为MS基本培养基、0 · 1-0 · 3mg/l萘乙酸(NAA)、0 · 3-0 · 8mg/l活性炭。
【文档编号】A01H4/00GK106069754SQ201610429725
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月16日
【发明人】杨硕, 刘宝平, 李静, 刘敏, 鹿金颖, 刘次次
【申请人】北京神舟绿鹏农业科技有限公司