一种无病毒草莓的培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种无病毒草莓的培养方法，涉及草莓种植技术领域，根据病毒在植物体内分布不均匀的理论，植物茎尖分生组织一般不带病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的茎尖分生组织，带1?2个叶原基，进行培养，即可得到无病毒苗，故而无需进行病毒鉴定工作即可进行扩大繁殖；本发明具有如下优点：其一是人为的控制生长条件，不受自然条件的影响；其二是不受草莓体其他部分干扰的情况下，研究被培养的茎尖、茎段生长和分化规律；其三是取材量小，培养材料经济；其四是生长周期短，繁殖系数大；其五是管理方便，可采用自动化生产；其六是脱去病毒，实现快速繁殖，保持种质资源；其七是产量高、品质好、耐储运，为草莓的进一步研究提供了科技支撑。
【专利说明】
一种无病毒草莓的培养方法
技术领域
[0001]本发明涉及草莓种植技术领域，更具体的说是涉及一种无病毒草莓的培养方法。 【背景技术】
[0002]草莓为重要的浆果植物，栽培分布很广，其总产量在浆果类中仅次于葡萄，居世界第二位。草莓果实柔软多汁，含丰富的糖、酸、矿物质，维生素等。草莓可鲜食，也可加工成果酱，果酒等。其颜色鲜艳，是良好的配餐食品。草莓繁殖容易，结果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光温室，使草莓的成熟期大大缩短，从11月份到次年的6月份， 都有新鲜的草莓上市，填补了水果的淡季市场。
[0003]作为多年生草本的草莓，过去常规的栽培方法是:(1)用分枝进行繁殖，育苗率较低，发展迟缓；(2)以种子繁育幼苗。利用种子繁殖，后代出现严重的分离现象，其外部形状、 品质、营养含量以及生长速度等都存在着不一致性。草莓在我国的种植面积居世界之首。但产量和总体生产水平与发达国家相比还存在着一定差距，表现为:(1)无病毒苗繁殖体系建立不完善，农民自繁自育，反复留种，致使种苗退化，病害滋生蔓延；(2)生产和流通渠道缺乏组织管理，产业化水平低，新技术、新品种推广应用慢，保鲜滞后，商品果率低；(3)品种杂乱，盲目引种，给农户造成损失，草莓研究和育种工作跟不上生产发展；(4)平均产量不高， 农药残留超标，栽培方式落后，缺乏配套设施，草莓深加工发展慢。总之我国与发达国家的差距是反映在产量和品质上。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种无病毒草莓的培养方法，采用无病毒培育法，以提高我国草莓的产量和品质。
[0005]为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案:
[0006]—种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，包括如下步骤:
[0007](1)热处理脱毒:将草莓植株在40?41°C温度下热处理4?6周，然后取微茎尖培养；
[0008](2)微茎尖脱毒:a.初代培养，取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2?4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒 5min，并不停地搅动促进药液的渗透，在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度，茎尖分离后，迅速接入MS+6-苄氨基嘌呤0.25mg/L+萘乙酸 0.25mg/L的培养基中直至培养出含20?30个小芽的芽丛，培养条件为22?25°C，日照16? 18h光强30001x;b.继代培养，把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，待苗长大至IJ1?2cm时，将芽丛小块分成单株，再转入前述步骤a中的培养基中，重复上述过程，扩大繁殖;c.生根培养，在培养基中加入萘乙酸，使发根整齐，将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根;d.驯化，用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的培养基，事先备好8 X 8cm或6 X 6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂，栽前压实，浇透水，用足签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合，直至根系生出，逐渐降低湿度和土壤含水量；
[0009](3)花药培养，包括取材、培养以及植株分化三个步骤，取花粉发育单核期的花蕾， 置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，将培养皿的花蕾放入3?4°C冰箱中低温保存3?4天，经低温保存处理后的花蕾先在70%酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒lOmin，再用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台上剥取花药，立即接种，培养条件为24?26°C，日照10h，光强15001x，20天后产生乳白色的愈伤组织，将诱导出的花药愈伤组织转移至MS培养基，添加GA0.5、BA0.5和三十烷醇4，愈伤组织经培养后转绿，以后微带淡紫红色，15天后在表面分化出半球形小突起，转为绿色，20天后分化出幼叶、幼茎，并有突起物，再分化出新梢，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。
[0010]更优的，所述MS培养基的重量百分比组分为:30-35%的硝酸铵、40-42%的硝酸钾、7-8 %的硫酸镁、8-10 %的二水氯化钙、3.5-4 %的磷酸二氢钾、1.2-1.5 %的铁盐、0.05-0.1 %的微量元素，余量为有机物，所述铁盐为质量比为55:45的EDTA二钠、硫酸亚铁，所述微量元素由碘化钾、硼酸、一水硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴的一种或多种组成， 所述有机物由肌醇、烟酸、VB6、VB1、甘氨酸的一种或多种组成。
[0011]更优的，所述MS培养基所有溶质的总浓度为4.5g/L-5.0g/L。[0〇12]更优的，所述MS培养基的PH值为5.8，采用1当量的氢氧化钠和1当量的盐酸调节PH 值。
[0013]与现有技术相比，本发明的有益效果是:[0〇14]1、本发明根据病毒在植物体内分布不均勾的理论，植物莖尖分生组织(生长点)一般不带病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的茎尖分生组织，带1-2个叶原基，进行培养，即可得到无病毒苗，故而无需进行病毒鉴定工作即可进行扩大繁殖；
[0015]2、草莓的组织培养是在预知的控制条件下，放在含有植物营养物质和生长调节物质的培养基中，使其生长、分化，形成完整植株的过程培养，故而具有如下优点:其一是人为的控制生长条件，不受自然条件的影响;其二是不受草莓体其他部分干扰的情况下，研究被培养的茎尖、茎段生长和分化规律;其三是取材量小，培养材料经济;其四是生长周期短，繁殖系数大;其五是管理方便，可采用自动化生产;其六是脱去病毒，实现快速繁殖，保持种质资源;其七是产量高、品质好、耐储运；
[0016]3、为草莓的进一步研究提供了科技支撑。【具体实施方式】
[0017]本发明的应用原理、作用与功效，通过如下实施方式予以说明。
[0018]实施例1
[0019]—种无病毒草莓的培养方法，具体操作如下:
[0020](1)准备培养基
[0021]MS培养基，包括8种等体积的母液，其配制方法为:分别称取硝酸铵165g、硝酸钾 190g、硫酸镁37g、二水氯化钙40g、磷酸二氢钾17g，分别配成5种1L的母液，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等;各称取EDTA二钠3.73g、硫酸亚铁2.78g， 配成1L铁盐母液，用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等;各称取碘化钾83mg、硼酸620mg、一水硫酸猛1690mg、硫酸锌860mg、钼酸钠25mg、硫酸铜2.5mg、氯化钴 2.5mg，配成1L微量元素母液，用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等；各称取肌醇l〇g、烟酸50mg、VB6 50mg、VBl 10mg、甘氨酸200mg,配成1L有机物母液，用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等；[〇〇22] 植物生长调节物质的配制:萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)，分别配成lmg/mL 的母液，分别称取这2种物质各100mg，NAA用少量乙醇溶解，6-BA用少量的NaOH溶液，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至10 OmL，即得1 mg/mL的母液；
[0023]用酸度计或PH试纸测溶液PH值(用1当量的氢氧化钠和1当量的盐酸调节PH值直到培养基的pH为5.8为止)，培养基的pH必须严格控制在5.8。[〇〇24] (2)草莓植株的热处理脱毒:将草莓植株在40?41°C温度下热处理4?6周，然后取微茎尖培养；
[0025] (3)微茎尖脱毒:a.初代培养，取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2?4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒 5min，并不停地搅动促进药液的渗透，在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以 0.1毫米左右、带有一个叶原基的茎尖为度，茎尖分离后，迅速接入MS+6-苄氨基嘌呤 0.25mg/L+萘乙酸0.25mg/L的培养基中直至培养出含20?30个小芽的芽丛，培养条件为22 ?25°C，日照16?18h光强30001x;b.继代培养，把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，待苗长大到1?2cm时，将芽丛小块分成单株，再转入前述步骤a中的培养基中，重复上述过程，扩大繁殖;c.生根培养，在培养基中加入萘乙酸，使发根整齐，将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根;d.驯化，用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的培养基，事先备好8 X 8cm或6 X 6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂，栽前压实，浇透水，用足签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合，直至根系生出，逐渐降低湿度和土壤含水量；
[0026] (4)花药培养，包括取材、培养以及植株分化三个步骤，取花粉发育单核期的花蕾， 置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，将培养皿的花蕾放入3?4°C冰箱中低温保存3?4天，经低温保存处理后的花蕾先在70%酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒l〇min，再用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台上剥取花药，立即接种，培养条件为24?26°C，日照10h，光强15001x，20天后产生乳白色的愈伤组织，将诱导出的花药愈伤组织转移至MS培养基，添加GA0.5、BA0.5和三十烷醇4，愈伤组织经培养后转绿，以后微带淡紫红色，15天后在表面分化出半球形小突起，转为绿色，20天后分化出幼叶、幼茎，并有突起物，再分化出新梢，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。
[0027]如上所述即为本发明的实施例。本发明不局限于上述实施方式，任何人应该得知在本发明的启示下做出的结构变化，凡是与本发明具有相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，包括如下步骤:(1)热处理脱毒:将草莓植株在40?41°C温度下热处理4?6周，然后取微莖尖培养；(2)微茎尖脱毒:a.初代培养，取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流 水冲洗2?4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒5min，并 不停地搅动促进药液的渗透，在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个 叶原基的茎尖为度，茎尖分离后，迅速接入MS+6-苄氨基嘌呤0.25mg/L+萘乙酸0.25mg/L的 培养基中直至培养出含20?30个小芽的芽丛，培养条件为22?25°C，日照16?18h光强 30001x;b.继代培养，把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，待苗长大到1?2cm 时，将芽丛小块分成单株，再转入前述步骤a中的培养基中，重复上述过程，扩大繁殖;c.生 根培养，在培养基中加入萘乙酸，使发根整齐，将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出 进行试管外生根;d.驯化，用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的培养基，事先 备好8 X 8cm或6 X 6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂，栽前压实，浇透水，用足签 在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基 部和基质密合，直至根系生出，逐渐降低湿度和土壤含水量；(3)花药培养，包括取材、培养以及植株分化三个步骤，取花粉发育单核期的花蕾，置于 洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，将培养皿的花蕾放入3?4°C冰箱中低温 保存3?4天，经低温保存处理后的花蕾先在70%酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱 和漂白粉上清夜中消毒l〇min，再用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台上剥取花药，立即接 种，培养条件为24?26°C，日照10h，光强15001x，20天后产生乳白色的愈伤组织，将诱导出 的花药愈伤组织转移至MS培养基，添加GA0.5、BA0.5和三十烷醇4，愈伤组织经培养后转绿， 以后微带淡紫红色，15天后在表面分化出半球形小突起，转为绿色，20天后分化出幼叶、幼 茎，并有突起物，再分化出新梢，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。2.如权利要求1所述的一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，所述MS培养基的重量 百分比组分为:30-35 %的硝酸铵、40-42 %的硝酸钾、7-8%的硫酸镁、8-10 %的二水氯化 钙、3.5-4 %的磷酸二氢钾、1.2-1.5 %的铁盐、0.05-0.1 %的微量元素，余量为有机物，所述 铁盐为质量比为55:45的EDTA二钠、硫酸亚铁，所述微量元素由碘化钾、硼酸、一水硫酸锰、 硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴的一种或多种组成，所述有机物由肌醇、烟酸、VB6、VB1、甘 氨酸的一种或多种组成。3.如权利要求2所述的一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，所述MS培养基所有溶 质的总浓度为4.5g/L-5.0g/L。4.如权利要求1或2或3所述的一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，所述MS培养基 的PH值为5.8，采用1当量的氢氧化钠和1当量的盐酸调节PH值。
【文档编号】A01H4/00GK106069750SQ201610410190
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月13日
【发明人】冯继广, 程海洋
【申请人】四川省苗源生态农业科技有限公司