一种牡丹生根培养方法
【技术领域】
[0001 ]本发明是一种通过不同激素提高牡丹生根率及成活率的方法。
【背景技术】
[0002]牡丹属于芍药科芍药属落叶灌木，作为花卉栽培至今已有约1600年的历史。牡丹传统的繁殖方式包括播种繁殖和以嫁接、分株、扦插为主的无性繁殖，然而传统繁殖方法有很大的局限性:种子繁殖可以在短期内获得大量苗木，但结实植株品种以单瓣为主，重瓣品种不结实或结实极少，实生苗变异大，不宜保持母株优良品性。牡丹不仅在国内花卉市场中占有重要地位，同时也是我国的重要出口花卉，产业化生产是牡丹今后发展的主要方向，应用离体培养技术进行快速繁殖是促进牡丹产业化生产的重要技术。
[0003]牡丹的组培快繁技术存在着增殖率低、生根困难和移栽成活率低等问题，难以应用于生产。生根是植物组织培养成功的关键步骤之一，是牡丹组培亟待解决的主要问题。掌握牡丹的生根培养基配方对于解决牡丹的生根难题，对牡丹生根技术的改进具有重要的理论、实际应用价值。牡丹组培苗生根培养中用到的基本培养基有MS、改良MS、其中最常用的是1/2MS。最有效的生根诱导剂是IBA，也有使用NAA或IAA诱导生根。考虑到养分、抑制褐化等问题，有较强的针对性，但鉴于牡丹品种丰富和培养基成分复杂，对不同品种和外植体，有必要系统、综合地分析培养基成分对试管苗生根的影响，从而获得最佳基本配方。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是:牡丹生根困难，生根率低导致成活率低，不能生产化出苗，本发明提供一种牡丹快速生根繁殖组织培养方法。
[0005]本发明的技术方案是:一种牡丹生根培养方法:剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?lOmin，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2 %次氯酸钠或0.1 %升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2+的WPM+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH=5.8，温度24± I°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为l/2MS+IBA1.0mg.L—工+蔗糖30g.L—S在PH为5.8，温度24土1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30-35天，得到牡丹小苗。
[0006]一种牡丹生根培养方法:剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或
0.1 %升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2 +的WPM+1 BA0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为WPM+IBA 4mg.L_1+PVP 1.0g.L一k糖30g.L^+Gellan gum 2g.L一1，在pH为5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d的条件下培养，在生根培养基中添加50mg/L抗坏血酸，培养30-35天，得到牡丹小苗。
[0007]一种牡丹生根培养方法:剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或0.1 %升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2 +的WPM+1 BA0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为WPM+IAA 3mg/L+咖啡酸lmg/L+PVP lg/L+LH 200mg/L+糖30g/L+Gellan gum 2g/L，在pH为5.8，温度24°C，光强2000Lx，光照时间12h/d的条件下培养30-35天，得到牡丹小苗。
[0008]本发明的有益效果是:本发明能有效提高苗生根率和伸长量，使牡丹生根时间更短，提高了成活率。生根时间缩短为10天，最大根长为25.58mm，生根率在70 %以上，根数为4.8，；而对照的生根时间为20天，生根率为10%，最大根长为18.06，根数为2。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
[0010]一种牡丹生根培养方法:剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或0.1 %升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2 +的WPM+1 BA0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为l/2MS+IBA1.0mg.L—工+蔗糖30g.L—S在PH为5.8，温度24± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30-35天，得到牡丹小苗，生根率为72 %。
[0011]实施例2
[0012]一种牡丹生根培养方法:剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或0.1 %升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2 +的WPM+1 BA0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为WPM+IBA 4mg.L_1+PVP 1.0g.L一工+糖30g.L_1+Gellan gum 2g.L一1，在pH为5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d的条件下培养，在生根培养基中添加50mg/L抗坏血酸，培养30-35天，得到牡丹小苗，生根率为75%。
[0013]实施例3
[0014]一种牡丹生根培养方法:剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或
0.1 %升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2 +的WPM+1 BA
0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为WPM+IAA 3mg/L+咖啡酸lmg/L+PVPlg/L+LH 200mg/L+糖30g/L+Gellangum 2g/L，在pH为5.8，温度24°C，光强2000Lx，光照时间12h/d的条件下培养30-35天，得到牡丹小苗，生根率为83 %。
【主权项】
1.一种牡丹生根培养方法，其特征在于: 剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或0.1%升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2+的WPM+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为1/2MS+IBAl.0mg.L一W蔗糖30g.L一1，在PH为5.8，温度24± 1°C，光强2000Lx，光照时间 12h/d下诱导培养30-35天，得到牡丹小苗。2.一种牡丹生根培养方法，其特征在于: 剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或0.1%升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2+的WPM+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为WPM+IBA4mg.L_1+PVP 1.0g.L一工+糖30g.L_1+Gellan gum 2g.L—1，在pH为5.8，温度24± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d的条件下培养，在生根培养基中添加50mg/L抗坏血酸，培养30-35天，得到牡丹小苗。3.一种牡丹生根培养方法，其特征在于: 剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30min，多菌灵浸泡漂洗8?1min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20?30s，再用2%次氯酸钠或0.1%升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3?5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，所述固体培养基的配方为:MS+含有Ca2+的WPM+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.3mg/L+PVP lg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，在pH = 5.8，温度24 ± 1°C，光强2000Lx，光照时间12h/d下诱导培养30天，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，所述生根培养基的配方为WPM+IAA 3mg/L+咖啡酸lmg/L+PVPlg/L+LH 200mg/L+糖30g/L+Gellan gum 2g/L，在pH为5.8，温度24°C，光强2000Lx，光照时间12h/d的条件下培养30-35天，得到牡丹小苗。
【专利摘要】本发明公开了一种牡丹生根培养方法：剥去牡丹鳞芽数层芽鳞，在自来水下冲洗30？min，多菌灵浸泡漂洗8~10？min，然后在超净工作台上用70%酒精灭菌20~30？s，再用2%次氯酸钠或0.1%升汞灭菌，灭菌时间8min，无菌水冲洗3~5次，剥去剩余芽鳞，切掉基部部分组织，将剩下的部分接种到固体培养基上，得到无根小苗，将无根小苗转入生根培养基上，得到牡丹小苗。本发明能有效提高苗生根率和伸长量，使牡丹生根时间更短，提高了成活率。生根时间缩短为10天，最大根长为25.58mm，生根率在70%以上，根数为4.8；而对照的生根时间为20天，生根率为10%，最大根长为18.06，根数为2。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105532477
【申请号】CN201610078484
【发明人】何松林, 贺丹, 王政, 尚文倩, 刘保国, 解梦珺
【申请人】河南农业大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年2月4日