一种促进三叶青试管苗壮苗生根的培养基的制作方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于生物领域，具体而言，涉及一种促进三叶青试管苗壮苗生根的培养基。
【背景技术】：
[0002] 三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，又名金线吊萌芦，属于葡萄 科崖爬藤属多年生草质藤本植物，全草均可入药。三叶青的药理作用主要有保肝、抗病毒、 抗炎、解热、镇痛、抗肿瘤及免疫调节等。三叶青野生资源主要生长在荫蔽度较高的山谷、灌 丛、林间等，其对生长环境的温度、湿度要求非常苛刻，并且在自然条件下生长缓慢，随着三 叶青抗癌等功能被逐渐了解，三叶青野生块根被大量采挖，目前药材的来源主要靠扦插和 快繁。组培快繁是针对珍危濒稀中药材的一种较快繁殖方法，利用组培快繁培养三叶青的 技术基本成熟，但存在试管苗移栽后成活率低的难题，要克服这一难题，首先需要提供生长 良好的三叶青试管苗，这就涉及到三叶青试管苗生根的问题。故找到一种培养基能有利于 三叶青试管苗的生根壮苗将有利于提高存活率，进而可以更好的利用三叶青这一资源。
[0003] 稀土元素一般指镧系等17种元素的总称。稀土元素对植物生长相关方面的促进作 用引起了研究人员把稀土元素应用到植物组织培养体系中的兴趣。文献表明，低浓度的稀 土元素有利于试管苗的生根。
【发明内容】
：
[0004] 本发明的目的是提供一种促进三叶青试管苗壮苗生根的培养基，该培养基的组成 包括:基础培养基和稀土元素。
[0005] 所述基础培养基的组分及含量为：
[0006] KNO3 83-2970mg/L,NH4NO3 9〇-1620mg/L,KH2PO4 18-432mg/L,MgSO4 · 7H20 232-758mg/L，CaCl2*2H2〇 135-475mg/L，KCl 0-70mg/L，KI 0.5-1.9mg/L，H3B03 0.6-6.9mg/L， MnSO4 · 4H20 4-25mg/L,ZnSO4 · 7H20 1.3-9. Omg/L,Na2MoO4 · 2H20 〇-〇. 32mg/L,CuSO4 · 5H20 0-0.45mg/L,CoCl2 · 6H20 〇-〇.04mg/L,Na2-EDTA 〇-48mg/L,FeSO4 · 7H20 23-29mg/L, 肌醇〇-95mg/L，甘氨酸0-3 · 5mg/L，VB1 0 · 1-13 · Omg/L，VB6 0 · 5-1 · 5mg/L，烟酸0 · 2-1 · 7mg/L， 吲哚丁酸 〇 · 4-2 · Omg/L，激动素 0 · 1-0 · 4mg/L，蔗糖 20-30g/L，琼脂 4 · 0-7 · Og/L，活性炭 0 · 3-1.0g/L〇
[0007] 所述的稀土元素为Nd、La或Ce，或Ce(N〇3)3、Pr6〇n和Sm2〇3组成的混合稀土元素， 总浓度为0.1-0.5mM，加入形式为其盐溶液，其中，混合稀土元素中各组分的摩尔比为Ce (NO3)3: Pr6On ： Sm2O3 = 23-195： 1-46 ：12-95 〇
[0008] 本发明一种促进三叶青试管苗壮苗生根的培养基定为A培养基，其配制为现有配 制方法，其中稀土元素亦是配成母液后，吸取相应的体积。
[0009] 本发明的有益之处:使用该培养基可明显提高三叶青试管苗的生根数目并缩短生 根天数。本发明可使三叶青试管苗移栽成活率更好，能显著提高经济效益。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1
[0011] 取三叶青带腋芽的茎段，用洗衣粉溶液浸泡10分钟，流水冲1小时，于无菌超净工 作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.15%氯化汞中消毒7分钟，无菌水洗6次， 用解剖刀将已消毒后的茎段两端切去，接种于MS培养基中，此培养基中含有2.0mg/I^6-BA 和0.5mg/L的NAA，培养温度为25 ± 1°C，暗培养，25天后长出三叶青小苗。
[0012] 把获得的三叶青小苗切割成单棵，接种至A培养基中生长，A培养基的组成为：
[0013] KNO3 103mg/L,NH4NO3 190mg/L,KH2PO4 28mg/L,MgSO4 · 7H20 252mg/L,CaCl2 · 2H20 170mg/L，KI 1.5mg/L，H3B03 1.6mg/L，MnS〇4.4H2〇 8mg/L，ZnS〇4.7H20 2.3mg/L， Na2MoO4 · 2H20 0.12mg/L,CuS04 · 5H20 0.15mg/L,CoCl2 · 6H2O 0.02mg/L,Na2-EDTA 12mg/ L，FeS〇4.7H20 24mg/L，肌醇30mg/L，甘氨酸 1.5mg/L，VB1 0.5mg/L，VB6 0.7mg/L，烟酸 0 · 5mg/L，吲噪丁酸0 · 5mg/L，激动素0 · 2mg/L，鹿糖20g/L，琼脂4 · Og/L，活性炭0 · 5g/L。所加 的稀土元素为铈（Ce3 +用量如下表），每种处理30瓶，培养温度25± I °C，光照强度1500-20001UX，培养20天后统计平均根长、平均生根数目和根粗壮程度。
[0014]表1不同浓度的Ce3+对三叶青试管苗壮苗生根的影响
[00?6] 根粗壮程度表不:+-根细弱++-根较粗壮+++-根粗壮
[0017] 实施例2
[0018] 取三叶青带腋芽的茎段，用洗衣粉溶液浸泡1〇分钟，流水冲1小时，于无菌超净工 作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.15%氯化汞中消毒7分钟，无菌水洗6次， 用解剖刀将已消毒后的茎段两端切去，接种于MS培养基中，此培养基中含有2.0mg/I^6-BA 和0.5mg/L的NAA，培养温度为25 ± 1°C，暗培养，25天后长出三叶青小苗。
[0019] 把获得的三叶青小苗切割成单棵，接种至A培养基中生长，A培养基的组成为：
[0020] KNO3 83mg/L,NH4NO3 90mg/L,KH2PO4 18mg/L,MgS04 · 7H20 232mg/L,CaCl2 · 2H20 135mg/L，KI 0.5mg/L，H3B〇3 0.6mg/L，MnS〇4.4H2〇 4mg/L，ZnS〇4.7H2〇 1.3mg/L，Na2Mo〇4· 2H20 0.02mg/L,CuSO4 · 5H20 0.05mg/L,CoCl2 · 6H2O 0.Olmg/L,Na2-EDTA 5mg/L,FeS04 · 7H2O 23mg/L，肌醇 10mg/L，甘氨酸0.5mg/L，VBi 0.1mg/L，VB6 0.5mg/L，烟酸0.2mg/L，吲噪丁 酸0.4mg/L，激动素 0· lmg/L，鹿糖20g/L，琼脂4.0g/L，活性炭0.3g/L。所加的稀土元素为钕 (Nd3+用量如下表），每种处理30瓶，培养温度25± 1°C，光照强度1500-20001ux，培养20天后 统计平均根长、平均生根数目和根粗壮程度。
[0021]表2不同浓度的Nd3+对三叶青试管苗壮苗生根的影响
[0023] 根粗壮程度表不:+-根细弱++-根较粗壮+++-根粗壮 [0024] 实施例3
[0025]取三叶青带腋芽的茎段，用洗衣粉溶液浸泡10分钟，流水冲1小时，于无菌超净工 作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.0%氯化汞中消毒7分钟，无菌水洗6次， 用解剖刀将已消毒后的茎段两端切去，接种于MS培养基中，此培养基中含有2.0mg/I^6-BA 和0.5mg/L的NAA，培养温度为25 ± 1°C，暗培养，25天后长出三叶青小苗。
[0026]把获得的三叶青小苗切割成单棵，接种至A培养基中生长，A培养基的组成为：
[0027] KNO3 1003mg/L,NH4NO3 270mg/L,KH2PO4 148mg/L,MgS04 · 7H20 302mg/L,CaCl2 · 2H20 210mg/L，KCl 7mg/L，KI 1.2mg/L，H3B03 1.9mg/L，MnS〇4.4H20 18mg/L，ZnS〇4.7H20 3.2mg/L,Na2MoO4 · 2H20 0 . lOmg/L,CuSO4 · 5H20 0.25mg/L,CoCl2 · 6H2O 0.03mg/L,Na2-EDTA 22mg/L，FeS〇4.7H20 24mg/L，肌醇40mg/L，甘氨酸 1.3mg/L，VB1 1.5mg/L，VB6 0.7mg/ L，烟酸0 · 6mg/L，吲噪丁酸0 · 6mg/L，激动素 0 · 2mg/L，鹿糖25g/L，琼脂4 · 5g/L，活性炭I · Og/ L。所加的稀土元素为镧（La3+用量如下表），每种处理30瓶，培养温度25± I °C，光照强度 1500-20001UX，培养20天后统计平均根长、平均生根数目和根粗壮程度。
[0028]表3不同浓度的La3+对三叶青试管苗壮苗生根的影响
[0030] 根粗壮程度表不:+-根细弱++-根较粗壮+++-根粗壮 [0031] 实施例4
[0032]取三叶青带腋芽的茎段，用洗衣粉溶液浸泡10分钟，流水冲1小时，于无菌超净工 作台上用75%酒精消毒30秒，无菌水洗3次，再于0.15%氯化汞中消毒7分钟，无菌水洗6次， 用解剖刀将已消毒后的茎段两端切去，接种于MS培养基中，此培养基中含有2.0mg/I^6-BA 和0.5mg/L的NAA，培养温度为25 ± 1°C，暗培养，25天后长出三叶青小苗。
[0033]把获得的三叶青小苗切割成单棵，接种至A培养基中生长，A培养基的组成为：
[0034] KNO3 1200mg/L,NH4NO3 1100mg/L,KH2PO4 230mg/L,MgSO4 · 7H20 440mg/L,CaCl2 · 2H20 270mg/L，KCl 21mg/L，KI 1.3mg/L，H3B03 0.9mg/L，MnS〇4.4H20 13mg/L，ZnS〇4· 7H20 5.2mg/L,Na2MoO4 · 2H20 0.20mg/L,CuS04 · 5H20 0.35mg/L,CoCl2 · 6H2O 0.02mg/L, Na2-EDTA 31mg/L，FeS〇4.7H20 25mg/L，肌醇55mg/L，甘氨酸2.3mg/L，VBi 3.5mg/L，VB6 0 · 9mg/L，烟酸 0 · 8mg/L，吲噪丁酸 0 · 8mg/L，激动素 0 · 3mg/L，鹿糖 25g/L，琼脂 5 · 5g/L，活性炭 I.Og/L。