专利名称：草莓高效快速脱病毒新技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种农业生物新技术领域，尤其涉及一种草莓高效快速脱病毒新技术。
背景技术：
我国近年来发展很快，可是，草莓很容易感染多种病毒病，感染了病毒病的草莓叶子皱缩，生长缓慢，果子一年比一年小、畸形，品质差，一般减产30-80%。并逐年加重。草莓的经济效益大幅度下降，严重地阻碍了草莓生产的发展。同时生产出来的草莓由于品质差， 果子小、畸形；因此草莓病毒病是影响草莓产量和质量的重要病害，而且目前对病毒病还没用有效的农药进行防治，即使有一些农药可以用，但是病毒病防治效果很差，还往往引起农药残留超标，目前病毒病已经成为草莓生产的“癌症”。对于草莓病毒病目前唯一的办法就是设法去除草莓苗体内的病毒，即脱病毒，目前国内外有一些报道，但是去除病毒病的效果差异很大，技术难度大，去除率从20-60%不等，但是应用本研究采用的技术方法，病毒病的去除率可以达到90-100%。
发明内容
本专利技术是经过20多年专业进行生物技术脱病毒的研究工作而建立起来的， 应用本项目的技术，脱病毒效果可以达到90-100 %，同时脱病毒草莓苗已经在生产上应用试验10年，应用试验点达到100余个，草莓脱病毒技术已经通过了江苏省科技厅组织的科技成果鉴定，应用本专利技术培育出来的脱毒草莓在各地生产试验中均表现出明显的增产效果，增产效果达到50%左右，一般草莓感病毒愈严重，应用脱病毒苗后的增产效果愈明显；本专利技术包括以下4个方面的技术内容1.高温短时钝化病毒技术为了能够达到彻底脱病毒效果，首先对有病毒的草莓芽需要进行高温40-50°C， 5-20分钟短时预处理，由于病毒一般不耐高温，因此我们采用高温短时处理，达到部分杀死或者钝化病毒的效果，同时又不会杀死草莓芽，或者减少对芽的伤害。2.分生组织大小优化技术分生组织是位于草莓芽心正处于活跃分裂状态的一团细胞，一般为较少病毒，而且愈接近中心的细胞，含病毒就愈少，或者不含病毒。为此经过多年的反复研究，最后确定了最佳脱病毒效果的分生组织大小为0. 2-0. 5mm，切取生长点必须在体视显微镜下操作。3.细胞启动培养基配方在体视显微镜下解剖切取的分生组织大小是决定是否带有病毒的关键，分生组织细胞团愈大，带病毒的可能性就愈大，分生组织细胞团愈小，就不带病毒，或者很少带病毒， 因此理论上是细胞团愈小，脱病毒愈彻底，但是小的细胞团往往不能够培养出苗，难度很大，为此，我们经过数百次试验，已经成功建立了本专利的最优化的细胞启动培养基配方， 最小细胞团的培养成功率达到60%。
4.大量丛生芽培育技术草莓分生组织无病毒细胞团培养成功后，还需要解决快速繁殖，即克隆化的问题， 才能在生产上应用推广，为此我们在草莓丛生芽培养基试验中，进行了一系列培养基的优化试验，经过多年试验，得到了最佳草莓繁殖培养基配方，应用该培养基配方，可以达到年生产脱病毒草莓苗100万株的技术水平，完全可以满足脱毒草莓大面积生产中对草莓脱病毒试管苗的大量需求。本发明的应用效果应用本项目的技术，脱病毒效果可以达到90-100%，同时脱病毒草莓苗已经在生产上应用试验10年，应用试验点达到100余个，草莓脱病毒技术已经通过了江苏省科技厅组织的科技成果鉴定，应用本专利技术培育出来的脱毒草莓在各地生产试验中均表现出明显的增产效果，增产效果达到50%左右，一般来说，草莓感病毒愈严重，应用脱病毒苗后的增产效果愈明显。在草莓病毒病严重的地区，应用本专利技术生产的脱毒草莓苗，增产效果可以达到50-100%。
图1为本发明发现的草莓杆状病毒电子显微镜照片；图2为本发明发现的草莓粒状病毒电子显微镜照片；图3为本发明草莓分生组织大小的脱病毒效果实验示意图。
具体实施例方式本专利的技术流程1.采集草莓优良品种的感病毒材料-芽。2.将草莓芽洗净，置于流水冲洗10分钟。3.小心剥去外部叶片3-5张，取出中心芽。4.对有病毒的草莓芽进行高温40_50°C 5-20分钟短时预处理。5.对草莓芽先后用0. 氯化汞，2%次氯酸钠消毒10分钟。6.将无菌状态的草莓芽，置于体视显微镜下，进行无菌解剖，取出0. 2-0. 5mm的分生组织即生长点。7.在无菌条件下，将生长点置于最优化的细胞启动培养基上进行培养40天，获得无病毒愈伤组织。8.在无菌条件下，将无病毒愈伤组织转移到最佳草莓繁殖培养基上，培养30天获得大量丛生芽。9.在无菌条件下，将获得大量丛生芽转移到草莓生长培养基上，经过30天的培养，丛生芽生长成为无根试管苗。10.在无菌条件下，将无根试管苗转移到草莓生根培养基上培养20天，生长成为可以移栽的试管苗。11.将草莓试管苗移植到育苗苗床，经过1-2月的培育，成为脱毒草莓原种小苗。 脱毒草莓原种小苗移植到苗圃中进行正常气候条件下的繁殖，当年可以繁殖出50-100倍的脱毒草莓原种大苗，提供进行生产示范推广和应用。
权利要求
1.一种草莓高效快速脱病毒新技术，运用高温杀灭草莓芽的部分病毒，再解剖切取分生组织进行脱病毒培养和克隆化快速繁殖技术，培育出脱病毒的草莓试管苗。
2.根据权利要求1所述的草莓高效快速脱病毒新技术，其特征在于为了能够达到彻底的脱病毒效果，首先对有病毒的草莓芽需要进行高温40-50°C，5-20分钟短时预处理，由于病毒一般不耐高温，因此我们采用高温短时处理，达到部分杀死或者钝化病毒的效果，同时又不会杀死草莓芽，或者减少对芽的伤害。
3.根据权利要求1所述的草莓高效快速脱病毒新技术，其特征在于分生组织是位于草莓芽心正处于活跃分裂状态的一团细胞，一般为较少病毒，而且愈接近中心的细胞，含病毒就愈少，或者不含病毒，为此经过多年的反复研究，最后确定了最佳脱病毒效果的分生组织大小为0. 2-0. 5mm，该生长点必须在体视显微镜下操作。
全文摘要
本发明是一种草莓高效快速脱病毒新技术，该技术包括4个方面的技术内容首先通过高温短时钝化病毒技术，进行高温40-50℃，5-20分钟短时预处理，达到部分杀死或者钝化病毒的效果，然后再通过分生组织大小优化技术在体视显微镜下确定了最佳脱病毒效果的分生组织大小为0.2-0.5mm，再通过细胞启动培养基配方来启动无病毒细胞团的有丝分裂和生长，最后通过大量丛生芽培育技术进行了一系列培养基的优化试验，得到了最佳草莓繁殖培养基配方，达到年生产脱病毒草莓苗100万株的技术水平，应用本项目的技术，脱病毒效果可以达到90-100％，同时脱病毒草莓苗已经在生产上应用试验10年，应用试验点达到100余个，增产效果达到50％左右。
文档编号A01H4/00GK102499093SQ201110375059
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月23日 优先权日2011年11月23日
发明者高山林 申请人:天津中植科生物技术有限公司