一种快速建立yy超雄黄颡鱼改良繁育系的方法
【专利摘要】本发明公开了一种快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法，主要步骤为：筛选黄颡鱼野生雄性亲本、黄颡鱼野生亲本种质资源评估、通过与现有YY♀交配构建YY♂和YY♀基础育种群体、YY♂和YY♀基础育种群体的选育、YY♂和YY♀的测交验证、YY♂超雄黄颡鱼改良繁育系的快速扩群以及YY♂超雄黄颡鱼改良繁育系的建立，重复最后一步，即可建立成所述改良繁育系。本发明的方法增加了超雄鱼的遗传多样性，提高了受精率、孵化率与存活率，同时可以缩短育种时间，更可以批量进行，规模化生产性状改良的YY♂超雄鱼和XY全雄鱼，大大提高产量，增加经济效益。
【专利说明】一种快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及鱼类养殖新品种改良及鱼类生理遗传繁殖【技术领域】，是以传统群体选育、微卫星标记、人工性逆转、鱼类性别特异性分子标记PCR检测和测交验证等集成技术，提高全雄黄颡鱼生产性能的控制鱼类性别及品系改良，一种快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法。
【背景技术】
[0002]黄颡鱼是淡水养殖的重要鱼类。据《2013中国渔业统计年鉴》数据显示，2012年黄颡鱼养殖产量达25.7万吨，苗种需求估计量达150亿尾。但是由于黄颡鱼苗种生产存在规模小、质量差、市场混乱等问题，优质苗种的匮乏已成为目前限制黄颡鱼养殖业快速发展的瓶颈。
[0003]在相同的养殖条件下，雄性黄颡鱼比同胞雌鱼的生长速度快30%以上，因此，发明人发明了采用性逆转和雌核发育持续产生全雄黄颡鱼(专利号:ZL 200610166518.8)的方法，建立了超雄黄颡鱼繁育种群(专利号:ZL 200810197519.8)。该技术体系能够满足全雄黄颡鱼的规模化可持续生产的需要，为全雄黄颡鱼新品种在全国应用和推广打下坚实的基础。其中超雄黄颡鱼繁育系的稳定性和可靠性在全雄黄颡鱼的可持续利用方面具有非常重要的地位，目前该繁育系中YY生理雌鱼是来自于YY超雄鱼性逆转的产物，均是来自于同一家系，且均是雌核发育的后代，所以亲缘关系非常近。如果超雄黄颡鱼繁育系长期实施近交，可能会引起如生长性能和繁殖能力等性状下降，表现出近交衰退现象，对全雄黄颡鱼的可持续利用是不利的。
[0004]近十几年来，科研人员通过基因工程技术、细胞工程技术和杂交育种技术等在水产动物遗传改良，新品种选育和病害控制基础研究，特别是在养殖性状的遗传改良方面取得了一定进展。但是还未见结合`传统群体选育、微卫星标记、人工性逆转、鱼类性别特异性分子标记PCR检测和测交验证等技术，对YY超雄黄颡鱼繁育系进行遗传改良的报道。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是来自于同一家系的繁育系会出现近交衰退现象，对全雄黄颡鱼可持续利用不利而现有技术没有一种快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法。
[0007]本发明提供的快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法，步骤如下:
(1)筛选黄颡鱼野生雄性亲本:从不同水域收集野生黄颡鱼作为不同的地理群体，筛选出个体大、体色纯正和二龄以上的雄性亲本XY ?个体；
(2)黄颡鱼野生亲本种质资源评估:分析步骤(1)筛选出的不同地理群体雄性亲本的遗传多样性和地理群体间亲缘关系，进行遗传评价，筛选出遗传多样性最丰富的地理群体；
(3)构建YY^和YY早基础育种群体:步骤(2)筛选出的地理群体雄性亲本XY ^，与现有YY早卵子交配，子代(含XY ?和YY ? )形成YY t雄性基础育种群体；部分子代(含XY t和YY ?)用雌激素进行人工性逆转(逆转成XY早和YY早)，形成YY早雌性基础育种群体；
(4)ΥΥ?和YY早基础育种群体的选育:步骤(3)获得的两个基础育种群体均培育至冬片阶段，分别淘汰小个体50%，留下的培育至春片再淘汰小个体50% ;留下来的个体用X染色体特异标记引物进行基因型PCR鉴定，剔除含有X染色体的黄颡鱼，留YY ?和YY早备用，强化培育作为候选亲鱼；
(5)YY ?和YY早的测交验证:候选亲鱼YY ?与XX早交配，候选亲鱼YY早与XY ?交配，筛选测交后代中均为100%雄鱼的家系，获取改良YY ^和改良YY早品系；
(6)YY ?超雄黄颡鱼改良繁育系的快速扩群:取步骤(5)的改良YY ?和改良YY早进行交配、改良YY ^和现有YY早进行交配、或改良YY早和现有YY ^进行交配，获得100%的YY ^超雄黄颡鱼；
(J)Ti ?超雄黄颡鱼改良繁育系的建立:取步骤(6)的100% YY ?超雄黄颡鱼，在鱼苗开口时，取一部分YY ?超雄鱼按步骤(3)，用雌激素诱导性逆转成为YY早生理雄鱼；将YY ^超雄鱼和YY早生理雌鱼养至性成熟后，再进行交配，持续生产YY ^超雄鱼；
重复步骤(7)，建立成YY超雄鱼改良繁育系。
[0008]其中步骤(5)测交筛选的方法:候选雌鱼(含有XY早和YY早)，和普通雄鱼(XY古)测交，如果是YY早，则后代均为雄性(基因型为YY或ΧΥ，各占约50%)，如果是XY早，则后代有1/4雌鱼(基因型XX占25%为雌鱼；基因型XY占50%，YY占25，均为雄鱼);候选雄鱼(含有XY ?和YY ^ )，和普通雌鱼(XX早)测交，如果是YY ^，后代均为雄性(基因型XY),如果是XY ?，后代有1/2雄鱼(基因型XX占50%为雌鱼，基因型XY占50%为雄鱼)。
[0009]其中所述现有YY早和现有YY ^均为现有技术已知，例如专利号ZL200810197519.8公开的方法建立的超雄鱼繁育系中的生理雌鱼YY早和超雄鱼YY古。
[0010]优选地，步骤(1)中每个水域收集的野生黄颡鱼不低于1000尾，筛选出的雄性亲本XY ?不低于200尾。数量越多，越可以维持种群的遗传多态性。
[0011]优选地，步骤(2)采用微卫星标记技术进行遗传多样性和地理群体间亲缘关系。
[0012]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
1.引入野生种质资源，同时建立多个改良YY超雄黄颡鱼繁育系，增加了超雄鱼的遗传多样性，提高了受精率、孵化率与存活率。
[0013]2.利用原有的YY生理雌鱼，并结合了染色体性别特异分子标记和测交验证技术，只需2代就可以建立超雄鱼改良系，它适用于雄性配子异型鱼类超雄鱼改良繁育体系的建立。该技术比专利ZL 200810197519.8中的技术缩短了一代育种时间，可见，这种繁育种群的方法是快速的、有效的。
[0014]3.有明显的经济和社会效益:由于采用了 YY早生理雌鱼和YY ^超雄鱼交配法，可以迅速获得大量的改良YY ?超雄鱼，产品可批量进行，改良YY ?超雄鱼与普通XX雌鱼交配，规模化生产性状改良的XY全雄黄颡鱼，大大提高产量，增加经济效益。
【专利附图】
【附图说明】[0015]图1为Y Y超雄黄颡鱼繁育系改良方法技术原理图。
[0016]图2为Y Y超雄黄颡鱼繁育系改良工序流程方框图。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0018]请参照图1和图2，实施例中所述的“现有YY早”和“现有YY 可以选用专利号ZL 200810197519.8公开的方法建立的超雄鱼繁育系中的生理雌鱼YY早和超雄鱼YY古。
[0019]1.筛选黄颡鱼野生亲本:从长江上游、长湖、洞庭湖、珠江水系、淮河、黑龙江、黄河等不同水域收集野生黄颡鱼作为不同的地理群体，每个地理群体捕捞约1000尾野生黄颡鱼，进行首次筛选，挑选个体较大、体色纯正和二龄以上的雄亲本XY ^个体，数量200尾以上(由于捕捞的是成鱼，可以直接从外形上进行雌雄区分)，筛选方法也可以采用其他不伤害鱼体的现有技术。
[0020]2.黄颡鱼种质资源调查和种质遗传评价:运用微卫星标记技术，研究不同地理群体黄颡鱼种质资源的遗传多样性和不同地理群体之间的亲缘关系，进行不同地理群体黄颡鱼种质遗传评价，筛选不同地理群体相应的遗传标记，并选择遗传多样性最丰富的群体I个，为YY超雄黄颡鱼繁育品系改良育种奠定基础。
[0021]具体分析方法:
按常规方法从不同地理群体黄颡鱼尾鳍样品中提取基因组DNA，样品数量为40尾以上。根据目前所报道的文献设计10对微卫星多态性引物(见表1)，进行PCR扩增反应，反应体系为 25μ L:2.5μ L 10XPCR buffer,2.0μ L 25mM MgCl2, IU Taq DNA聚合酶，0.5yL10 mM dNTPs，0.5“]?上下游引物，20叩DNA，加双蒸水至25 μ L。扩增条件为:94°C 30s，退火30s，72°C 30s，循环数为40。PCR产物用2%的琼脂糖凝胶检测，鉴定有扩增产物后再用12%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE电泳)检测，银染，并用凝胶成像系统对凝胶进行拍摄并保存图片。通过与DN A分子量标准(pBR322DNA/MspI)比较来判读等位基因大小。
【权利要求】
1.一种快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法，其特征在于，步骤如下: (1)筛选黄颡鱼野生雄性亲本:从不同水域收集野生黄颡鱼作为不同的地理群体，筛选出个体大、体色纯正和二龄以上的雄性亲本XY ?个体； (2)黄颡鱼野生亲本种质资源评估:分析步骤(1)筛选出的不同地理群体雄性亲本的遗传多样性和地理群体间亲缘关系，进行遗传评价，筛选出遗传多样性最丰富的地理群体； (3)构建YY?和YY早基础育种群体:步骤(2)筛选出的地理群体雄性亲本XY ?，与现有YY早卵子交配，子代形成YY ?雄性基础育种群体；部分子代用雌激素进行人工性逆转，形成YY早雌性基础育种群体； (4)ΥΥ?和YY早基础育种群体的选育:步骤(3)获得的两个基础育种群体均培育至冬片阶段，分别淘汰小个体50%，留下的培育至春片再淘汰小个体50% ;留下来的个体用X染色体特异标记引物进行基因型PCR鉴定，剔除含有X染色体的黄颡鱼，留YY ?和YY早备用，强化培育作为候选亲鱼； (5)YY ?和YY早的测交验证:候选亲鱼YY ?与XX早交配，候选亲鱼YY早与XY ?交配，筛选测交后代中均为100%雄鱼的家系，获取改良YY ^和改良YY早品系； (6)YY ?超雄黄颡鱼改良繁育系的快速扩群:取步骤(5)的改良YY ?和改良YY早进行交配、改良YY ?和现有YY早进行交配、或改良YY早和现有YY ^进行交配，获得100%的YY ^超雄黄颡鱼； (J)Ti ?超雄黄颡鱼改良繁育系的建立:取步骤(6)的100% YY ?超雄黄颡鱼，在鱼苗开口时，取一部分YY ?超雄鱼按步骤(3)，用雌激素诱导性逆转成为YY早生理雄鱼；将YY ^超雄鱼和YY早生理雌鱼养至性成熟后，再进行交配，持续生产YY ^超雄鱼； 重复步骤(7)，建立成YY超雄鱼改良繁育系。
2.根据权利要求1所述的快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法，其特征在于，步骤(I)中每个水域收集的野生黄颡鱼不低于1000尾，筛选出的雄性亲本XY ?不低于200尾。
3.根据权利要求1所述的快速建立YY超雄黄颡鱼改良繁育系的方法，其特征在于，步骤(2)采用微卫星标记技术进行遗传多样性和地理群体间亲缘关系分析。
【文档编号】A01K61/00GK103798169SQ201410057631
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年2月20日 优先权日:2014年2月20日
【发明者】刘汉勤, 陈宏溪, 徐江, 侯昌春, 陈丽慧 申请人:武汉百瑞生物技术有限公司