专利名称：植物组织培养生产草莓苗的方法
技术领域：
本发明涉及一种通过植物组织培养生产草莓苗的方法。具体讲是以植物组织培养技术为手段，通过在一定的培养基上培养草莓叶片，并获得大量再生草莓苗的方法。本发明属于农业生物技术领域。
背景技术：
草莓(Fragaria×ananassa Duch.)属蔷薇科草莓属多年生草本植物，其浆果是营养价值极其丰富、经济价值很高的上等果品，素有“水果皇后”之称，不仅含有比其他水果高十倍的维生素，而且果实中所含的鞣花酸具有抗癌效果，因此在欧美市场十分畅销，售价是苹果的五倍，葡萄的二倍，仍供不应求。日本、东南亚和欧美国家都要求从我国每年进口上万吨速冻草莓，是我国唯一的出口水果。这是因为在日本、东南亚和欧美国家，劳动力价值很高，在日本每生产1公斤草莓需要的成本就达到20元人民币。而从我国进口1公斤草莓包括运费在内仅为10元。因此日本、东南亚和欧美国家都纷纷要求扩大草莓进口。所以大力发展我国草莓生产，满足日益增长的出口需求将是利国富民、生产扶贫的重要举措。长期以来，虽然通过常规育种对草莓产量、果实大小及品质等方面有所改良，但栽培草莓是高度的杂和体，遗传上又存在多倍性，因此这种改良是缓慢的，也是有限的。同时，远缘杂交的不亲和性及有限的基因资源也阻碍了常规杂交育种的进程，尤其在培育抗病毒、抗真菌、抗除草剂、抗逆境、耐储藏等草莓品种方面，都因找不到适合的亲本而难以实现。而要解决这些草莓生产上长期面临的问题，就需要育种工作者开辟新的技术路线，创造新的育种途径。因此，为了扩大草莓市场占有量，追求低成本，高品质和高效益，开发新的繁育方式，已成为当今草莓市场发展的热点问题.运用细胞工程手段，通过植物组织培养方法快速繁殖草莓，固定杂种优势，保持品种特异性，实践证明是可行的.利用草莓组织在合适的培养基上进行离体繁殖，可加快品种繁殖速度，扩大种源生产，保持优良品种的性状，用较少得空间，较少个体和较少时间可获得遗传上与亲本植株相同的大量再生无毒苗.这种繁殖方式为草莓的产业化发展开拓了一条有效途径，其社会效益和经济效益是巨大的.
我们经多年的时间，在分析、研究国内外草莓研究成果的基础上，系统地研究了植物组织细胞培养技术应用到草莓生产的理论、工艺及可行性，包括从材料选择、外植体诱导、高频再生和定植等过程，完成了实验室和中试研究，使下一步产业化更具有实际意义，并为此提供了可能与保障。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高植物组织培养草莓苗生产率，使其达到产业化水平。本项目经多年研究，根据植物叶片再生原理，首创了以叶片为外植体，建立高频稳定再生体系。为实现本发明的目的，采用下述技术方案选择具有30——45天苗龄的草莓幼嫩叶片，在其叶片中部切断，近轴面向下至于再生培养基上诱导胚状体发生。在上述基础上，叶片再生不定芽培养15天为一个周期。
培养温度25℃±1，光照强度2500lux，光照时间14h/d。
诱导和再生培养基组成是MB基本培养基，即MS培养基的大量元素B5培养基的微量元素组合，同时附加6-BA 0——4.0mg/l，IBA0——1.5mg/l。
再生的草莓苗培养40天后，可直接转到MB培养基上生根。
所添加的6-BA、IBA用量为6-BA 0-4.0mg/l、IBA 0——1.5mg/l。
上述的培养基中需添加蔗糖1.5-3.0％，并调PH值4.5-6.5。
上述的培养条件为14h/d光照，2500Lx光照强度，温度25℃±1。
本发明的最佳离体再生培养条件是MB培养基附加6-BA 3.0mg/l+IBA 0.5mg/l+蔗糖2.5％。
本发明提供了一种草莓离体快繁的方法，是在MB培养基上培养草莓叶片，再生草莓幼苗，得到草莓无性系。草莓再生率达到97.0％以上，生根率达100％。该方法不仅能明显提高草莓再生苗的数量和质量，具有生产成本低、不污染环境，达到产业化水平的特点，其发展前景十分看好。
实施例本项技术以不同基因型品种哈尼，宝交，丽宝，丰香，美香莎和早丰进行培养。外植体均选择具有30——45天苗龄的草莓幼嫩叶片。在无菌下将其叶片中部切断，近轴面向下至于再生培养基MB附加6-BA 3.0mg/l mg/l+IBA0.5mg/l+蔗糖2.5％上，PH值为5.5±1。培养15天后叶片再生不定芽。在再生培养基MB上进行继代培养，再生苗约培养40天后，可直接转到MB培养基上生根。整个培养过程条件为培养温度25±1℃，光照强度2500lux，光照时间14h/d。
不同品种叶片在MB培养基上的再生结果品种 单叶片平均再生芽数 平均再生频率(％) 生根率(％)哈尼 15.4 99.6 100宝交 13.0 97.1 100丽宝 12.8 97.0 100丰香 14.7 98.8 100美香莎 13.5 97.5 100早丰 13.3 97.3 100在MB培养基上6个草莓品种的单叶片平均再生芽数在13％以上，平均再生率在97％以上，再生苗生根率均达到100％。
权利要求
1.一种植物组织培养生产草莓苗的方法，其特征在于该方法包括在MB培养基上进行叶片培养，在MB培养基上进行继代培养，获得草莓无性系。
2.根据权利要求1所述的植物组织培养生产草莓苗的方法，其特征是选取的草莓叶片是具有30——45天苗龄的幼嫩叶片，在其叶片中部切断，近轴面向下至于再生培养基上。
3.根据权利要求1所述的植物组织培养生产草莓苗的方法，其特征是叶片再生不定芽培养15天为一个周期。
4.根据权利要求1所述的植物组织培养生产草莓苗的方法，其特征是培养温度25±1℃，光照强度2500lux，光照时间14小时/天。
5.根据权利要求1所述的植物组织培养生产草莓苗的方法，其特征是诱导和再生培养基组成是MB基本培养基，即MS培养基的大量元素B5培养基的微量元素组合，同时附加6-BA O——4.Omg/l，IBA 0——1.5mg/l。
6.根据权利要求1所述的植物组织培养生产草莓苗的方法，其特征是PH值为5.5±1。
7.根据权利要求1所述的植物组织培养生产草莓苗的方法，其特征是再生的草莓苗培养40天后，可直接转到MB培养基上生根。
全文摘要
本发明提供了一种采用植物组织培养生产草莓苗的方法。该方法是在MB培养基上培养草莓叶片，再生草莓幼苗，得到草莓无性系。草莓再生率达到97.0％以上，生根率达100％。本发明方法生产成本低，不污染环境，达到产业化水平。
文档编号A01H4/00GK1423927SQ03110849
公开日2003年6月18日 申请日期2003年1月13日 优先权日2003年1月13日
发明者贾景明 申请人:贾景明