一种牛大力生根组织培养基及其制备方法与流程

文档序号:11217861阅读:629来源:国知局

本发明属于培养基制备技术领域,具体涉及一种牛大力生根组织培养基。



背景技术:

牛大力,别名猪脚笠、金钟根、山莲藕、倒吊金钟、大力薯,为豆科豆科崖豆藤属植物,其主要成分为蛋白质、淀粉质及生物碱等。牛大力以根入药,全年可采挖,为传统的药食同源植物。牛大力性平、味甘,有补肾润肺、强筋活络的功效,常用于治疗腰肌劳损、风湿性关节炎、肺结核、慢性支气管炎、慢性肝炎等病症。牛大力除了入药煎剂外,亦常为广东民间入汤做食疗、药膳之用。牛大力有效成分有高丽槐素、芒柄花素、查尔酮类化合物、异黄酮类、糠醛、牛大力多糖等,这些成分具有抗炎杀菌、免疫调节作用,并由一定抗氧化和清除自由基作用。牛大力经采挖后,经清洗、晾晒可直接入药,也可用于食用,更可经深加工,制成牛大力保健酒、牛大力花茶等深加工产品。牛大力是制药企业加工中成药、保健品的常用原料,近年来,随着我国中医药事业蓬勃发展,人们生活水平逐渐提高,保健意识不断增强,牛大力的市场需求也在不断扩大。

目前,牛大力的繁殖方法主要有种子繁育、扦插繁育、组织培养繁育等几种模式。种子繁育及扦插培养对牛大力种苗本身要求较高,且培育周期较长,不利于牛大力种植推广;因此,选择优良的牛大力种苗,采用组织培养的模式进行繁育,是一种高效繁育培养牛大力的方法,能大大缩短牛大力的培育时间,且提高牛大力幼苗的成活率,繁育所得植株健康,有利于提高牛大力的结薯能力及产量。

在植物组织培养过程中,根据植物生长发育过程所需求的养分不同,可分为三种培养基,分别为诱导分化培养基、生根组织培养基、壮苗培养基。其中,生根组织培养基起到植物体生根的目的,直接决定了植物的根系发育程度,从而能够提升组培苗对养分的吸收能力及移栽成活率。针对不同的植物,生根组织培养基的成分也应有所区别。

以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案,其并不必然属于本专利申请的现有技术,在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下,上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。



技术实现要素:

本发明要解决的技术问题是提供一种牛大力生根组织培养基,以实现对牛大力组培苗的高效诱导生根。

为了解决以上技术问题,本发明采用以下技术方案:

一种牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂35~105g、蔗糖12~48g、激素0.3~1.2g、无机盐溶液3~14g、烟酸0.1~1.2g、活性炭8~25g、半胱氨酸0.2~1.2g、链霉素0.1~1.5g、水解乳蛋白7~18g、有机物40~120g、三蒸水15~60g。

优选地,所述的牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂40~90g、蔗糖18~42g、激素0.5~1g、无机盐溶液5~12g、烟酸0.2~1g、活性炭10~22g、半胱氨酸0.3~1g、链霉素0.2~1.2g、水解乳蛋白8~15g、有机物50~110g、三蒸水20~50g。

优选地,所述的牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂45~80g、蔗糖20~36g、激素0.6~0.8g、无机盐溶液6~10g、烟酸0.3~0.9g、活性炭12~20g、半胱氨酸0.5~0.8g、链霉素0.3~0.9g、水解乳蛋白10~14g、有机物55~95g、三蒸水25~45g。

优选地,所述的牛大力生根组织培养基,所述有机物包括牛奶、苹果泥、香蕉泥中的一种。

更优选地,所述的牛大力生根组织培养基,所述激素包括6-ba、kt、cppu、aba中的一种。

更优选地,所述的牛大力生根组织培养基,其无机盐溶液中的无机盐包括硼酸钠、氯化锌、氯化铵、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙中的一种或几种。

进一步地,所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,包括以下步骤:

s1:激素先用少量95%酒精溶解后,加入去离子水配置成溶液;

s2:蔗糖使用去离子水配置成10%的溶液;

s3:向烧杯中加入三蒸水,接着加入s1所得的激素溶液、无机盐溶液、烟酸、活性炭、半胱氨酸、链霉素、水解乳蛋白、有机物,充分搅拌;

s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液,充分搅拌,使用10%naoh和10%hcl溶液调节至体系ph值为5~6.6;

s5:向步骤s4所制成的溶液中加入琼脂,加热搅拌,待溶液沸腾后分装于培养瓶中;

s6:将步骤s5所制成的诱导组织培养瓶置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌一段时间后,即制成生根组织培养基。

进一步地,所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,所使用的试剂级别均为分析纯。

进一步地,所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,步骤s5中所述培养瓶为罐头瓶。

进一步地,所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,步骤s6中灭菌温度为120~135℃,灭菌时间为5~15min。

本发明具有以下有益效果:

(1)本发明所述生根组织培养基,其成分来源广泛,制备方法易于操作,且储存期长;

(2)本发明所述的生根组织培养基,含有对促进植物生根明显的硼、脱落酸等成分;

(3)本发明所述的生根组织培养基能够有效促进牛大力组培苗幼体生根,提升生根率及移栽成活率。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。应该强调的是,下述说明仅仅是示例性的,而不是为了限制本发明的范围及其应用。

实施例1:

一种牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂35g、蔗糖12g、6-ba0.3g、含有硼酸钠、氯化锌、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙的无机盐溶液3g、烟酸0.1g、活性炭8g、半胱氨酸0.2g、链霉素0.1g、水解乳蛋白7g、牛奶40g、三蒸水15g。

所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,包括以下步骤:

s1:6-ba先用少量95%酒精溶解后,加入去离子水配置成溶液;

s2:蔗糖使用去离子水配置成10%的溶液;

s3:向烧杯中加入三蒸水,接着加入s1所得的6-ba溶液、无机盐溶液、烟酸、活性炭、半胱氨酸、链霉素、水解乳蛋白、牛奶,各试剂均为分析纯,然后充分搅拌;

s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液,充分搅拌,使用10%naoh和10%hcl溶液调节至体系ph值为5.5;

s5:向步骤s4所制成的溶液中加入琼脂,加热搅拌,待溶液沸腾后分装于罐头培养瓶中;

s6:将步骤s5所制成的诱导组织培养瓶置于高压蒸汽灭菌锅中在120℃下灭菌15min,即制成生根组织培养基。

实施例2

一种牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂105g、蔗糖48g、kt1.2g、含有硼酸钠、氯化锌、氯化铵、磷酸二氢钾、氯化钙的无机盐溶液14g、烟酸1.2g、活性炭25g、半胱氨酸1.2g、链霉素1.5g、水解乳蛋白18g、苹果泥120g、三蒸水60g。

所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,包括以下步骤:

s1:kt先用少量95%酒精溶解后,加入去离子水配置成溶液;

s2:蔗糖使用去离子水配置成10%的溶液;

s3:向烧杯中加入三蒸水,接着加入s1所得的kt溶液、无机盐溶液、烟酸、活性炭、半胱氨酸、链霉素、水解乳蛋白、苹果泥,各试剂均为分析纯,然后充分搅拌;

s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液,充分搅拌,使用10%naoh和10%hcl溶液调节至体系ph值为5.8;

s5:向步骤s4所制成的溶液中加入琼脂,加热搅拌,待溶液沸腾后分装于罐头培养瓶中;

s6:将步骤s5所制成的诱导组织培养瓶置于高压蒸汽灭菌锅中在135℃下灭菌5min,即制成生根组织培养基。

实施例3

一种牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂40g、蔗糖18g、cppu0.5g、含有硼酸钠、氯化铵、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙的无机盐溶液5g、烟酸0.2g、活性炭10g、半胱氨酸0.3g、链霉素0.2g、水解乳蛋白8g、香蕉泥50g、三蒸水20g。

所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,包括以下步骤:

s1:cppu先用少量95%酒精溶解后,加入去离子水配置成溶液;

s2:蔗糖使用去离子水配置成10%的溶液;

s3:向烧杯中加入三蒸水,接着加入s1所得的cppu溶液、无机盐溶液、烟酸、活性炭、半胱氨酸、链霉素、水解乳蛋白、香蕉泥,各试剂均为分析纯,然后充分搅拌;

s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液,充分搅拌,使用10%naoh和10%hcl溶液调节至体系ph值为6.5;

s5:向步骤s4所制成的溶液中加入琼脂,加热搅拌,待溶液沸腾后分装于罐头培养瓶中;

s6:将步骤s5所制成的诱导组织培养瓶置于高压蒸汽灭菌锅中在125℃下灭菌12min,即制成生根组织培养基。

实施例4

一种牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂90g、蔗糖42g、aba1g、含有硼酸钠、氯化锌、氯化铵、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙的无机盐溶液12g、烟酸1g、活性炭22g、半胱氨酸1g、链霉素1.2g、水解乳蛋白15g、牛奶110g、三蒸水50g。

所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,包括以下步骤:

s1:aba先用少量95%酒精溶解后,加入去离子水配置成溶液;

s2:蔗糖使用去离子水配置成10%的溶液;

s3:向烧杯中加入三蒸水,接着加入s1所得的aba溶液、无机盐溶液、烟酸、活性炭、半胱氨酸、链霉素、水解乳蛋白、牛奶,各试剂均为分析纯,然后充分搅拌;

s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液,充分搅拌,使用10%naoh和10%hcl溶液调节至体系ph值为5.8;

s5:向步骤s4所制成的溶液中加入琼脂,加热搅拌,待溶液沸腾后分装于罐头培养瓶中;

s6:将步骤s5所制成的诱导组织培养瓶置于高压蒸汽灭菌锅中在135℃下灭菌6min,即制成生根组织培养基。

实施例5

一种牛大力生根组织培养基,包括以下原料:琼脂55g、蔗糖28g、aba0.7g、无机盐溶液8g、烟酸0.6g、活性炭16g、半胱氨酸0.7g、链霉素0.5g、水解乳蛋白12g、苹果泥80g、三蒸水30g。

更优选地,所述的牛大力生根组织培养基,其无机盐溶液中的无机盐包括硼酸钠、氯化锌、氯化铵、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙中的一种或几种。

进一步地,所述的牛大力生根组织培养基的制备方法,包括以下步骤:

s1:aba先用少量95%酒精溶解后,加入去离子水配置成溶液;

s2:蔗糖使用去离子水配置成10%的溶液;

s3:向烧杯中加入三蒸水,接着加入s1所得的aba溶液、无机盐溶液、烟酸、活性炭、半胱氨酸、链霉素、水解乳蛋白、苹果泥,各试剂均为分析纯,然后充分搅拌;

s4:向s3所制成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液,充分搅拌,使用10%naoh和10%hcl溶液调节至体系ph值为6.2;

s5:向步骤s4所制成的溶液中加入琼脂,加热搅拌,待溶液沸腾后分装于罐头培养瓶中;

s6:将步骤s5所制成的诱导组织培养瓶置于高压蒸汽灭菌锅中在130℃下灭菌8min,即制成生根组织培养基。

为了更详细说明本发明的有益效果,以下还提供了具体的试验结果。

选取牛大力新鲜种子切片180份作为组织培养的外植体,随机分为a、b、c、d、e、f六组,每组30份。每组经升汞消毒后分别接入相同组分的诱导培养基,培育10天后,a~e组种苗移入采用本发明实施例1~5所述配方及方法制备成的生根组织培养基中,f组接入市售普通生根组织培养基中,继续培养7天后,比较各组的生根率。后移入种植地种植培育,记录种苗成活率,实验数据如下表所示。

由此可见,本发明所述的牛大力生根组织培养基与市售普通培养基相比,能够提升牛大力组培苗的生根率,且移栽成活率较高。

以上内容不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明,对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干简单推演或替换,都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。

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