本发明涉及植物组织培养技术领域，具体为一种杂交狼尾草高效扩繁方法。
背景技术：
狼尾草，多年生，须根较粗壮，秆直立，丛生，在花序下密生柔毛，叶鞘光滑，两侧压扁，秆上部者长于节间。夏季开花，秋季结子。其具有产草量高、抗逆性强、品质好、病虫害少的特点，是草食畜禽的优质青饲料和理想的水土保持作物。
近年来，随着杂交狼尾草优质纸浆、中密度纤维板生产技术和作为生物质能源转化技术的不断完善，对杂交狼尾草的需求量正在迅速增加。目前，杂交狼尾草由于品种不纯，有一定比例的杂株现象，影响了种植狼尾草的品质和产量。
技术实现要素：
本发明的目的在于通过组织培养技术，提供一种杂交狼尾草高效扩繁方法。
为达到上述目的，采用的技术方案为：一种杂交狼尾草高效扩繁方法，其步骤包含：
1）、外植体选择与灭菌
取杂交狼尾草幼嫩心叶，用75%乙醇擦洗表面, 75% 乙醇浸泡30s，灭菌去离子水涮洗3次，0.1% HgCl2 浸泡5~8 min，灭菌去离子水涮洗5次，无菌滤纸吸干材料表面水份；
2）、愈伤组织诱导
将灭菌后的心叶切成厚度0.2~0.5cm的圆片接于愈伤诱导培养基，26~28 ℃，暗培养20~25 d；
3）、胚性愈伤组织的诱导与增殖
将2）诱导得到的淡黄色颗粒状愈伤组织转接于愈伤增殖培养基，26~28 ℃，暗培养20~25 d；
4）、丛生芽诱导
将3）得到的颗粒状胚性愈伤组织转接于丛生芽诱导培养基，26~28 ℃，光照1600 Lx，光照12 h/d，培养25-30d；
5）、移栽驯化
将4）得到的健壮丛生芽洗净残留琼脂后分成单株，将其基部在生根水中浸泡1-2h，再在多菌灵1000倍液中浸泡10~15min后移栽于漂盘，空气湿度保持在60~70%，温度26~28℃，驯化30~35天后即可移栽大田。
所述愈伤诱导培养基为：MS + 2,4-D 4.0 mg/L+白糖3%+琼脂粉6 g /L ，pH 5.8~6.0。
所述愈伤增殖培养基为：MS + 2,4-D 1.0 mg/L + KT 0.1 mg/L + ABA 0.5 mg/L+水解蛋白胨500 mg/L+白糖3.5%+琼脂粉7.5%，pH5.8~6.0。
所述丛生芽诱导培养基为：MS + 6-BA 2.0mg/L + IBA 0.1 mg/L+白糖3.0%+琼脂粉4%，pH5.8~6.0。
采用上述方案的有益效果为：这种杂交狼尾草高效扩繁方法建立了稳定的高效扩繁体系，其愈伤组织诱导率达90%，胚性愈伤组织增殖系数高达20倍，丛生芽诱导率达95%，驯化成活率达97%。采用瓶外生根方式，大大降低了生产成本，适合工厂化育苗，为商品化种植优质狼尾草提供了保障。
具体实施方式
下面结合实施例进一步介绍本发明，但本发明不仅限于下述实施例，可以预见本领域技术人员在结合现有技术的情况下，实施情况可能产生种种变化。
一种杂交狼尾草高效扩繁方法，其步骤包含：
1）、外植体选择与灭菌
取杂交狼尾草幼嫩心叶，用75%乙醇擦洗表面, 75% 乙醇浸泡30s，灭菌去离子水涮洗3次，0.1% HgCl2 浸泡5~8 min，灭菌去离子水涮洗5次，无菌滤纸吸干材料表面水份。
2）、愈伤组织诱导
将灭菌后的心叶切成厚度0.2~0.5cm的圆片接于愈伤诱导培养基，26~28 ℃，暗培养20~25 d。培养基成分与愈伤组织诱导率实验如下表：
其中，A为本发明的愈伤组织诱导培养基MS + 2,4-D 4.0 mg/L+白糖3%+琼脂粉6 g /L，B为1/2MS + KT 0.3 mg/L + IAA 0.03 mg/L+白糖3%+琼脂粉6 g /L，C为MS + KT 0.3 mg/L +2,4-D 4.0 mg/L +白糖3%+琼脂粉6 g /L，D为MS + IAA 0.03 mg/L +2,4-D 4.0 mg/L +白糖3%+琼脂粉6 g /L。pH均为5.8~6.0，其余参数一致。进行3次对比试验，统计后本发明优选的愈伤诱导培养基愈伤组织诱导率达90%以上，效果最好。
3）、胚性愈伤组织的诱导与增殖
将2）诱导得到的淡黄色颗粒状愈伤组织转接于愈伤增殖培养基，26~28 ℃，暗培养20~25 d。胚性愈伤组织诱导的增殖系数和胚性愈伤组织占比实验如下表：
其中，E为本发明实施例配方MS + 2,4-D 1.0 mg/L + KT 0.1 mg/L + ABA 0.5 mg/L+水解蛋白胨500 mg/L+白糖3.5%+琼脂粉7.5%，F为1/2MS + 2,4-D 4.0 mg/L+水解蛋白胨500 mg/L+白糖3%+琼脂粉6 g /L，G为1/2MS + KT 0.1 mg/L + ABA 0.5 mg/L+水解蛋白胨500 mg/L+白糖3.5%+琼脂粉7.5%，H为MS + 6-BA 0.05 mg/L +NAA 0.01 mg/L+水解蛋白胨500 mg/L+白糖3.5%+琼脂粉7.5%。pH5.8~6.0，其余参数一致。进行3次对比试验，统计后本发明优选的胚性愈伤组织诱导培养基增殖系数高达20倍，胚性愈伤组织占比80%以上，效果最好。
4）、丛生芽诱导
将3）得到的干爽、疏松的颗粒状胚性愈伤组织转接于丛生芽诱导培养基，26~28 ℃，光照1600 Lx，光照12 h/d，培养25-30d；所述丛生芽诱导培养基为：MS + 6-BA 2.0mg/L + IBA 0.1 mg/L+白糖3.0%+琼脂粉4%，pH5.8~6.0，丛生芽诱导率可达95%。
5）、移栽驯化
将4）得到的健壮丛生芽洗净残留琼脂后分成单株，将其基部在生根水中浸泡1-2h，再在多菌灵1000倍液中浸泡10~15min后移栽于漂盘，空气湿度保持在60~70%，温度26~28℃，驯化30~35天后即可移栽大田。生根水为自制的生根水，其中包含NAA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L，移栽漂盘的苗床池水深为5cm。