一种春石斛品种‘火鸟’组培快繁的方法
【专利摘要】本发明属于植物组培领域，公开了一种春石斛品种‘火鸟’组培快繁的方法。主要步骤包括：春季采取‘火鸟’当年生茎段为外植体，依次进行1)外植体在NaClO和HgCl2中消毒，2)转接到诱导培养基MS+6?BA 3mg·L?1+NAA0.2mg·L?1中培养，3)后换入增殖培养基MS+TDZ 0.1mg·L?1+NAA 0.2mg·L?1+200g·L?1土豆泥+1g·L?1活性炭中培养，4)换入壮苗生根培养基1/2MS+0.5mg·L?1IBA+200g·L?1土豆泥中培养，5)炼苗移栽，得到春石斛品种‘火鸟’组培苗。本发明提供的一种‘火鸟’组培快繁方法，可以在最短时间内达到繁殖系数的最大化，有利于洋兰石斛属品种‘火鸟’的快速育苗，缩短苗期和生长周期，达到繁殖速度快、节约生产成本并适用于规模育苗的目的。使用的植物材料极少，生长快，周期短，重复性强，可周年试验或生产。
【专利说明】
一种春石斛品种‘火鸟’组培快繁的方法
技术领域
[0001]本发明属于属于农业生物技术领域，涉及的是一种春石斛品种‘火鸟’的组培快繁方法。
【背景技术】
[0002]春石斛品种‘火鸟’(Dendrobium stardust‘Fire Bird’)为兰科石斛属品种，目前文献中尚无关于春石斛品种‘火鸟’的组培快繁的报道。该方法为春石斛品种‘火鸟’的快速繁殖提供了一种新的方法，为春石斛品种‘火鸟’作为春石斛的产业化提供了一种繁殖的新方法。
【发明内容】
[0003]为了改变目前春石斛品种‘火鸟’繁殖、栽培不良的状况，本发明的目的在于加快春石斛品种‘火鸟’的栽培和开发力度，提高春石斛品种‘火鸟’的繁殖效率，加快春石斛品种‘火鸟’种苗的规模化繁育，有利于春石斛品种‘火鸟’作为能源木本植物和观赏春石斛的生产和开发。本发明方法特别适用于春季生产初期采集嫩枝进行诱导丛生芽。
[0004]—种春石斛品种‘火鸟，组培快繁的方法，包括如下步骤:
[0005]采集春石斛品种‘火鸟’当年生嫩茎为外植体，依次进行I)嫩茎消毒、2)嫩茎诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽壮苗生根培养、5)炼苗移栽，得到春石斛品种‘火鸟’组培苗。
[0006]所述采集春石斛品种‘火鸟’当年生嫩枝，是在春天采集春石斛品种‘火鸟’芽萌发形成的未封顶的枝条，要求枝条木质化程度低，要求每个茎段都长有I?2个腋芽。
[0007]所述I)嫩茎外植体消毒，是流水冲洗嫩茎2?3h，在超净台上用75%酒精处理30?40s，无菌水漂洗3?4次，用5%次氯酸钠(NaClO,Sodium hypochlorite)消毒5min，再用
0.3%升萊(二氯化萊，Mercury chloride)中消毒6min，之后无菌水漂洗3?4次，并用无菌滤纸吸去多余水分。
[0008]所述2)丛生芽诱导培养:在无菌条件下将获得的嫩茎接种于诱导培养基上，在25±2°(:，光照14?1611，？!1值为5.8?6.0，光强300011条件下培养，接种22(1后新芽开始萌发，22?35d，获得丛生芽;45d后叶片展开。
[0009]所述的丛生芽诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，含有3.0mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.2mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。
[0010]所述萌发新的丛生芽，时间为接种到丛生芽诱导培养基上18d后。
[0011]所述叶片展开，时间为接种到丛生芽诱导培养基上42d后。
[0012]所述3)丛生芽增殖继代培养，为将经过诱导培养萌发的丛生芽，接种到增殖培养基上进行继代培养，置于温度25 土 IV的培养室内，每30?40d继代转瓶一次，扩大丛生芽数量，并使丛生芽继续生长。
[0013]所述丛生芽增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，含有0.lmg/L的TDZ、0.2mg/L的NAA、200g.L—1 土豆泥、Ig.L—1活性炭、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。
[0014]所述3)壮苗生根:将继代后大量形成的丛生芽，转入生根培养基进行生根诱导，促进生根，38d后长成带根的幼苗。
[0015]所述长成带根的幼苗，时间为接种到生根培养基上38天后。
[0016]所述4)丛生芽壮苗生根培养，为将经过充分继代的无根丛生芽接种到壮苗生根培养基上，培养12d后，基部产生白色不定根、培养35d毛根明显，形成完整植株。
[0017]所述丛生芽壮苗生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，含有0.5mg/L的IBA(口引噪丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。
[0018]所述5)炼苗移栽，为将形成完整根系的组培苗连瓶放入温室中炼苗4?6d，增加光照，后出瓶洗净放入干净基质中栽培，保持较高湿度。
[0019]所述基质为草炭土:珍珠岩按体积比3:1混合所得的基质。
[0020]所述丛生芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基、生根培养基的pH值优选为5.80。
[0021]所述的培养，培养条件为每天光照1h?12h，温度为25 °C ± 2 °C、光照12h/d、光照强度 2000 ?30001x。
[0022]本发明的创新之处是公开了春石斛品种‘火鸟’生芽诱导、增殖、生根的配方及其组培快繁的种苗规模化繁育的一种方法。目前国内外未见同类报道。
[0023]本发明有利于加快春石斛品种‘火鸟’的繁殖，加快其种苗基数，有益于后期洋兰中春石斛的普及和生产。
【附图说明】
[0024]图1:本发明所述春石斛品种‘火鸟’组培及炼苗情况
[0025]其中:a:丛生芽诱导，b:丛生芽增殖，c:春石斛品种‘火鸟’生根，d:春石斛品种‘火鸟’出瓶炼苗后定植的组培苗。
【具体实施方式】
[0026]—种春石斛品种‘火鸟’组培快繁方法，该方法包括以下步骤:(下面实施例用于对本发明的进一步说明，但不用来限制本发明的范围)。
[0027]实施例1:以本发明的方法筛选春石斛品种‘火鸟’诱导培养基
[0028]I)选取外植体:选取当年生生长健壮无病虫害的春石斛品种‘火鸟’枝条嫩茎为外植体，剪成3cm茎段，每个茎段留I?2个芽，用洗涤剂清洗lOmin，然后用用自来水冲洗3h，最后晾干材料表面水分备用；
[0029]2)嫩茎诱导培养:将处理好的春石斛品种‘火鸟’茎段，在超净工作台上用质量浓度为75%酒精浸泡30s，再用质量浓度为0.3%升汞消毒7min，最后用无菌水冲洗3次，再将嫩茎置于无菌滤纸上吸干表面多余水分，接种在茎段诱导培养基上，将接种的外植体置于温度22±1°C、光照12h/d、光照强度1500?20001x的培养室内，培养20d后芽萌发，待第42d叶片展开，将芽取下，转接到丛生芽增殖培养基上，置于培养室内，40d后愈伤组织上分化丛生芽(通过40d培养诱导单芽平均诱导丛生芽增殖系数达到2.6).春石斛品种‘火鸟’组培苗开始形成。
[0030]实施例2:以本发明的方法进行春石斛品种‘火鸟’丛生芽增殖继代
[0031]将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25±2°C、光照12h/d、光照强度2000?30001x的培养室内，每30?40d继代一次，继代3次生成生长健壮的组培苗(在继代第3次时其丛生芽增殖系数平均达到5.3);
[0032]3)壮苗生根:将生长健壮的试管苗采用2/3DKW培养基进行生根培养，30d后长成带根的春石斛品种‘火鸟’幼苗；
[0033]4)炼苗移栽:将带根的春石斛品种‘火鸟’幼苗进行炼苗移栽，即培养成春石斛品种‘火鸟’组培苗。
[0034]该发明方法诱导丛生芽分化达到快速增殖，进而诱导丛生芽生根，本发明可以使繁殖效率可达到8.0，生根率达到95 %，炼苗成活率96%。每株春石斛品种‘火鸟’在规模化的育苗条件下，一年能繁育几十万株，大大提高春石斛品种‘火鸟’的繁育效率。
[0035]以上所述实施举例仅是本发明之优选实施方式，是对本发明的进一步说明，但不用来限制本发明的范围。同时指出，对于本专业领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明技术原理的前提下，还可做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视作本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种春石斛品种‘火鸟，组培快繁方法，包括如下几个步骤: 采春石斛品种‘火鸟’嫩茎为外植体，依次进行I)嫩茎消毒、2)嫩茎诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽壮苗生根培养、5)炼苗移栽，组培苗出瓶上盆。2.根据权利要求1所述春石斛品种‘火鸟’的组培快繁方法，其特征在于:所述I)嫩茎消毒，为剪取春石斛品种‘火鸟’植株的当年生嫩茎，流水冲洗2?3h，在超净台上用75 %酒精处理30?40s，无菌水漂洗3?4次，用5 %次氯酸钠(NaClO，Sodium hypochlorite)消毒5min，再用0.3%升萊(二氯化萊，Mercury chloride)中消毒6min，之后无菌水漂洗3?4次，并用无菌滤纸吸去多余水分。3.根据权利要求1所述品种‘火鸟’组培快繁方法，其特征在于:所述2)丛生芽诱导的方法是:在无菌条件下将获得的嫩茎接种于诱导培养基上，在25 土 2°C，光照14?16h，pH值为5.8?6.0，光强30001x条件下培养，接种22d后新芽开始萌发，22?35d，获得丛生芽;45d后叶片展开。4.根据权利要求3所述的春石斛‘火鸟’茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，含有3.0mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，benzyIaminmopurine)、0.2mg/L的NAA(萘乙酉爱，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L琼月旨、20g/L葡萄糖的培养基。5.根据权利要求1所述‘火鸟，组培快繁方法，其特征在于:所述3)丛生芽增殖培养，为将经过诱导培养萌发的丛生芽，接种到增殖培养基上进行继代培养，扩大丛生芽数量，并使丛生芽继续生长。6.根据权利要求5所述的‘火鸟，茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述丛生芽增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，含有0.lmg/1的TDZ、0.2mg//L的NAA、200g.L—1 土豆泥、Ig.L—1活性炭、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。7.根据权利要求1所述‘火鸟，组培快繁方法，其特征在于:所述4)丛生芽壮苗生根培养基，为将经过充分继代的无根丛生芽接种到壮苗生根培养基上，培养12d后，基部产生白色不定根、培养35d毛根明显，形成完整植株。8.根据权利要求7所述的‘火鸟，茎段壮苗生根组培快繁的方法，其特征在于:所述丛生芽壮苗生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，含有0.5mg/L的IBA(吲哚丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基。9.根据权利要求1所述‘火鸟’组培快繁方法，其特征在于:所述5)炼苗移栽，为将形成完整根系的组培苗连瓶放入温室中炼苗4?6d，增加光照，后出瓶洗净放入干净基质中栽培，保持较高湿度。10.权利要求1-9任一项所述的品种‘火鸟’茎段组培快繁的方法在春石斛品种繁殖中的应用。
【文档编号】A01H4/00GK106069751SQ201610412130
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月14日 公开号201610412130.5, CN 106069751 A, CN 106069751A, CN 201610412130, CN-A-106069751, CN106069751 A, CN106069751A, CN201610412130, CN201610412130.5
【发明人】李振坚, 孙振元, 张俊民, 杨业波, 刘俊祥, 彭向永, 龚晓慧
【申请人】中国林业科学研究院林业研究所