本发明涉及铁皮石斛的种植技术领域，具体涉及一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法。
背景技术：
铁皮石斛是九大仙草之首，具有丰富的保健价值，把铁皮石斛的叶子和茎一起作为一种蔬菜食用，口感独特，营养丰富，价钱比铁皮石斛鲜条和干品便宜，更适合消费者购买。适应人群：学生、办公室白领、女性、亚健康人群和老年人。
目前市场上的铁皮石斛食用方法一般是铁皮石斛鲜条或者干品进行食用，或者做成保健食品后服用，食用方法比较复杂。而铁皮石斛种植从种子到食用一般需要3年时间，时间较长；且可采收的铁皮石斛鲜条的食用时，还需要进一步加工。
现有技术都是等铁皮石斛苗从组培瓶中移栽到特定的种植基质中，生长1年半左右时间，到达采收期采摘后才可食用。且在铁皮石斛苗栽培过程中，必然需要添加一定量的肥料和农药保证铁皮石斛幼苗的生长，而这必然会有农药或者重金属的残留，对人体有害。且种植周期较长，人工成本、种植成本较高。
技术实现要素：
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法，该培养方法培养时间短，培养得到的铁皮石斛组培苗的根茎叶都可以直接食用；铁皮石斛组培苗生长过程一直在组培瓶中进行，不需要添加农药化肥，无农药重金属残留，对人体绝对安全；且从种子到食用只有1年时间即可食用，大大缩短了生产周期。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法，包括如下步骤：
（1）配制培养基；分别配制原球茎培养基和母苗生根苗培养基，灭菌，备用；
（2）原球茎培养：取成熟的铁皮石斛种子，消毒后无菌播种至原球茎培养基中培养，得到原球茎；
（3）原球茎转接：取原球茎粒接种到母苗生根苗培养基中培养，长出母苗；
（4）生根壮苗：取母苗，剔净培养基和长根，得到独立的单株苗，接种到母苗生根苗培养基中培养，待单株苗长到5-8cm、且均匀分布有3-4条根时出瓶，得到可直接食用的铁皮石斛组培苗。
优选的，所述步骤（1）中，每升原球茎培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 100-150g/L
有机添加物 100-150g/L
琼脂粉 5-9g/L
蔗糖 25-35g/L
活性炭 0.5-1.5g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.8-1.2：0.4-0.6：0.4-0.6制得的提取物。
本发明的原球茎培养基通过采用活性炭，可吸附代谢过程中产生的废弃物，促进铁皮石斛的形态发生和器官形成。
山药、红薯、芋头含有比土豆含量高的生长素和细胞分裂素，天然的植物激素更有利于原球茎的生长，且对人体无害。三者复配可以充分利用三者的营养成分，帮助石斛苗生长。本发明的原球茎培养基通过采用有机添加物，富含氨基酸，维生素，植物生长调节物、酶等有机复合物成分，可以促进细胞增殖。
本发明的原球茎培养基适合铁皮石斛食用苗原球茎的诱导、增殖、分化、生根，且生长速度快，一般1年即可达到食用标准。
优选的，所述步骤（1）中，原球茎培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮25-35min后，超声波振动20-30min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.7-5.9，制得原球茎培养基。
优选的，所述步骤（1）中，每升母苗生根苗培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 100-150g/L
有机添加物 100-150g/L
琼脂粉 5-9g/L
蔗糖 25-35g/L
活性炭 0.5-1.5g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.4-0.6：0.8-1.2：0.8-1.2制得的提取物。
本发明的母苗生根苗培养基通过采用活性炭，可吸附代谢过程中产生的废弃物，促进铁皮石斛的形态发生和器官形成。
山药、红薯、芋头含有比土豆含量高的生长素和细胞分裂素，天然的植物激素更有利于原球茎的生长，且对人体无害。三者复配可以充分利用三者的营养成分，帮助石斛苗生长。由于母苗和生根苗的生长不需要太多的植物激素，因此母苗生根苗培养基中的山药成分降低。本发明的母苗生根苗培养基通过采用有机添加物，富含氨基酸，维生素，植物生长调节物、酶等有机复合物成分，可以促进细胞增殖。
本发明的母苗生根苗培养基适合铁皮石斛食用苗原球茎的诱导、增殖、分化、生根，且生长速度快，一般1年即可达到食用标准。
优选的，所述步骤（1）中，母苗生根苗培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮25-35min后，超声波振动20-30min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.7-5.9，制得母苗生根苗培养基。
优选的，所述步骤（1）中，灭菌温度为119-123℃，压力为0.08-0.12Mpa，时间为20-30min。
优选的，所述步骤（2）具体为：将成熟的铁皮石斛种子，采用酒精加次氯酸钠消毒后进行无菌播种，在原球茎培养基的组培瓶中培养2-3个月，种胚由黄绿色转变为绿色，并逐渐形成原球茎。
优选的，所述步骤（3）具体为：在无菌条件下，用小勺轻轻刮取150-200粒原球茎，均匀接种到灭菌过的母苗生根苗培养基中培养4-6个月，原球茎长出1-2cm株高的母苗。
优选的，所述步骤（4）具体为：在无菌条件下，用已经消毒过的镊子把母苗夹出培养瓶，用镊子和刀剔净培养基，长根切去，使其成为独立单株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三档，将单株苗由小到大的顺序接种至母苗生根苗培养基瓶中培养；当单株苗长到5-8cm，每一棵单株苗上都均匀分布有3-4条根时即可出瓶，得到可直接食用的铁皮石斛组培苗。
优选的，所述步骤（2）-（4）中，培养的光照强度值范围2000-3000LX，每天照射11-13h，培养温度为25±1℃。
本发明的有益效果在于：本发明的培养方法培养时间短，培养得到的铁皮石斛组培苗的根茎叶都可以直接食用；铁皮石斛组培苗生长过程一直在组培瓶中进行，不需要添加农药化肥，无农药重金属残留，对人体绝对安全；且从种子到食用只有1年时间即可食用，大大缩短了生产周期。
本发明采用的原球茎培养基和母苗生根苗培养基均由纯天然成分组成，不含激素，对人体完全无毒无害。本发明培养得到的铁皮石斛组培苗从组培瓶中取出，直接清洗去除培养基部分就可以直接食用，适合炒菜、凉拌、煲汤等各种食用方法。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法，包括如下步骤：
（1）配制培养基；分别配制原球茎培养基和母苗生根苗培养基，灭菌，灭菌温度为119℃，压力为0.08Mpa，时间为20min，备用；
（2）原球茎培养：将成熟的铁皮石斛种子，采用酒精加次氯酸钠消毒后进行无菌播种，在原球茎培养基的组培瓶中培养2个月，种胚由黄绿色转变为绿色，并逐渐形成原球茎；
（3）原球茎转接：在无菌条件下，用小勺轻轻刮取150粒原球茎，均匀接种到灭菌过的母苗生根苗培养基中培养4个月，原球茎长出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壮苗：在无菌条件下，用已经消毒过的镊子把母苗夹出培养瓶，用镊子和刀剔净培养基，长根切去，使其成为独立单株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三档，将单株苗由小到大的顺序接种至母苗生根苗培养基瓶中培养；当单株苗长到5-8cm，每一棵单株苗上都均匀分布有3-4条根时即可出瓶，得到可直接食用的铁皮石斛组培苗。
所述步骤（1）中，每升原球茎培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 100g/L
有机添加物 100g/L
琼脂粉 5g/L
蔗糖 25g/L
活性炭 0.5g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.8：0.4：0.4制得的提取物。
所述步骤（1）中，原球茎培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮25min后，超声波振动20min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.7，制得原球茎培养基。
所述步骤（1）中，每升母苗生根苗培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 100g/L
有机添加物 100g/L
琼脂粉 5g/L
蔗糖 25g/L
活性炭 0.5g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.4-0.6：0.8-1.2：0.8-1.2制得的提取物。
所述步骤（1）中，母苗生根苗培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮25min后，超声波振动20min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.7，制得母苗生根苗培养基。
所述步骤（2）-（4）中，培养的光照强度值范围2000LX，每天照射11h，培养温度为24℃。
实施例2
一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法，包括如下步骤：
（1）配制培养基；分别配制原球茎培养基和母苗生根苗培养基，灭菌，灭菌温度为120℃，压力为0.09Mpa，时间为22min，备用；
（2）原球茎培养：将成熟的铁皮石斛种子，采用酒精加次氯酸钠消毒后进行无菌播种，在原球茎培养基的组培瓶中培养2.5个月，种胚由黄绿色转变为绿色，并逐渐形成原球茎；
（3）原球茎转接：在无菌条件下，用小勺轻轻刮取160粒原球茎，均匀接种到灭菌过的母苗生根苗培养基中培养4.5个月，原球茎长出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壮苗：在无菌条件下，用已经消毒过的镊子把母苗夹出培养瓶，用镊子和刀剔净培养基，长根切去，使其成为独立单株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三档，将单株苗由小到大的顺序接种至母苗生根苗培养基瓶中培养；当单株苗长到5-8cm，每一棵单株苗上都均匀分布有3-4条根时即可出瓶，得到可直接食用的铁皮石斛组培苗。
所述步骤（1）中，每升原球茎培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 110g/L
有机添加物 110g/L
琼脂粉 6g/L
蔗糖 28g/L
活性炭 0.8g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.9：0.5：0.5制得的提取物。
所述步骤（1）中，原球茎培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮28min后，超声波振动22min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.8，制得原球茎培养基。
所述步骤（1）中，每升母苗生根苗培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 110g/L
有机添加物 110g/L
琼脂粉 6g/L
蔗糖 28g/L
活性炭 0.8g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.5：0.9：0.9制得的提取物。
所述步骤（1）中，母苗生根苗培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮28min后，超声波振动22min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.8，制得母苗生根苗培养基。
所述步骤（2）-（4）中，培养的光照强度值范围2200LX，每天照射11.5h，培养温度为23.5℃。
实施例3
一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法，包括如下步骤：
（1）配制培养基；分别配制原球茎培养基和母苗生根苗培养基，灭菌，灭菌温度为121℃，压力为0.1Mpa，时间为25min，备用；
（2）原球茎培养：将成熟的铁皮石斛种子，采用酒精加次氯酸钠消毒后进行无菌播种，在原球茎培养基的组培瓶中培养2.5个月，种胚由黄绿色转变为绿色，并逐渐形成原球茎；
（3）原球茎转接：在无菌条件下，用小勺轻轻刮取175粒原球茎，均匀接种到灭菌过的母苗生根苗培养基中培养3个月，原球茎长出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壮苗：在无菌条件下，用已经消毒过的镊子把母苗夹出培养瓶，用镊子和刀剔净培养基，长根切去，使其成为独立单株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三档，将单株苗由小到大的顺序接种至母苗生根苗培养基瓶中培养；当单株苗长到5-8cm，每一棵单株苗上都均匀分布有3-4条根时即可出瓶，得到可直接食用的铁皮石斛组培苗。
所述步骤（1）中，每升原球茎培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 120g/L
有机添加物 120g/L
琼脂粉 7g/L
蔗糖 30g/L
活性炭 1g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比1：0.5：0.5制得的提取物。
所述步骤（1）中，原球茎培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮30min后，超声波振动25min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.8，制得原球茎培养基。
所述步骤（1）中，每升母苗生根苗培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 120g/L
有机添加物 120g/L
琼脂粉 7g/L
蔗糖 30g/L
活性炭 1g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.5：1：1制得的提取物。
所述步骤（1）中，母苗生根苗培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮30min后，超声波振动25min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.8，制得母苗生根苗培养基。
所述步骤（2）-（4）中，培养的光照强度值范围2500LX，每天照射12h，培养温度为25℃。
实施例4
一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法，包括如下步骤：
（1）配制培养基；分别配制原球茎培养基和母苗生根苗培养基，灭菌，灭菌温度为122℃，压力为0.11Mpa，时间为28min，备用；
（2）原球茎培养：将成熟的铁皮石斛种子，采用酒精加次氯酸钠消毒后进行无菌播种，在原球茎培养基的组培瓶中培养2.5个月，种胚由黄绿色转变为绿色，并逐渐形成原球茎；
（3）原球茎转接：在无菌条件下，用小勺轻轻刮取190粒原球茎，均匀接种到灭菌过的母苗生根苗培养基中培养5.5个月，原球茎长出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壮苗：在无菌条件下，用已经消毒过的镊子把母苗夹出培养瓶，用镊子和刀剔净培养基，长根切去，使其成为独立单株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三档，将单株苗由小到大的顺序接种至母苗生根苗培养基瓶中培养；当单株苗长到5-8cm，每一棵单株苗上都均匀分布有3-4条根时即可出瓶，得到可直接食用的铁皮石斛组培苗。
所述步骤（1）中，每升原球茎培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 140g/L
有机添加物 140g/L
琼脂粉 8g/L
蔗糖 32g/L
活性炭 1.2g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比1.1：0.5：0.5制得的提取物。
所述步骤（1）中，原球茎培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮32min后，超声波振动28min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.8，制得原球茎培养基。
所述步骤（1）中，每升母苗生根苗培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 140g/L
有机添加物 140g/L
琼脂粉 8g/L
蔗糖 32g/L
活性炭 1.2g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.5：1.1：1.1制得的提取物。
所述步骤（1）中，母苗生根苗培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮32min后，超声波振动28min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.8，制得母苗生根苗培养基。
所述步骤（2）-（4）中，培养的光照强度值范围2800LX，每天照射12.5h，培养温度为24.5℃。
实施例5
一种可直接食用的铁皮石斛组培苗的培养方法，包括如下步骤：
（1）配制培养基；分别配制原球茎培养基和母苗生根苗培养基，灭菌，灭菌温度为123℃，压力为0.12Mpa，时间为30min，备用；
（2）原球茎培养：将成熟的铁皮石斛种子，采用酒精加次氯酸钠消毒后进行无菌播种，在原球茎培养基的组培瓶中培养3个月，种胚由黄绿色转变为绿色，并逐渐形成原球茎；
（3）原球茎转接：在无菌条件下，用小勺轻轻刮取200粒原球茎，均匀接种到灭菌过的母苗生根苗培养基中培养6个月，原球茎长出1-2cm株高的母苗；
（4）生根壮苗：在无菌条件下，用已经消毒过的镊子把母苗夹出培养瓶，用镊子和刀剔净培养基，长根切去，使其成为独立单株苗，按高度4cm以上、2-4cm和1-2cm分大、中、小三档，将单株苗由小到大的顺序接种至母苗生根苗培养基瓶中培养；当单株苗长到5-8cm，每一棵单株苗上都均匀分布有3-4条根时即可出瓶，得到可直接食用的铁皮石斛组培苗。
所述步骤（1）中，每升原球茎培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 150g/L
有机添加物 150g/L
琼脂粉 9g/L
蔗糖 35g/L
活性炭 1.5g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比1.2： 0.6： 0.6制得的提取物。
所述步骤（1）中，原球茎培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮35min后，超声波振动30min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.9，制得原球茎培养基。
所述步骤（1）中，每升母苗生根苗培养基包括如下组分：
只含大量元素的½MS培养液 150g/L
有机添加物 150g/L
琼脂粉 9g/L
蔗糖 35g/L
活性炭 1.5g/L；
其中，所述有机添加物是由山药、红薯和芋头以重量比0.6： 1.2： 1.2制得的提取物。
所述步骤（1）中，母苗生根苗培养基的制备方法为：按配方量称取山药、红薯和芋头清洗干净，去皮切碎煮35min后，超声波振动30min使营养成分完全溶出，过滤，收集滤液，得到有机添加物；将滤液加入½ MS培养液中，再加入琼脂粉、活性炭和蔗糖，用l.0mol/LNaOH或0.lmol/LHC1调节pH至5.9，制得母苗生根苗培养基。
所述步骤（2）-（4）中，培养的光照强度值范围3000LX，每天照射13h，培养温度为26℃。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。