一种庐山石韦植株再生的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及一种庐山石韦植株再生的快速繁殖方法，包括叶片的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的诱变、愈伤组织的分化、生根培养。采用本发明方法再生率高，遗传稳定性好，有助于获得庐山石韦新品系，选育出新的突变体种质资源或品种。
【专利说明】 一种庐山石韦植株再生的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及庐山石韦组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]庐山石韦sheareri?，水龙骨科，另Il名:大石韦、光板石韦。多年生草本，高30 — 60cm。根茎粗壮，横走，密生披针形鳞片，鳞片边缘有睫毛。叶同型，簇生，坚革质，上面仅沿叶脉有毛或无毛，有细密而不整齐的凹点，下面有分叉、短阔的黄色星状毛；叶柄粗壮，以关节着生于根茎上；叶片宽披针形，长20-40cm，宽3-5cm，向顶端渐尖，向基部稍变宽，为不等的圆耳形；侧脉在两面略下凹。孢子囊群小，在侧脉间排列成多行，无盖。分布于长江以南各省区。生石上或树干上，海拔500-2290米。全草含异芒果素、延胡索酸、咖啡酸、皂甙、蒽甙、黄酮甙、鞣质等化学成分，可供药用，功能与主治:利水通淋，凉血止血。用于小便短赤，淋浙涩痛，血淋，咳嗽。目前主要采用野外采收，组织培养的研究尚未开始。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种庐山石韦植株再生的快速繁殖方法，采用本发明方法再生率高，遗传稳定性好，有助于获得庐山石韦新品系，选育出新的突变体种质资源或品种。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取庐山石韦幼嫩叶片，在漂白粉中浸泡5min，流水冲洗20min，超净工作台上1%溴水处理9min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的庐山石韦叶片接入培养基为KC+6-BA2.0mg/L+2, 4-D2.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0,光照6001x，光期12h/d，温度24± I °C，诱导一周后的愈伤组织紫外线照射30s，氯化锂处理lOmin，诱变处理过的愈伤组织接入KC+6-BA2.5-3.0mg/L+IBA0.3-0.5mg/L培养基中进行分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH6.0，光照60001x，光期12h/d，温度25°C，分化后的芽苗接入KC+IBA0.02培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照160001x，光期 18h/d，温度 25。。。
[0005]采用本发明制备的庐山石韦再生成活率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取庐山石韦幼嫩叶片，在漂白粉中浸泡5min，流水冲洗20min，超净工作台上1%溴水处理9min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的庐山石韦叶片接入培养基为KC+6-BA2.0mg/L+2, 4-D2.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照6001x，光期12h/d，温度24± I °C，诱导一周后的愈伤组织紫外线照射30s，氯化锂处理lOmin，诱变处理过的愈伤组织接入KC+6-BA2.5mg/L+IBA0.3mg/L培养基中进行分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH6.0，光照60001x，光期12h/d，温度25°C，分化后的芽苗接入KC+IBA0.02培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照160001x，光期18h/d，温度25°C，再生成活率91%。
[0008]实施例2
取庐山石韦幼嫩叶片，在漂白粉中浸泡5min，流水冲洗20min，超净工作台上1%溴水处理9min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的庐山石韦叶片接入培养基为KC+6-BA2.0mg/L+2, 4-D2.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照6001x，光期12h/d，温度24± I °C，诱导一周后的愈伤组织紫外线照射30s，氯化锂处理lOmin，诱变处理过的愈伤组织接入KC+6-BA3.0mg/L+IBA0.5mg/L培养基中进行分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH6.0，光照60001x，光期12h/d，温度25°C，分化后的芽苗接入KC+IBA0.02培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照160001x，光期18h/d，温度25°C，再生成活率93%。
[0009]实施例3
取庐山石韦幼嫩叶片，在漂白粉中浸泡5min，流水冲洗20min，超净工作台上1%溴水处理9min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的庐山石韦叶片接入培养基为KC+6-BA2.0mg/L+2, 4-D2.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照6001x，光期12h/d，温度24± I °C，诱导一周后的愈伤组织紫外线照射30s，氯化锂处理lOmin，诱变处理过的愈伤组织接入KC+6-BA3.0mg/L+IBA0.4mg/L培养基中进行分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH6.0，光照60001x，光期12h/d，温度25°C，分化后的芽苗接入KC+IBA0.02培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照160001x，光期18h/d，温度25°C，再生成活率94%。
【权利要求】
1.一种庐山石韦植株再生的快速繁殖方法，包括叶片的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的诱变、愈伤组织的分化、生根培养，其主要步骤如下: (1)取庐山石韦幼嫩叶片，对其进行消毒处理； (2)将步骤(I)消毒处理过的庐山石韦叶片接入培养基为KC+6-BA2.0mg/L+2, 4-D2.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH6.0，光照6001x，光期 12h/d，温度 24±1°C ; (3)取步骤(2)诱导一周后的愈伤组织紫外线照射30s，氯化锂处理1min； (4)取步骤(3)诱变处理过的愈伤组织接入KC+6-BA2.5-3.0mg/L+IBA0.3-0.5mg/L培养基中进行分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH6.0，光照60001x，光期12h/d，温度25 0C ； (5)取步骤(4)分化后的芽苗接入KC+IBA0.02培养基中进行生根诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ6.0，光照 160001χ，光期 18h/d，温度 25。。。
2.按照权利要求1所述的一种庐山石韦植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(O中所述庐山石韦无菌叶片的获得为，取庐山石韦幼嫩叶片，在漂白粉中浸泡5min，流水冲洗20min,超净工作台上1%溴水处理9min,无菌水冲洗5遍。
【文档编号】A01H4/00GK104255522SQ201410540654
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司