人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法
【专利摘要】本发明涉及一种人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法，是在温度28℃，相对湿度65％-80％的环境下，利用水稻及其害虫1-3龄褐飞虱若虫或不限龄期的褐飞虱、混合蜂蜜的动物肝粉饲料配制的人工饲料饲养青翅蚁形隐翅甲，青翅蚁形隐翅甲成虫饲养5d后已经大量产卵，每天将孵化的青翅蚁形隐翅甲幼虫用毛笔挑出，按照青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养方法饲养。青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养30d，待羽化为成虫后转入玻璃容器中饲养，按青翅蚁形隐翅甲成虫饲养方法饲养。天敌青翅蚁形隐翅甲成虫虫口密度≧100头、幼虫虫口密度≧40头时分容器饲养。本发明操作简单，饲养存活率高，成本低，能够为生物安全评价工作中青翅蚁形隐翅甲作为指示昆虫提供虫源。
【专利说明】人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法。
【背景技术】
[0002]转基因抗虫植物的利用是作物害虫防治技术的一次巨大绿色变革，目前，cry基因是使用最为广泛的抗虫基因，源于一种革兰氏阳性土壤芽孢杆菌——苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称 Bt),属于原核生物(Procaryotic organism)细菌纲(Bacteria)芽胞杆菌科(Bacillaceae)芽胞杆菌属(Bacillus)。芽孢形成过程中，Bt菌体的一端或两端会形成一个或多个具有生物活性的蛋白质晶体，这种蛋白质晶体由cry和cyt编码，能在一些昆虫体内活化成有毒性的蛋白，并与昆虫中肠上皮细胞的特异性受体结合，使其产生穿孔，从而杀灭昆虫。转基因抗虫植物就是通过研究Bt菌cry和cyt的特性，并将其修饰改造后转入植物中表达，使植物具有抵抗特异害虫的能力。Bt转基因植物的产生和发展为提高产量、降低生产成本以及减少环境污染做出了巨大贡献。
[0003]转基因抗虫植物为人类带来利益的同时，也可能会对环境造成潜在的生态风险，因此有必要选择合适的指示昆虫进行生态风险评估，近年来，转基因抗虫作物对非靶标生物安全性一直是相关研究者关注的焦点。
[0004]但是不可能对每一种昆虫进行安全评价，选择合适的指示性昆虫在安全评价工作中意义重大。目前，转基因作物环境安全评价中选择非靶标鞘翅目捕食性天敌作为指示性昆虫主要集中于瓢虫和步甲，而对于隐翅虫科中的青翅蚁形隐翅甲很少涉及。青翅蚁形隐翅甲对害虫捕食量大，可有效控制叶蝉、稻飞虱、蓟马、棉铃虫等多种害虫，且青翅蚁形隐翅甲在田间发生量大，在多地区为优势种群，植食性昆虫通过取食转基因作物有可能通过食物链将Bt传递给青翅蚁形隐翅甲，增加了该天敌暴露于Bt蛋白的途径。但是由于青翅蚁形隐翅甲饲养难度大，尤其是幼虫对环境要求苛刻，因此使得该虫在环境安全评价中作为指示昆虫有所局限。由此，需要研究出一种能人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种简单、高效、成本低、能为今后转基因作物青翅蚁形隐翅甲环境安全评价提供虫源的人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法。
[0006]本发明目的的实现方式为，人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法，具体步骤如下:
[0007]I)选择长至1cm以上水稻苗备用；
[0008]2)准备1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的猎物褐飞虱若虫，不限龄期供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的猎物褐飞虱；
[0009]3)将伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比为4-6:1的比例混合均匀作为青翅蚁形隐翅甲的人工饲料，放置在直径小于5cm的培养皿；
[0010]4)清洗干净饲养容器、饲养盒，准备按照饲养容器的规格进行剪裁的海绵或脱脂棉，铺在饲养容器底部，加清水使其充分吸水保湿；
[0011]5)将湿润富有营养的，适于育苗的土壤均匀覆盖在步骤7)的海棉或脱脂棉上，不要超过饲养容器的边缘；
[0012]6)天敌青翅蚁形隐翅甲成虫的饲养:将200±50根步骤I)的水稻苗用清水冲洗干净放入10ml的玻璃烧杯中，加入所需量的水稻培养液，将玻璃烧杯放入饲养容器中；步骤3)配好的人工饲料盛放于小培养皿，并将小培养皿放在饲养容器内；接入不限龄期，供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的褐飞虱，用尼龙纱网和橡皮筋封口 ；在温度28°C，相对湿度65 % -80 %的环境下，接入50± 10头天敌青翅蚁形隐翅甲成虫，饲料每周更换，补充水分；天敌青翅蚁形隐翅甲的每个饲养容器的起始接入量3 50头，随机补充褐飞虱的数量，当天敌青翅蚁形隐翅甲的成虫虫口密度3 100头时，分饲养容器饲养；
[0013]5d以后，饲养容器中的青翅蚁形隐翅甲已经大量产卵，将有卵粒的海绵和稻苗取出，放置在底部铺有湿润卫生纸的敞口饲养盒内，用扎有小孔的保鲜膜和橡皮筋封口，每天将孵化的青翅蚁形隐翅甲幼虫用毛笔挑出，按按步骤7)方法饲养；
[0014]7)天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲养:将步骤3)配好的人工饲料盛放于载玻片并放在敞口饲养容器内，饲养容器底部铺有吸水海绵或脱脂棉，覆盖有适于育苗的土壤，取几根水稻苗，用湿润棉花包住水稻根部，放置于饲养容器中，接入步骤2) 1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的褐飞虱若虫，放入敞口饲养盒内，在温度28°C，相对湿度65% -80%的环境下，接入孵化的天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫，起始接虫量少于40头，用尼龙纱网、扎孔的保鲜膜封口 ；饲料每天更换，随机补充低龄期的褐飞虱，当天敌青翅蚁形隐翅甲的幼虫虫口密度^ 40头时分容器饲养；
[0015]饲养15-30天将羽化的青翅蚁形隐翅甲成虫挑出，按步骤6)方法饲养；
[0016]所述敞口饲养盒长22cm,宽7cm,高7cm。
[0017]本发明利用水稻及其害虫褐飞虱、混合蜂蜜的动物肝粉饲料人工大量饲养天敌青翅蚁形隐翅甲，操作简单，饲养存活率高，成本低，能够适时为生物安全评价工作中青翅蚁形隐翅甲作为指示昆虫提供虫源。
【具体实施方式】
[0018]本发明利用水稻及其猎物褐飞虱、混合蜂蜜的动物肝粉饲料人工大量饲养天敌青翅蚁形隐翅甲。所述天敌青翅蚁形隐翅甲是指鞘翅目(Coleoptera)隐翅虫科(Staphylinidae)毒隐翅虫属(Paederus)中的青翅蚁形隐翅甲(Paederus fuscipesCurtis) ο所述猎物褐飞風是指半翅目(Hemiptera)飞風科(Delphacidae)中的褐飞風(Nilaparvata lugens (Stal))。具体步骤如下:
[0019]I)选择长至1cm以上水稻苗时备用。水稻苗为明恢63品系水稻苗，水稻种子由华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室提供。水稻于栽培盘(长X宽X高=25cmX20cmX3cm)中以Yoshida培养液培育至1cm以上。
[0020]2)准备1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的褐飞虱若虫，不限龄期供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的褐飞虱。
[0021]3)将市购的伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比为4-6:1的比例混合均匀作为青翅蚁形隐翅甲的人工饲料，放置在直径小于5cm的培养皿上；伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比为5:1的比例混合最佳。
[0022]4)清洗干净饲养容器，按照饲养容器的规格进行剪裁的海绵或脱脂棉铺在饲养容器底部，加清水使其充分吸水保湿，作为天敌青翅蚁形隐翅甲提供水源。
[0023]5)将湿润富有营养的，适于育苗的土壤倒入透光的步骤7)的敞口饲养容器内，不要超过饲养容器的边缘。土壤以园艺作物播种育苗土壤为优。
[0024]6)天敌青翅蚁形隐翅甲成虫的饲养:将200±50根步骤I)的水稻苗用清水冲洗干净放入10ml的玻璃烧杯中，加入所需量的水稻培养液，将玻璃烧杯放入饲养容器中；步骤3)配好的人工饲料盛放于小培养皿，并将小培养皿放在饲养容器内；接入不限龄期，供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的褐飞虱，在温度28°C，相对湿度65% -80%的环境下，接入50±10头天敌青翅蚁形隐翅甲成虫，用200目尼龙纱网、扎孔的保鲜膜、橡皮筋封口，防止褐飞虱、青翅蚁形隐翅甲逃跑。饲料每周更换，并根据实际情况给海绵和放置水稻的玻璃烧杯补充水分；天敌青翅蚁形隐翅甲的每个饲养容器的起始接入量3 50头，随机补充褐飞虱的数量，当天敌青翅蚁形隐翅甲的成虫虫口密度3 100头时，分饲养容器饲养；
[0025]5d以后，考虑到青翅蚁形隐翅甲已经大量产卵，将饲养容器内的海绵与水稻苗取出放置在底部，铺满湿润卫生纸的敞口塑料盒内，也可用脱脂棉代替卫生纸。用扎孔的保鲜膜和橡皮筋封口，海绵和稻苗上的青翅蚁形隐翅甲卵粒孵化，每天将孵化的青翅蚁形隐翅甲幼虫用毛笔挑出，按按步骤7)方法饲养。
[0026]所述饲养容器是2000ml的玻璃烧杯。
[0027]7)天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲养:将步骤3)配好的人工饲料盛放于载玻片并放在饲养容器内，饲养容器底部铺有吸水海绵或脱脂棉，覆盖有适于育苗的土壤，取几根水稻苗，用湿润棉花包住水稻根部，放置于饲养容器中，接入步骤2) 1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的褐飞虱若虫，放入敞口饲养盒内，在温度28 V，相对湿度65 % -80%的环境下，接入孵化的天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫，起始接虫量不超过40头，用200目尼龙纱网、扎孔的保鲜膜、橡皮筋封口，防止褐飞虱、青翅蚁形隐翅甲逃跑；饲料每天更换，随机补充低龄期的褐飞虱，当天敌青翅蚁形隐翅甲的幼虫虫口密度3 40头时分容器饲养；
[0028]饲养15-30天将羽化的青翅蚁形隐翅甲成虫挑出，按步骤6)方法饲养；
[0029]所述敞口饲养盒长22cm，宽7cm，高7cm的塑料盒。
[0030]下面用具体实施例详述本发明。
[0031]例1、
[0032]I)选择由华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室提供的，水稻于栽培盘(长X宽X高=25cmX20cmX3cm)中以Yoshida培养液培育至1cm以上的水稻苗备用；
[0033]2)准备1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的猎物褐飞虱若虫，不限龄期供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的猎物褐飞虱；
[0034]3)将伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比为5:1的比例混合均匀作为青翅蚁形隐翅甲的人工饲料，放置在直径小于5cm的培养皿；
[0035]4)清洗干净2000ml的玻璃烧杯准备按照饲养容器的规格进行剪裁的海绵或脱脂棉，铺在饲养容器底部，加清水使其充分吸水保湿；充分吸水保湿为天敌青翅蚁形隐翅甲提供水源。
[0036]5)将园艺作物播种育苗土壤均匀覆盖在步骤7)的海棉上，不要超过饲养容器的边缘；
[0037]6)天敌青翅蚁形隐翅甲成虫的饲养:将150-190根步骤I)的水稻苗用清水冲洗干净放入10ml的玻璃烧杯中，加入所需量的水稻培养液，将玻璃烧杯放入2000ml的玻璃烧杯中；步骤3)配好的人工饲料盛放于小培养皿，并将小培养皿放在饲养容器内；接入大量不限龄期，供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的褐飞虱，用尼龙纱网、扎孔的保鲜膜和橡皮筋封口防治逃跑；在温度28°C，相对湿度65% -70%的环境下，接入40-45头天敌青翅蚁形隐翅甲成虫，饲料每周更换，并根据实际情况给海绵和放置水稻的玻璃烧杯补充水分；天敌青翅蚁形隐翅甲的每个饲养容器的起始接入量3 50头，随机补充褐飞虱的数量，当天敌青翅蚁形隐翅甲的成虫虫口密度3 100头时，分饲养容器饲养；
[0038]5d以后，考虑到青翅蚁形隐翅甲已经大量产卵，将饲养容器中的海绵与水稻苗取出放入底部铺满湿润卫生纸的饲养盒，每天将孵化的青翅蚁形隐翅甲幼虫用毛笔挑出，按天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲养方式进行饲养。
[0039]7)天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲养:将步骤3)配好的人工饲料盛放于载玻片并放在底部铺面湿润海绵和覆盖基质土的长22cm，宽7cm，高7cm的敞口饲养盒内，取几根步骤I)的水稻苗，用湿润棉花包住水稻根部，放置于饲养容器中，接入步骤2) 1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的褐飞虱若虫，依次用200目尼龙纱网、扎孔的保鲜膜和橡皮筋封口，尼龙网防止逃跑。在温度28°C，相对湿度65% -70%的环境下，接入孵化的天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫，起始接虫量少于40头；饲料每天更换，随机补充低龄期的褐飞虱，当天敌青翅蚁形隐翅甲的幼虫虫口密度3 40头时分容器饲养；
[0040]饲养15-30天将羽化的青翅蚁形隐翅甲成虫挑出，按照天敌青翅蚁形隐翅甲成虫的饲养方式进行饲养。
[0041]例2、同例1，不同的是，
[0042]3)将伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比为4:1的比例混合均匀作为青翅蚁形隐翅甲的人工饲料.
[0043]6)将190-210根步骤I)的水稻苗用清水冲洗干净放入10ml的玻璃烧杯中。在温度28°C，相对湿度70-77%的环境下，接入大约48-54头天敌青翅蚁形隐翅甲成虫。
[0044]7)供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的褐飞虱若虫放入敞口饲养盒内，在温度28°C，相对湿度70-77%的环境下，接入孵化的天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫。
[0045]例3、
[0046]3)将伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比为6:1的比例混合均匀作为青翅蚁形隐翅甲的人工饲料
[0047]6)将210-250根步骤I)的水稻苗用清水冲洗干净放入10ml的玻璃烧杯中。在温度78-80%，相对湿度70%的环境下，接入大约52-60头天敌青翅蚁形隐翅甲成虫。
[0048]7)供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的褐飞虱若虫放入敞口饲养盒内，在温度28°C，相对湿度78-80%的环境下，接入孵化的天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫。
【权利要求】
1.人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法，其特征在于具体步骤如下: 1)选择长至1cm以上水稻苗备用； 2)准备1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的猎物褐飞虱若虫，不限龄期供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的猎物褐飞虱； 3)将伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比为4-6:1的比例混合均匀作为青翅蚁形隐翅甲的人工饲料，放置在直径小于5cm的培养皿； 4)清洗干净饲养容器、饲养盒，准备按照饲养容器的规格进行剪裁的海绵或脱脂棉，铺在饲养容器底部，加清水使其充分吸水保湿； 5)将湿润富有营养的，适于育苗的土壤均匀覆盖在步骤7)的海棉或脱脂棉上，不要超过饲养容器的边缘； 6)天敌青翅蚁形隐翅甲成虫的饲养:将200±50根步骤I)的水稻苗用清水冲洗干净放入10ml的玻璃烧杯中，加入所需量的水稻培养液，将玻璃烧杯放入饲养容器中；步骤3)配好的人工饲料盛放于小培养皿，并将小培养皿放在饲养容器内；接入不限龄期，供青翅蚁形隐翅甲成虫饲养的褐飞虱，用尼龙纱网、扎孔的保鲜膜封口 ；在温度28°C，相对湿度65% -80%的环境下，接入50±10头天敌青翅蚁形隐翅甲成虫，饲料每周更换，补充水分；天敌青翅蚁形隐翅甲的每个饲养容器的起始接入量3 50头，随机补充褐飞虱的数量，当天敌青翅蚁形隐翅甲的成虫虫口密度3 100头时，分饲养容器饲养； 5d以后，饲养容器中的青翅蚁形隐翅甲已经大量产卵，将有卵粒的海绵和稻苗取出，放置在铺有湿润卫生纸的敞口饲养盒内，用扎有小孔的保鲜膜和橡皮筋封口，每天将孵化的青翅蚁形隐翅甲幼虫用毛笔挑出，按按步骤7)方法饲养； 7)天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲养:将步骤3)配好的人工饲料盛放于载玻片并放在敞口饲养容器内，饲养容器底部铺有吸水海绵或脱脂棉，覆盖有适于育苗的土壤，取几根水稻苗，用湿润棉花包住水稻根部，放置于饲养容器中，接入步骤2) 1-3龄供青翅蚁形隐翅甲幼虫饲养的褐飞虱若虫，在温度28°C，相对湿度65% -80%的环境下，接入孵化的天敌青翅蚁形隐翅甲幼虫，起始接虫量少于40头，用尼龙纱网、扎孔的保鲜膜封口 ；饲料每天更换，随机补充低龄期的褐飞虱，当天敌青翅蚁形隐翅甲的幼虫虫口密度3 40头时分容器饲养； 饲养15-30天将羽化的青翅蚁形隐翅甲成虫挑出，按步骤6)方法饲养； 所述敞口饲养盒长22cm，宽7cm，高7cm。
2.根据权利要求1所述的人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法，其特征在于水稻苗为明恢63品系水稻苗，水稻于长X宽X高=25cmX20cmX 3cm栽培盘中以Yoshida培养液培育至1cm以上。
3.根据权利要求1所述的人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法，其特征在于伊威全机能肝粉与蜂蜜以质量比5:1的比例混匀。
4.根据权利要求1所述的人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法，其特征在于步骤5)的土壤为以园艺作物播种育苗的土壤。
5.根据权利要求1所述的人工大量饲养青翅蚁形隐翅甲的方法，其特征在于5d以后，将饲养容器内的海绵与水稻苗取出放置在底部铺满湿润卫生纸的敞口塑料盒内，用200目尼龙纱网、扎孔的保鲜膜和橡皮筋封口。
【文档编号】A01K67/033GK104222024SQ201410446377
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月3日 优先权日:2014年9月3日
【发明者】华红霞, 孟嘉蓉, 韩宇, 吴刚 申请人:华中农业大学