一种三角梅无菌播种与快速繁殖方法
【专利摘要】本发明公开了一种三角梅无菌播种与快速繁殖方法，该方法包括：用种子进行无菌播种诱导发芽：对种子消毒灭菌后接入芽诱导培养基，在适宜的温度、光照时间、光照强度下进行芽诱导培养；继而利用芽增殖扩繁再诱导生根繁育种苗：萌发出的新芽接入芽增殖培养基中，在适宜的温度、光照时间、光照强度条件下进行芽增殖继代培养；芽增殖继代培养后的芽苗接入生根培养基，在适宜的温度、光照时间、光照强度条件下进行生根繁育种苗。本发明用种子作为繁殖外植体，种子处理简单，污染率低，种子的发芽率达到100﹪，30天芽增殖倍数达到5.22倍，生根率95.6﹪，且种苗的繁育不受时间季节的限制可周年生产。
【专利说明】
一种三角梅无菌播种与快速繁殖方法
技术领域
[0001]本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种三角梅无菌播种与快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]三角梅(Bougainvilleaglabra)系紫茉莉科叶子花属灌木，其花色多、花期长、花感繁荣，且耐瘠薄、耐干旱、适应性强，目前几乎全世界都有引种栽培，广泛应用于城市园林绿化与盆栽观赏，是赞比亚共和国国花和我国海南省省花、珠海市、深圳市、厦门市、柳州市、三亚市、海口市等市的市花。三角梅还是一种多用途的资源植物，所含的甜菜色素已用于开发天然食用色素;其叶片和根中分离得到的松醇可替代胰岛素治疗糖尿病且无胰岛素疗法带来的副作用;叶片和根中至少含有2种抗病毒蛋白，对于多种植物病毒具有不同程度的抑制作用，可用于开发低毒高效的生物农药，其产业前景非常广阔。
[0003]三角梅一般是用插条繁殖，难以用扦插繁殖的品种，可以通过压条法或嫁接法来繁殖。因此，繁殖材料需要量大，一些品种的繁殖时间较长，而珍贵品种则难以快速繁殖推广应用。同时这类传统的繁殖方法还可能受到恶劣天气的影响。
[0004]目前种子的采集与处理;种子的消毒灭菌方法;种子萌发和诱芽培养基配方的研制;芽增殖培养基配方的研制;诱导芽生根培养基配方的研制不很完善。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种三角梅无菌播种与快速繁殖方法，旨在解决目前种子的采集与处理;种子的消毒灭菌方法;种子萌发和诱芽培养基配方的研制;芽增殖培养基配方的研制;诱导芽生根培养基配方的研制不很完善的问题。
[0006]本发明是这样实现的，一种三角梅无菌播种与快速繁殖方法，该三角梅无菌播种与快速繁殖方法包括以下步骤:
[0007]用种子进行无菌播种诱导发芽:对种子消毒灭菌后接入芽诱导培养基MS+蔗糖中，在适宜的培养温度，光照时间，光照强度下进行芽诱导培养；
[0008]继而利用芽增殖扩繁再诱导生根繁育种苗:萌发出的新芽接入芽增殖培养基MS+6-BA+NAA+蔗糖中，在适宜的培养温度，光照时间，光照强度条件下进行芽增殖继代培养;芽增殖继代培养后的芽苗接入生根培养基MS+NAA+蔗糖中，在适宜的培养温度，光照时间，光照强度条件下进行生根繁育种苗。
[0009]进一步、三角梅无菌播种与快速繁殖方法具体包括:
[0010]种子消毒:选取饱满的三角梅种子，在超净工作台上放置于已消毒的玻璃瓶中，先用75 %酒精浸泡20s，倒去酒精，用无菌水涮洗3次，每次涮洗时间Imin，然后再用0.1 %HgCl2消毒8min，消毒液应高过种子约Icm，消毒过程中用手不停摇动玻璃瓶，倒去消毒液后用无菌水冲洗5次，每次涮洗时间Imin;
[0011]种子萌发和芽诱导培养:
[0012]种子接种于芽诱导培养基MS+蔗糖中，每袋接入I粒种子，在温度24_26°C，光照时间9h/d，光照强度15001x的培养条件下，进行种子萌发和芽诱导培养，5d后先长出根，15d后苗高2?3cm，长出1-3个茎节，诱导率100% ；
[0013]芽增殖继代培养:萌发出的新芽用解剖刀切分成长1.5cm的小段，含有一个的茎节，除去叶片，将下端插入芽增殖培养基中，在温度26-28°C，光照时间9h/d，光照强度I5001x的培养条件下培养。培养30d，芽的生长势好，茎粗壮，平均芽的高度由接种时的1.5增加到4.01cm，彡3cm可用于生根的芽数量多，占85.7%，每隔25-30d切分后转入相同的培养基中继代增殖；
[0014]生根培养:将高约3cm的芽苗从基部切下插入生根培养基中，在温度26_28°C，光照时间9h/d，光照强度I 5001x的培养条件下诱导生根，培养周期为30天，生根率达到95.6%，平均根数达到6.39条，植株健壮，叶色深绿。
[0015]进一步，种子消毒前需进行种子的采集与处理方法为:于夏季2月中、下旬采集三角梅种子，置于冰箱中贮藏备用，贮藏温度4°C。
[0016]进一步，芽诱导培养基为MS+蔗糖30g/L，pH值6.0。
[0017]进一步，芽增殖继代培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L，pH值
6.0ο
[0018]进一步，生根培养基为:MS+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.0。
[0019]三角梅现有技术主要采用其枝条扦插繁殖，一般选用1-2年生的枝条，切成长度12-15cm的插穗，插条和扦插基质均需消毒处理，20-30天长新根，40天后抽芽，扦插繁殖易受季节、气候影响，成活率70-95%。虽然枝条扦插成型较快，但一个插穗只可繁殖一株，因此需种量极大。现有技术的三角梅组培繁殖主要用茎段、叶片、叶柄、苞片等作为外植体，此类外植体均不易消毒且成活率低，以叶片、叶柄和苞片作为外植体还需经过愈伤组织诱导阶段，培养时间较长。本发明是用种子作为繁殖外植体，种子处理简单，成功率高，未污染种子发芽率达到100%，且无需诱导愈伤组织，30天芽增殖倍数达到5.22倍，生根率95.6%，且种苗的繁育不受时间季节的限制可周年生产。
[0020]本发明是以种子作为外植体的组织培养繁殖种苗方法，其种子处理简单，发芽率高;繁殖材料少，繁殖速度快;培养条件可控，不受季节限制，可周年生产;保存成本低，便于种质交换;利用胚培养技术克服杂交的不亲和性和杂交种胚的早期败育，增加新品种出现的机率和速度；
[0021]以种子为外植体的组织培养方法，经灭菌后不污染的种子发芽率达到100%，待发芽后以I个茎节为单位约1.5cm长度繁殖30天即可得到5.22个新芽，而扦插繁殖枝条长度为12-15cm，且一个插穗只可繁殖I株，因此，从繁殖材料的长度看，组织培养所需的繁殖材料约为扦插繁殖材料的1/10，增殖倍数却是扦插繁殖的5倍以上，而且无需再次采用新材料，每月均可以几何倍数增加。因全程培养均在培养室内进行，温度和光照等培养条件均可根据需要调节。目前三角梅主要通过杂交育种和芽变选种两种方法培育新的品种；大多数三角梅品种开完花后即自然落花，不易结种子，且种子土壤播种发芽率低(我们自播发芽率为O)，因此通过杂交培育新种有一定的难度;芽变选种是从优良芽变的植株上选取变异部分的芽或枝条，用无性繁殖的方法使变异性状得到延续和固定，经过初选、复选、决选等程序的选择、观察和鉴定，最后选出优系育成新品种；
[0022]利用种子无菌播种的组织培养方法获得新品种出现的途径有:1、种子有性繁殖性状分离可以获得多种表型的繁殖材料;2、培养过程中出现的芽变材料。在我们研究的10多个品种的无菌播种繁殖材料，每个品种均出现2 — 5个不同的表型，为培育新的品种提供了种质材料。
【附图说明】
[0023]图1是本发明实施例提供的三角梅无菌播种与快速繁殖方法流程图。
【具体实施方式】
[0024]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0025]下面结合附图对本发明的应用原理作进一步描述。
[0026]如图1所示:本发明提供的三角梅无菌播种与快速繁殖方法包括以下步骤:
[0027]SlOl:用种子进行无菌播种诱导发芽:对种子消毒灭菌后接入培养基MS+蔗糖中，在适宜的培养温度，光照时间，光照强度下进行芽诱导培养；
[0028]S102:继而利用芽增殖扩繁再诱导生根繁育种苗:萌发出的新芽接入培养基MS+6-BA+NAA+蔗糖中，在适宜的温度，光照时间，光照强度条件下进行芽增殖继代培养;芽增殖继代培养后的芽苗接入生根培养基MS+NAA+蔗糖中，在适宜的温度，光照时间，光照强度条件下进行生根繁育种苗。
[0029]本发明三角梅无菌播种与快速繁殖方法具体步骤包括:
[0030]种子消毒:选取饱满的三角梅种子，在超净工作台上放置于已消毒的玻璃瓶中，先用75 %酒精浸泡20s，倒去酒精，用无菌水涮洗3次，每次涮洗时间Imin，然后再用0.1 %HgCl2消毒8min，消毒液应高过种子约lcm，其间用手不停摇动玻璃瓶，倒去消毒液后用无菌水冲洗5次，每次涮洗时间Imin。
[0031]种子萌发和芽诱导培养:
[0032]培养基配方
[0033]|^+蔗糖3(^/1，？田直6.0。
[0034]培养条件
[0035]培养温度24_26°C，光照时间9h/d，光照强度15001x。
[0036]接种
[0037]种子接入培养基中5d后萌动，根先长出，15d后苗高2_3cm，长出1-3个茎节，诱导率100%，30(1污染率30%。
[0038]芽增殖继代培养
[0039]培养基配方
[0040]MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖 30g/L，pH 值 6.0。
[0041]培养条件
[0042]培养温度26_28°C，光照时间9h/d，光照强度I 5001x。
[0043]接种
[0044]萌发出的新芽用解剖刀切分成长约1.5cm的单个茎节接入培养基中培养，30d增殖系数达到5.22。以后每隔25-30d切分后转入相同的培养基中继代增殖。
[0045]生根培养
[0046]培养基配方
[0047]MS+NAA I.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.0。
[0048]培养条件
[0049]培养温度26_28°C，光照时间9h/d，光照强度I 5001x。
[0050]接种
[0051 ] 切取高约3cm的芽苗接入生根培养基中，14d开始生根，30d生根率95.6%,平均每株生根6.39条，植株健壮，叶色浓绿。
[0052]进一步，种子消毒前需进行种子的采集与处理:
[0053]种子采集:于夏季2月中、下旬采集三角梅种子，置于冰箱中贮藏备用，贮藏温度4-C。
[0054]三角梅插条繁殖易受季节、气候影响，繁殖系数低且需种量大，现有三角梅组培繁殖主要用茎段、叶片、叶柄和苞片作为外植体，其不易消毒且成活率低，以叶片、叶柄和苞片作为外植体还需经过愈伤组织诱导阶段，培养时间较长。本发明是用种子作为繁殖外植体，种子处理简单，污染率低，成功率高，未污染种子发芽率达到100 %，无需诱导愈伤组织，30天芽增殖倍数达到5.22倍，生根率95.6 %，且种苗的繁育不受时间季节的限制可周年生产。
[0055]本发明是以种子作为外植体的组织培养繁殖种苗方法，其种子处理简单，发芽率高;繁殖材料少，繁殖速度快;培养条件可控，不受季节限制，可周年生产;保存成本低，便于种质交换;利用胚培养技术克服杂交的不亲和性和杂交种胚的早期败育，增加新品种出现的机率和速度。
[0056]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种三角梅无菌播种与快速繁殖方法，其特征在于，该三角梅无菌播种与快速繁殖方法包括以下步骤: 用种子进行无菌播种诱导发芽:对种子消毒灭菌后接入芽诱导培养基MS+蔗糖中，在适宜的培养温度，光照时间，光照强度下进行芽诱导培养； 继而利用芽增殖扩繁再诱导生根繁育种苗:萌发出的新芽接入芽增殖培养基MS+6-BA+NAA+蔗糖中，在适宜的培养温度，光照强度，光照时间条件下进行芽增殖继代培养;芽增殖继代培养后的芽苗接入生根培养基MS+NAA+蔗糖中，在适宜的培养温度，光照强度，光照时间条件下进行生根繁育种苗。2.如权利要求1所述的三角梅无菌播种与快速繁殖方法，其特征在于，三角梅无菌播种与快速繁殖方法具体包括: 种子消毒:选取饱满的三角梅种子，在超净工作台上放置于已消毒的玻璃瓶中，先用75%酒精浸泡20s，倒去酒精，用无菌水涮洗3次，每次涮洗时间Imin，然后再用0.1 %HgCl2消毒8min，消毒液高过种子lcm，消毒过程中用手不停摇动玻璃瓶，倒去消毒液后用无菌水冲洗5次，每次涮洗时间Imin; 种子萌发和芽诱导培养: 种子接种入芽诱导培养基MS+蔗糖中，每袋接入I粒种子，在培养温度24-26°C，光照时间9h/d，光照强度15001x的条件下，5d后萌动，15d后苗高2-3cm，有1-3个茎节； 芽增殖继代培养:萌发出的新芽用解剖刀切分成长1.5cm的小段，含有一个的茎节，除去叶片，将下端插入芽增殖培养基中，在温度26-280C，光照时间9h/d，光照强度15001x的培养条件下培养，每隔25-30d切分后转入相同的培养基中继代增殖； 生根培养:将高约3cm的芽苗从基部切下插入生根培养基中，在温度26-28°C，光照时间9h/d，光照强度I 5001x的培养条件下诱导生根，培养周期为30d。3.如权利要求1所述的三角梅无菌播种与快速繁殖方法，其特征在于，种子消毒前需进行种子的采集与处理方法为:于夏季2月中、下旬采集三角梅种子，置于冰箱中贮藏备用，贮藏温度4°C。4.如权利要求2所述的三角梅无菌播种与快速繁殖方法，其特征在于，芽诱导培养基为13+蔗糖3(^/1，？田直6.0。5.如权利要求2所述的三角梅无菌播种与快速繁殖方法，其特征在于，芽增殖继代培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖 30g/L，pH 值 6.0。6.如权利要求2所述的三角梅无菌播种与快速繁殖方法，其特征在于，生根培养基为:MS+NAA 1.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.0。
【文档编号】A01H4/00GK106069753SQ201610429327
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月16日
【发明人】潘梅, 云勇, 符瑞侃, 杨珺, 戚华沙, 黄赛, 吕德任, 王景飞, 任军方
【申请人】海南省农业科学院热带园艺研究所