一种桤木的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及一种桤木的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、无菌苗的获得、丛生芽增殖、生根培养和炼苗移栽。本发明的桤木组培方法操作简便，增殖系数好，成活率高，遗传性状稳定，可以短期内获得大量的桤木幼苗。
【专利说明】一种桤木的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及桤木组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 棺木，又名别名水冬瓜树、水青风、棺蒿，为桦木科，棺 木属植物。落叶乔木，是中国特有种和福建重要的乡土树种之一。属濒危等级国家II级重点 保护野生植物（国务院1999年8月4日批准)。喜光，喜温暖气候，适生于年平均气温15? 18°C,降水量900?1400mm的丘陵及平原、山区。对土壤适应性强，喜水湿，多生于河滩低 湿地。以树皮、嫩枝叶入药。春季采集嫩枝叶，四季采树皮，鲜用或晒干。目前桤木的繁殖 方法基本采用播种育苗，在贵州北部、甘肃南部、陕西西南部，安徽、湖南、湖北、江西、广东、 江苏等地有栽培。组培技术应用于桤木尚未研究，利用组培技术可以缩短培养周期，提高繁 殖率，保持性状的稳定性。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种桤木的快速繁殖方法，由该方法所制备的 桤木组培方法简便，增殖系数好，成活率高，遗传性状稳定，可以短期内获得大量的桤木幼 苗。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的： 取桤木种子，在漂白粉中浸泡3min，清洗表面，水中浸泡24h，8h换一次水，超净工作台 上75%酒精处理30s，氯化汞处理20min，无菌水冲洗5-7遍，接入MS+GA3lmg/L培养基中 培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6g/L，PH5. 8,光照30001x，温度26°C，生长出来的无菌芽苗，放 入增殖培养基 WPM+IAAO. lmg/L+TDZO. 2mg/L+0. 35mmol/L 腐胺，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6g/ L，PH5. 8,光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAAO. 2mg/L+半胱氨酸 100mg/L+5mg/LAgN03，将生根后的试管苗在培养室中打开瓶口练苗6d，在0. 1%的多菌灵药 液中浸泡4d，取出幼苗，清洗干净，栽植于珍珠岩：腐殖土 =1 :1的基质中培养，20d后，移栽 入大田培养。
[0005] 采用本发明制备的桤木成活率为94%，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。
[0006] 下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。
[0007] 实施例1 取桤木种子，在漂白粉中浸泡3min，清洗表面，水中浸泡24h，8h换一次水，超净工作台 上75%酒精处理30s，氯化汞处理20min，无菌水冲洗5-7遍，接入MS+GA3lmg/L培养基中 培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6g/L，PH5. 8,光照30001x，温度26°C，生长出来的无菌芽苗，放 入增殖培养基 WPM+IAAO. 05mg/L+TDZ0. lmg/L+0. 35mmol/L 腐胺，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6g/ L，PH5. 8,光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAAO. lmg/L+半胱氨酸 100mg/L+5mg/LAgN03，将生根后的桤木试管苗进行室外炼苗移栽，桤木成活率为90%。
[0008] 实施例2 取桤木种子，在漂白粉中浸泡3min，清洗表面，水中浸泡24h，8h换一次水，超净工作台 上75%酒精处理30s，氯化汞处理20min，无菌水冲洗5-7遍，接入MS+GA3lmg/L培养基中 培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6g/L，PH5. 8,光照30001x，温度26°C，生长出来的无菌芽苗，放 入增殖培养基 WPM+IAAO. 15mg/L+TDZ0. 3mg/L+0. 35mmol/L 腐胺，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6g/ L，PH5. 8,光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAAO. 2mg/L+半胱氨酸 50-100mg/L+5mg/LAgN03，将生根后的桤木试管苗进行室外炼苗移栽，桤木成活率为91%。 [0009] 实施例3 取桤木种子，在漂白粉中浸泡3min，清洗表面，水中浸泡24h，8h换一次水，超净工作台 上75%酒精处理30s，氯化汞处理20min，无菌水冲洗5-7遍，接入MS+GA3lmg/L培养基中 培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6g/L，PH5. 8,光照30001x，温度26°C，生长出来的无菌芽苗，放 入增殖培养基 WPM+IAAO. lmg/L+TDZO. lmg/L+0. 35mmol/L 腐胺，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6g/ L，PH5. 8,光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAAO. lmg/L+半胱氨酸 50-100mg/L+5mg/LAgN03，将生根后的桤木试管苗进行室外炼苗移栽，桤木成活率为93%。 [0010] 实施例4 取桤木种子，在漂白粉中浸泡3min，清洗表面，水中浸泡24h，8h换一次水，超净工作台 上75%酒精处理30s，氯化汞处理20min，无菌水冲洗5-7遍，接入MS+GA3lmg/L培养基中培 养，附加蔗糖30g/L，琼脂6g/L，PH5. 8,光照30001x，温度26°C，生长出来的无菌芽苗，放入 增殖培养基 WPM+IAAO. lmg/L+TDZO. 3mg/L+0. 35mmol/L 腐胺，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6g/L， PH5. 8,光照40001x ;增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAAO. 2mg/L+半胱氨酸 50-100mg/L+5mg/LAgN03，将生根后的桤木试管苗进行室外炼苗移栽，桤木成活率为92%。
【权利要求】
1. 一种桤木的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、无菌苗的获得、丛生芽增殖、生根培 养和炼苗移栽，其主要步骤如下： (1) 取桤木种子，对其进行灭菌处理； (2) 将步骤（1)灭菌处理过的桤木种子接入MS+GA3lmg/L培养基中培养，附加蔗糖30g/ L，琼脂 6g/L，PH5. 8,光照 30001x，温度 26°C ; (3) 取步骤（2)生长出来的无菌芽苗，放入增殖培养基WPM+IAAO. 05-0. 15mg/ L+TDZ0. 1-0. 3mg/L+0. 35mmol/L 腐胺，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6g/L，PH5. 8,光照 40001x ; (4) 取步骤（3)增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAA0. 1-0. 2mg/L+半胱氨 酸 100mg/L+5mg/LAgN03; (5) 取步骤（4)生根后的桤木进行炼苗移栽。
2. 按照权利要求1所述的一种桤木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1)中所述桤 木种子的灭菌处理为，取桤木种子，在漂白粉中浸泡3min，清洗表面，水中浸泡24h，8h换一 次水，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理20min，无菌水冲洗5-7遍。
3. 按照权利要求1所述的一种桤木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（2)无菌苗生 长培养中中附加了 GA3，能促进无菌苗的伸长生长。
4. 按照权利要求1所述的一种桤木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（3)中的增殖 培养基 WPM+IAA0. 05-0. 15mg/L+TDZ0. 1-0. 3mg/L+0. 35mmol/L腐胺中附加了 0· 35mmol/L腐 胺可以促进不定芽的发生。
5. 按照权利要求1所述的一种桤木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4)中加入了 半胱氨酸l〇〇mg/L和5mg/LAgN03，半胱氨酸可以抗氧化，阻止在增殖过程中，出现褐化现 象，AgN0 3可以克服试管苗的玻璃化现象，且此两种物质的加入均待灭菌后的培养基冷却到 60°C以下进行过滤灭菌。
6. 按照权利要求1所述的一种桤木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4)中的生根 培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6g/L，PH5. 8,光照80001x，湿度60-70%。
7. 按照权利要求1所述的一种桤木的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（5)中桤木的 炼苗培养方法为将生根后的试管苗在培养室中打开瓶口练苗6d，在0. 1%的多菌灵药液中 浸泡4d，取出幼苗，清洗干净，栽植于珍珠岩：腐殖土 =1 :1的基质中培养，20d后，移栽入大 田培养。
【文档编号】A01H4/00GK104206071SQ201410445594
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司