一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物离体培养技术领域，具体地说是莲瓣兰植物种子无菌萌发形成根状茎后再一次性培育成苗的方法，特别是一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法。
【背景技术】
[0002]药草和滇荷都是兰属莲瓣兰植物的优秀品种，二者植株健硕，花朵幽香，观赏价值高，是重要的兰花优良种质资源。两个兰花品种多产于云南西北部及四川南部以及与此两地毗邻地区，是良好的盆栽花材料和杂交亲本。
[0003]兰花种子很小，内含一些发育不完全的球形胚，无胚乳，自然状态下很难萌发，需与兰菌共生或无菌条件培养才能获得成功。兰属(Cmbidium)植物种子的萌发，已有人作过研究，但以上兰属植物的杂交、无菌萌发及根状茎诱导成苗未见报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，克服了兰花传统繁殖方法带来的种种弊端，有利于扩大兰花的繁殖系数，能在短期内生产出数量巨大的试管种苗，有效满足兰花产业化生产的巨大需求。
[0005]为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明公开了一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，诱导成苗方法包括了以下步骤:
[0006]材料来源筛选:药草及滇荷兰株均为野生植株，在资源圃内培育至果实达九成熟，果皮略显黄色时摘取；
[0007]外植体处理:将上述九成熟果实用75%酒精消毒30-60秒，转入0.1%升汞表面消毒8-12分钟，无菌水冲洗3-4次，无菌室取出种子并用纱布包好种子后，以无菌水润洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液预处理8-10分钟，用无菌水冲洗3次，用20%次氯酸钠消毒15-20分钟，无菌水冲洗5次后，接种到改良的MS固体培养基；
[0008]种子培养:在整个培养过程中，种子无菌萌发采用暗箱培养，培养至种子萌发为圆球茎成根状茎时培养采用光照培养，培养条件为:温度25 ±2°C，光照1800-2500勒克斯(lx)，每天光照12-15小时，待种子萌发并长出根状茎后转接到另一个培养瓶，进行成苗诱导培养；
[0009]成苗诱导培养:使用含有0.5-5.0mg/L的细胞分裂素6-BA和0.2-2.0mg/L的生长素NAA的改良MS固体诱导培养基培养，培养条件为:温度25土2°C，光照1800-2500勒克斯(Ix)，每天光照12-15小时，2—5个月后长出芽和新根，形成健壮植株。
[0010]优选的，外植体处理中改良的MS固体培养基为，含有1.0-5.0mg/L的细胞分裂素6-BA和1.0-2.0mg/L的生长素NAA的改良MS固体培养基，其中培养基pH 5.6，琼脂4.0-6.5g/L。
[0011]优选的，成苗诱导培养中改良MS固体诱导培养基中还包括有土豆泥50g/L和蛋白粉0.2g/L。
[0012]本发明具有以下有益效果:
[0013]1.本发明通过严格选种、优化培育，克服了传统兰花繁育主要以分株繁殖为主，而分株繁殖系数低，每年老苗与新生苗的比例只为1:1?3左右，很难进行规模化生产的问题，采用了组织培养的方法有利于扩大兰花的繁殖系数，能在短期内生产出数量巨大的试管种苗，有效满足兰花产业化生产的巨大需求。
[0014]2.经过大量实验验证培养参数及培育步骤，将传统地生兰组培中多步诱导生根成苗步骤进行优化调整，本发明从根状茎一次性诱导成芽和根，成为新生植株，减少了诱导过程和缩短了诱导时间，显著降低了生产成本，并公开了相应的培育方法及工艺参数。
【具体实施方式】
[0015]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
[0016]实施例1
[0017]本发明公开了一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，诱导成苗方法包括了以下步骤:
[0018]材料来源筛选:药草及滇荷兰株均为野外采得，在资源圃内培育至果实达九成熟，果皮略显黄色时摘取；
[0019]外植体处理:将上述九成熟果实用75%酒精消毒30秒，转入0.1%升汞表面消毒8分钟，无菌水冲洗3次，无菌室取出种子并用纱布包好种子后，以无菌水润洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液预处理8分钟，用无菌水冲洗3次，用20%次氯酸钠消毒15分钟，无菌水冲洗5次后，接种到改良的MS固体培养基。其中，改良的MS固体培养基为，含有1.0mg/L的细胞分裂素6-BA和1.0mg/L的生长素NAA的改良MS固体培养基，其中培养基pH 5.6，琼脂4.0g/L;
[0020]种子培养:在整个培养过程中，种子无菌萌发采用暗箱培养，培养至种子萌发为圆球茎成根状茎时培养采用光照培养，培养条件为:温度25±2°C，光照1800勒克斯(lx)，每天光照12小时，待种子萌发并长出根状茎后转接到另一个培养瓶，进行成苗诱导培养；
[0021 ]成苗诱导培养:使用含有0.5mg/L的细胞分裂素6-BA、0.2mg/L的生长素NAA、土豆泥50g//L和蛋白粉0.2g/L的改良MS固体诱导培养基培养，培养条件为:温度25 ± 2°C，光照1800勒克斯(lx)，每天光照12小时，2-5个月后长出芽和新根，形成健壮植株。
[0022]实施例2
[0023]本发明公开了一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，诱导成苗方法包括了以下步骤:
[0024]材料来源筛选:药草及滇荷兰株均为野外采得，在资源圃内培育至果实达九成熟，果皮略显黄色时摘取；
[0025]外植体处理:将上述九成熟果实用75%酒精消毒60秒，转入0.1%升汞表面消毒12分钟，无菌水冲洗4次，无菌室取出种子并用纱布包好种子后，以无菌水润洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液预处理10分钟，用无菌水冲洗3次，用20%次氯酸钠消毒20分钟，无菌水冲洗5次后，接种到改良的MS固体培养基。其中，改良的MS固体培养基为，含有5.0mg/!的细胞分裂素6-BA和2.0mg/L的生长素NAA的改良MS固体培养基，其中培养基pH 5.6，琼脂6.5g/L；
[0026]种子培养:在整个培养过程中，种子无菌萌发采用暗箱培养，培养至种子萌发为圆球茎成根状茎时培养采用光照培养，培养条件为:温度25±2°C，光照2500勒克斯(lx)，每天光照15小时，待种子萌发并长出根状茎后转接到另一个培养瓶，进行成苗诱导培养；
[0027]成苗诱导培养:使用含有5.0mg/!的细胞分裂素6-BA、2.0mg/L的生长素NAA、土豆泥50g//L和蛋白粉0.2g/L的改良MS固体诱导培养基培养，(缺少培养条件)，培养条件为:温度25土2°C，光照2500勒克斯(Ix)，每天光照15小时，2_5个月后长出芽和新根，形成健壮植株。
[0028]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，其特征在于，所述的诱导成苗方法包括了以下步骤: 材料来源筛选:药草及滇荷兰株均为野生植株，在资源圃内培育至果实达九成熟，果皮略显黄色时摘取； 外植体处理:将上述九成熟果实用75%酒精消毒30-60秒，转入0.1%升汞表面消毒8-12分钟，无菌水冲洗3-4次，无菌室取出种子并用纱布包好种子后，以无菌水润洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液预处理8-10分钟，用无菌水冲洗3次，用20%次氯酸钠消毒15-20分钟，无菌水冲洗5次后，接种到改良的MS固体培养基； 种子培养:在整个培养过程中，种子无菌萌发采用暗箱培养，培养至种子萌发为圆球茎成根状茎时培养采用光照培养，培养条件为:温度25±2°C，光照1800-2500勒克斯(lx)，每天光照12-15小时，待种子萌发并长出根状茎后转接到另一个培养瓶，进行成苗诱导培养； 成苗诱导培养:使用含有0.5-5.0mg/L的细胞分裂素6-BA和0.2-2.0mg/L的生长素NAA的改良MS固体诱导培养基培养，培养条件为:温度25±2°C，光照1800-2500勒克斯(lx)，每天光照12-15小时，2—5个月后长出芽和新根，形成健壮植株。2.如权利要求1所述的一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，其特征在于:外植体处理中所述的改良的MS固体培养基为，含有1.0-5.0mg/L的细胞分裂素6-BA和1.0-2.0mg/L的生长素NAA的改良MS固体培养基，其中培养基pH 5.6，琼脂4.0-6.5g/L。3.如权利要求1或2所述的一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，其特征在于:成苗诱导培养中所述的改良MS固体诱导培养基中还包括有土豆泥50g/L和蛋白粉0.2g/L。
【专利摘要】本发明涉及植物离体培养技术领域，公开了一种杂交莲瓣兰根状茎直接诱导成苗方法，包括了以下步骤：材料来源筛选、外植体处理、种子培养、成苗诱导培养；克服了传统兰花繁育主要以分株繁殖为主，而分株繁殖系数低，很难进行规模化生产的问题，采用了组织培养的方法有利扩大兰花的繁殖系数，能在短期内生产出大量试管种苗，满足兰花产业化生产需求；经过实验验证培养参数及步骤，将传统地生兰组培中多步诱导生根成苗步骤进行优化，本发明从根状茎一次性诱导成芽和根，成为新生植株，减少了诱导过程和缩短了诱导时间，显著降低了生产成本，并公开了相应的培育方法及工艺参数。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105532472
【申请号】CN201610027593
【发明人】刘忠贵, 徐锐仙, 刘乘里, 李枝林
【申请人】云南野生兰收藏基地有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月16日