一种繁殖滇山茶的方法
【专利摘要】本发明涉及一种繁殖滇山茶的方法，属园艺植物种苗繁殖【技术领域】。本发明的技术关键：一、微嫁接法取培养2周的砧木组织培养苗，瓶内苗高2-2.5cm，在超净工作台上开瓶并移出瓶外，切除上部芽的部分，保留下段1-1.5cm，之后用消毒过的手术刀片，从切口中部劈开约0.5cm。取培养7周的组培接穗苗出瓶，削取上端（尖端）约1cm顶芽，削成楔形后将顶芽穗插入砧木苗的劈口中（劈口缝中），接入培养基中直立培养。微嫁接时要求砧木和接穗都带有叶片。二、微嫁接苗的生根培养1/2MS(去肌醇)+NAA0.75mg/L+IBA0.75mg/L+水解乳蛋白500mg/L+活性炭750mg/L+蔗糖5g/L+琼脂8g/L。
【专利说明】一种繁殖滇山茶的方法
【技术领域】
[0001]本项发明属园艺植物种苗繁殖【技术领域】。
【背景技术】
[0002]漠山茶reticulata Lindl.)又名云南山茶花,属于山茶科(Theaceae)山茶属，为我国十大传统名花之一。滇山茶四季常绿，花大色艳，品种繁多，花期每年十月至来年四月。现在山茶花园艺栽培中多采用传统繁殖技术的种子繁殖、扦插繁殖、嫁接繁殖，近年有应用组织培养繁殖的报道。
[0003]由于种子繁殖的山茶花后代变异大，不能保持原品种的优良性状，所以种子繁殖一般用于培育山茶花新品种。扦插繁殖能保持原品种的优良性状和特征，繁殖速度较快，但需要大量的优良品种的枝条，受制于优良品种基数枝条，且扦插繁殖是用当年生的新枝杆条，而必须等到新枝条半木质化或成熟而尚未老化之时进行。枝条过嫩，营养不良，叶柄会发黑，脱落而扦插失败；枝条过老分生机能与再生能力减退，不容易产生愈伤组织，影响发根。因此扦插繁殖对母本枝条要求多、要求高，制约了山茶的规模化生产。
[0004]嫁接繁殖也能保持原品种的优良性状特征，能增强山茶花抵抗病菌和适应环境的能力，抗逆性强，还能使繁殖的山茶矮化，创造良好的树形，但在生产中，同样存在用枝量大，优良品种枝量有限的矛盾。基于上述原因迫使我们开辟使用繁殖速度更快，用枝量省的组织培养繁殖方法繁殖山茶，但在生产实践中，组织培养生产的山茶种苗存在抗逆性差、适应性差，幼苗到成熟开花所需时间较长的缺陷。为解决上述问题，该发明将组织培养技术用于繁殖砧苗和穗苗，并将嫁接技术结合于组织培养过程中，形成组织培养砧、穗苗微接技术。该方法既有组织培养繁殖山茶砧、穗苗速度快的特点，微接后所生产的种苗又有抗逆性强，适应性广，开花早的优点。解决了山茶组织培养繁殖速度快，但幼苗抗，逆性差，适应性窄，幼苗到开花所需时间较长的缺陷，又解决了山茶传统嫁接繁殖每年接穗、砧木数量少，难以规模化生产的不足，实现优良山茶品种的规模化生产。
`[0005]经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。
【发明内容】
[0006]一、山茶砧木及接穗的组织培养 1、砧木组织培养苗的繁殖
采红花油茶(C<3?e77ia chekiangoleosa Hu)健壮的芽荀,先用洗洁精清洗5分钟后，用自来冲洗10分钟，然后用75%酒精消毒2分钟后,用无菌水冲洗干净,再用次氯酸钠5%溶液浸泡消毒5分钟，用无菌水冲洗6遍以上，得到灭菌山茶芽苞。将灭菌山茶芽苞在超净工作台上，剥去所有苞片，最后切取0.3-lcm的芽尖接种于培养基中。接种的培养基为MS+6BA0.6-lmg/L+NAA0.1-0.3mg/L+ 蔗糖 20g/L+ 琼脂 8g/L。
[0007]2、接穗组织培养苗的繁殖
采狮子头reticulata ‘Lion’s Head’)健壮的芽荀,方法及过程同站木组织培养繁殖，获得组织培养接穗苗。
[0008]二、微嫁接
1、微嫁接
采用微枝嫁接的劈接法。取培养2周的砧木组织培养苗，瓶内苗高2-2.5cm，在超净工作台上开瓶并移出瓶外，切除上部芽的部分，保留下段1-1.5cm，之后用消毒过的手术刀片，从切口中部劈开约0.5cm。取培养7周的组培接穗苗出瓶，削取上端(尖端)约Icm顶芽，削成楔形后将顶芽穗插入砧木苗的劈口中(劈口缝中)，接入培养基中直立培养。微嫁接时要求砧木和接穗都带有叶片。
[0009]2、培养条件
培养基配方 MS+BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+蔗糖 30g/L，pH=5.8。培养光照强度为 2000LX，光照时间12-16h。培养温度为25°C。
[0010]三、微嫁接苗的生根培养
将微接成活的山茶苗，转接于生根培养基上。培养基为1/2MS(去肌醇)+NAA0.75mg/L+IBA0.75mg/L+水解乳蛋白500mg/L+活性炭750mg/L+蔗糖5g/L+琼脂8g/L。置于光照2000LX，温度25°C条件下培养，约30天左右出现根系。
[0011]四、出瓶炼苗
60天后，将微接组培苗出瓶，去除接口歪斜幼苗，将幼苗移到珍珠岩基质中，置于塑料大棚中炼苗约40天后，将炼好的苗上盆培养(栽培)或移入土壤中栽培。
[0012]五、该方法的优越性
采用“组培砧穗微嫁接法”繁殖山茶花的方法，将组培技术的繁殖速度快与嫁接技术根系发达、抗逆性强、适应性广的优点巧妙结合。由于微嫁接后的苗在组织培养瓶中无菌、高湿、接合面积微小等条件下，微接的伤口容易产生愈伤组织及快速愈合，可以免去传统嫁接伤口包括伤口保湿、愈伤组织产生及形成层难准确对准等难点问题，形成自身既有山茶组培繁殖速度快，又有所生产的苗抗逆性强、适应性广，开花早的优点，实现优良品种的规模化生产。
[0013]【具体实施方式】
一、山茶砧木及接穗的组织培养
1、砧木组培苗的繁殖
采红花油茶(C<3?e77ia chekiangoleosa Hu)健壮的芽荀先用洗洁精清洗5分钟后，用自来冲洗10分钟，然后用75%酒精消毒2分钟后,用无菌水冲洗干净,再用次氯酸钠5%溶液浸泡消毒5分钟，用无菌水冲洗6遍以上，得到灭菌山茶芽苞。将灭菌山茶芽苞在超净工作台上，剥去所有苞片，最后切取0.3-lcm的芽尖接种于培养基中。接种的培养基为MS+6BAlmg/L+NAA0.3mg/L+ 蔗糖 20g/L+ 琼脂 8g/L。
[0014]2、接穗组培苗的繁殖
采狮子头reticulata ‘Lion’s Head’)健壮的芽荀先用洗洁精清洗5分钟后，用自来冲洗10分钟，然后用75%酒精消毒2分钟后，用无菌水冲洗干净，再用次氯酸钠5%溶液浸泡消毒5分钟，用无菌水冲洗6遍以上，得到灭菌山茶芽苞。将灭菌山茶芽苞在超净工作台上，剥去所有苞片，最后切取0.3-lcm的芽尖接种于培养基中。接种的培养基为MS+6BA0.6-lmg/L+NAA0.1-0.3mg/L+ 蔗糖 20g/L+ 琼脂 8g/L。[0015]二、微嫁接
采用微枝嫁接的劈接法。取培养2周的砧木组织培养苗，瓶内苗高2-2.5cm，在超净工作台上开瓶并移出瓶外，切除上部芽的部分，保留下段1-1.5cm，之后用消毒过的手术刀片，从切口中部劈开约0.5cm。取培养7周的组培接穗苗出瓶，削取上端(尖端)约Icm顶芽，削成楔形后将顶芽穗插入砧木苗的劈口中(劈口缝中)，接入培养基中直立培养。微嫁接时要求砧木和接穗都带有叶片。培养基配方MS+ B Al.0mg/L+NAA0.lmg/L+蔗糖30g/L，pH=5.8。光照强度为2000LX，光照时间12-16h。培养温度为25°C。将微接的山茶苗，转接于生根培养基上，增养基为1/2MS (去肌醇)+IBA0.5mg/L+蔗糖5g/L+琼脂8g/L。
[0016]三、微接苗的生根培养
将微接成活的山茶苗，转接于生根培养基上。培养基为1/2MS(去肌醇)+NAA0.75mg/L+IBA0.75mg/L+水解乳蛋白500mg/L+活性炭750mg/L+蔗糖5g/L+琼脂8g/L。置于光照2000LX，温度25°C条件下培养，约30天左右出现根系。
[0017]四、出瓶炼苗
60天后，将微接组培苗出瓶，去除接口歪斜幼苗，将幼苗移到珍珠岩基质中，置于塑料大棚中炼苗约40天后，将炼 好的苗上盆培养(栽培)或移入土壤中栽培。
【权利要求】
1.微嫁接方法 取培养2周的砧木组织培养苗，瓶内苗高2-2.5cm,在超净工作台上开瓶并移出瓶外，切除上部芽的部分，保留下段1-1.5cm,之后用消毒过的手术刀片，从切口中部劈开约0.5cm。
2.取培养7周的组培接穗苗出瓶，削取上端(尖端)约Icm顶芽，削成楔形后将顶芽穗插入砧木苗的劈口中(劈口缝中)，接入培养基中直立培养。
3.微嫁接时要求砧木和接穗都带有叶片。
4.微嫁接苗的生根培养配方 培养基为1/2MS(去肌醇)+NAA0.75mg/L+IBA0.75mg/L+水解乳蛋白500mg/L+活性炭750mg/L+ 鹿糖 5g/L+ 琼脂· 8g/L。
【文档编号】A01H4/00GK103704142SQ201410019431
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2014年1月16日 优先权日:2014年1月16日
【发明者】飞亚宏 申请人:飞亚宏