一种玉竹组培叶片两步成苗方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及玉竹组培叶片两步成苗方法。
【背景技术】
[0002] 玉竹为百合科黄精属多年生草本植物，根茎横走，肉质黄白色密生多数须根。叶面 绿色，下面灰色。花腋生，通常1~3朵簇生。原产中国西南地区，但野生分布很广。耐寒，亦耐 阴，喜潮湿环境，适宜生长于含腐殖质丰富的疏松土壤。《本草经集注》云〃茎干强直，似竹箭 杆，有节。〃故有玉竹之名。
[0003] 玉竹分布区在海拔约为500- 3000 m的林下或山野阴坡，玉竹根茎可供药用，中药 名亦为玉竹，秋季采挖，洗净，晒至柔软后，反复揉搓，晾晒至无硬心，晒干，或蒸透后，揉至 半透明，晒干，切厚片或段用。玉竹是黄精属大宗药材，具有降血糖、血脂、血压等功效，市场 需求量巨大，开发前景广阔。本发明旨在通过组织培养技术叶片两步成苗法对玉竹种质资 源进行有效的繁育和保护，是目前对玉竹育苗最便捷、稳定的手段，可以节约大量的人力、 物力和场地，便于种质交换和转移，避免有害病虫的人为传播，为玉竹种质资源开发利用提 供支持。
【发明内容】
[0004] 本发明目的在于提供一种玉竹组培叶片两步成苗方法，能够短时间内提供大量优 质适合栽培的玉竹种苗。
[0005] 为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案： 一种玉竹组培叶片两步成苗法，其特征在于： (1) 叶片诱导分化不定芽培养:取玉竹幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~45 s，无 菌水2~3次，投入0.1% Hgch 5 min,无菌水2~3次，0.1% Hgch 3 min,无菌水2~3次冲洗 干后切分为0.5 cmXl cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为21~25 °C，光照强度 1800~2600 lux,光照时间为8~10小时/天的条件下，10~15天叶片分化出不定芽； (2) 不定芽壮苗生根培养:选择玉竹叶片分化1~1.5个月、幼嫩叶片上分化出的具有2 片以上叶子、高2~3 cm不定芽接种到壮苗生根培养基，在温度为21~25 °C，光照强度2000 ~2800 lux，光照时间为8~10小时/天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6 cm的无菌苗，根长平均根数4条以上、平均根长达2.5~4cm，生根率98%。
[0006] 上述诱导及分化培养基为：以M S为基本培养基，每升添加6-苄氨基嘌呤(6-BAH ~2.0 mg、a-萘乙酸(ΝΑΑ)0·3~1.0 mg、琼脂3.8~4.4 g和鹿糖20~25g, pH值5.8， 培养温度为23± 2 °C，光照强度1800~2600 lux,光照时间为8~10小时/天； 上述壮苗生根培养基为：以1/2 MS为基本培养基，每升添加 ΝΑΑ0.5~1.5mg、6-BA 0.2 ~0.5、吲噪丁酸（ΙΒΑ)0·5~1.0 mg,琼脂3.8~4.5g和蔗糖25~30g，pH值调节至 5.8〇
[0007] 采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，能够短时间内提供大量优质适 合栽培的玉竹种苗，并减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易 行、生产成本降低，有效解决了玉竹规模化育苗及种质资源保存问题。
【具体实施方式】
[0008] 下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0009] 玉竹组培叶片两步成苗方法，包括以下步骤： (1)叶片诱导分化不定芽培养:取玉竹幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~45 s，无 菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,无菌水2~3次，0.1% Hgcl2 3min,无菌水2~3次冲洗干 后切分为0.5 cmXl cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为21~25°C，光照强度1800 ~2600 lux，光照时间为8~10小时/天的条件下，10~15天叶片分化出不定芽。 m :不麵W不輕MW
[0010] 最佳的不定芽诱导及分化培养基为：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA0.3 mg/L+ KT 0.3 mg/L〇
[0011] (2)不定芽壮苗生根培养:选择玉竹叶片分化I~I.5个月高2~3 cm不定芽接种 到壮苗生根培养基，在温度为21~25 °C，光照强度2000~2800 lux，光照时间为8~10小 时/天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6 cm的无菌苗，根长平均根数4条以 上、平均根长达2.5~4cm,生根率98%。 表2 激素水TO不雜的調
[0012] 最佳的生根培养基为:MS+6-BA 0.2 mg/L+IBA 1.5 mg/L+ AC 0.5 mg/L。
[0013] 备注：6-BA(6-节氨基嘌呤），NAA(萘乙酸），KT(激动素），IBA(B引噪丁酸），AC (活性炭）。
【主权项】
1. 一种玉竹组培叶片两步成苗方法，其特征在于： (1) 叶片诱导分化不定芽培养:取玉竹幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~45 S，无 菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5 min,无菌水2~3次，0.1% Hgcl2 3 min,无菌水2~3次冲洗 干后切分为0.5 cmXl cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为21~25 °C，光照强度 1800~2600 lux,光照时间为8~10小时/天的条件下，10~15天叶片分化出不定芽； (2) 不定芽壮苗生根培养:选择玉竹叶片分化1~1.5个月、幼嫩叶片上分化出的具有2 片以上叶子、高2~3 cm不定芽接种到壮苗生根培养基，在温度为21~25 °C，光照强度2000 ~2800 lux，光照时间为8~10小时/天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6 cm的无菌苗，根长平均根数4条以上、平均根长达2.5~4cm，生根率98%。
【专利摘要】一种玉竹组培叶片两步成苗方法：取玉竹幼嫩叶片作为外植体进行灭菌处理，然后将其切分成0.5 cm×1 cm大小后接种到诱导及分化培养基上，1 ～1.5个月后选择幼嫩叶片上分化出的具有2片以上叶子、高2～3 cm的不定芽苗转接到壮苗生根培养基上，1～ 1.5个月无菌苗每株生根4条以上、根长达2.5～４ｃｍ，生根率98%。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量玉竹的优质种苗，并减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，有效解决了玉竹规模化育苗及种质资源保存问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105706929
【申请号】CN201610108415
【发明人】李翠, 张占江, 韦坤华, 韦莹, 缪剑华, 李林轩, 王一诺, 肖冬
【申请人】广西壮族自治区药用植物园