黄金锦络石的组织培养方法
【专利摘要】本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及金叶络石的组织培养方法，属于生物【技术领域】。按照本发明提供的技术方案，黄金锦络石的组织培养方法，其通过无菌材料的选取、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗与移栽得到黄金锦络石。本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高等缺点，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促进生长和提高成活率。
【专利说明】黄金锦络石的组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及金叶络石的组织培养方法，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]黄金锦络石是夹竹桃科络石属，亚洲络石的变种。新叶橘黄色，老叶亮绿色，由于新叶向老叶过渡，整株植物叶色呈现花斑状，包含3~4种不同的颜色，是优良的园林绿化色叶植物。黄金锦络石适应性强，在干旱、水涝、寒冷和高温的条件下均能保持一定的生命力。此外，黄金锦络石具有蔓性的特点，园林上广泛用于地被和垂直绿化，也可做盆栽观赏。但由于其扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高，制约了黄金锦络石的推广速度。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于克服上述不足之处，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促进生长和提高成活率。
[0004]按照本发明提供的技术方案，黄金锦络石的组织培养方法，步骤为:
(1)无菌材料的选取:选取生长健壮，带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为外植体；在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消毒l(T40s，然后用无菌水冲洗3飞遍，再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒l(T30min，然后用无菌水冲洗4飞遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用；
(2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽；将茎段接种到不定芽的诱导培养基上；培养30天时间，培养条件温度在23~26°C，光照强度为 150(T2000Lux，光照时间 12h ；
(3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养；培养条件温度在23~26°C，光照强度为1500~2000Lux，光照时间12h ；
(4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮，高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上；30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到3~6cm ；
(5)炼苗与移栽:将步骤(4)中高度大于3cm，叶片数在4飞片、根系长度在2~5cm的组培苗进行炼苗；打开瓶盖7天，使其适应外界环境；7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡5~30min，移栽至大棚内，适度遮光，即可。
[0005]步骤(2)所述诱导培养基为MS培养基:+0.5^1.0mg/L 6_苄氨基腺嘌呤；+0.1~1.0mg/L萘乙酸；+0.1~0.5mg/L苯基噻二唑基脲；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH 为 5.8。
[0006]步骤(3)所述增殖培养基为MS培养基:+0.5^3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤；+0.1~0.5mg/L萘乙酸；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5.8。[0007]步骤(4)所述生根培养基为1/2MS培养基:+0.1~1.0 mg/L吲哚丁酸；+0.1~0.5 mg/L萘乙酸；+30 g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉;+1%~4%活性炭，调节pH为5.8。
[0008]本发明的有益效果:本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高等缺点，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促进生长和提闻成活率。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤:
(1)无菌材料的获得:选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒20s，然后用无菌水冲洗3遍，再用质量浓度为5%次氯酸钠溶液消毒20分钟，然后用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用。
[0010](2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+0.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.lmg/L萘乙酸+0.lmg/L苯基噻二唑基脲+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，ρΗ5.8。培养30天时间，培养条件温度在25°C，光照强度为1500Lux，光照时间12h。
[0011](3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养基为MS+1.5 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.2 mg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养。培养条件温度在25°C，光照强度为1500LUX，光照时间12h。
[0012](4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上。生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L吲哚丁酸+0.1 mg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+1%活性炭，pH5.8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到4cm。
[0013](5)炼苗与移栽:将高度大于3cm，叶片数在4片、根系长度在2cm的组培苗进行炼苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡5分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
[0014]实施例2
黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤:
(2)无菌材料的获得:选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒30s，然后用无菌水冲洗4遍，再用质量浓度为10%次氯酸钠溶液消毒10分钟，然后用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用。
[0015](2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+1.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.2mg/L萘乙酸+0.6mg/L苯基噻二唑基脲+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，ρΗ5.8。培养30天时间，培养条件温度在·26°C，光照强度为2500Lux，光照时间12h。
[0016](3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养基为MS+2.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.5 mg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，ρΗ5.8。7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养。培养条件温度在26°C，光照强度为2000LUX，光照时间12h。
[0017](4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上。生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L吲哚丁酸+0.5 mg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+2%活性炭，pH5.8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到4cm。
[0018](5)炼苗与移栽:将高度大于3cm，叶片数在5片、根系长度在3cm的组培苗进行炼苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡10分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
[0019]实施例3
黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤:
(1)无菌材料的获得:选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒40s，然后用无菌水冲洗6遍，再用质量浓度为30%次氯酸钠溶液消毒30分钟，然后用无菌水冲洗6遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用。
[0020](2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+0.6mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.3mg/L萘乙酸+0.5mg/L苯基噻二唑基脲+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。培养30天时间，培养条件温度在25°C，光照强度为1500Lux，光照时间12h。
[0021](3)增殖培养: 将步骤(2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.5 mg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养。培养条件温度在25°C，光照强度为1500LUX，光照时间12h。
[0022](4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上。生根培养基为1/2MS+1.0mg/L吲哚丁酸+0.5 mg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+4%活性炭，pH5.8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到6cm。
[0023](5)炼苗与移栽:将高度大于3cm，叶片数在4片、根系长度在5cm的组培苗进行炼苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
[0024]本发明中不同激素对黄金锦络石茎段不定芽诱导的情况见表1。
[0025]表1
【权利要求】
1.黄金锦络石的组织培养方法，其特征是步骤为:(1)无菌材料的选取:选取生长健壮，带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为外植体；在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消毒l(T40s，然后用无菌水冲洗3飞遍，再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒l(T30min，然后用无菌水冲洗4飞遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用；(2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽；将茎段接种到不定芽的诱导培养基上；培养30天时间，培养条件温度在23~26°C，光照强度为 150(T2000Lux，光照时间 12h ；(3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养；培养条件温度在23~26°C，光照强度为150(T2000Lux，光照时间12h ；(4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮，高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上；30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到3飞cm ；(5)炼苗与移栽:将步骤(4)中高度大于3cm，叶片数在4飞片、根系长度在2~5cm的组培苗进行炼苗；打开瓶盖7天，使其适应外界环境；7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡5~30min，移栽至大棚内，适度遮光，即可。
2.如权利要求1所述黄金锦络石的组织培养方法，其特征是:步骤(2)所述诱导培养基为MS培养基:+0.5~1.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤；+0.1~?.0mg/L萘乙酸；+0.1~θ.5mg/L苯基噻二唑基脲；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5.8。
3.如权利要求1所述黄金锦络石的组织培养方法，其特征是:步骤(3)所述增殖培养基为MS培养基:+0.5~3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤；+0.~1θ.5mg/L萘乙酸；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5.8。
4.如权利要求1所述黄金锦络石的组织培养方法，其特征是:步骤(4)所述生根培养基为1/2MS培养基:+0.1~1.0 mg/L吲哚丁酸；+0.1~0.5 mg/L萘乙酸；+30 g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉；+1%~4%活性炭，调节pH为5.8。
【文档编号】A01H4/00GK103651147SQ201310729926
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月26日 优先权日:2013年12月26日
【发明者】王莹, 代克岩, 周丽, 赵湘 申请人:江苏美尚生态景观股份有限公司