本发明涉及植物组培技术领域，具体涉及一种朝鲜蓟品种LORCA（劳卡）二步生根方法。
背景技术：
LORCA是常德市2005年从法国引进的一个朝鲜蓟加工型品种，该品种花苞卵球形（介于圆球形和橄榄形之间），苞片青绿色，花苞紧实、鲜嫩，可食率高，结蕾性较强，品质较好，适于加工成罐头。全生育期240天左右，采收期60天。2014年在湖南省登记认定，现已成为当地的主栽品种。跟其他朝鲜蓟品种一样，LORCA在我国也只开花不结果，无法自留种，每年都需要从国外购买。朝鲜蓟种子昂贵，平均每颗0.4-0.5元，而且经常延误农时。因此，对朝鲜蓟进行组织培养是解决朝鲜蓟种苗繁育的一个非常重要方式。
2008年，国内开始研究朝鲜蓟组织培养，但未能获得成功。2011年，常德市农业科学研究所报道朝鲜蓟组培成功，采用的品种为洋蓟一号。但朝鲜蓟内源激素较多，各品种之间差别较大。我们也采用了该朝鲜蓟组培方法，但生根率不理想，仅为20%，而且玻璃化非常严重，无法实现朝鲜蓟组培工厂化育苗体系。
所有的资料都报道朝鲜蓟是一种莲座型植物，生根较难。而且，即使生根，根系质量不过关，大多都为单独一根，又容易碰断，影响移栽成活率，造成组培成本高。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种朝鲜蓟品种LORCA（劳卡）二步生根方法，其目的在于解决现有朝鲜蓟组培方法中玻璃化的问题，并且提高生根率，培育壮苗，以提高瓶苗成活率。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种朝鲜蓟品种LORCA（劳卡）二步生根方法，包括如下步骤：
（1） 生根培养基配制
（1.1）母液配制及保存
选用化学纯或分析纯的化学药品，根据MS培养基配方，大量元素配成20倍，其中CaCl2单独配成40
倍；微量元素配成100倍；铁盐配成100倍；有机物配成100倍，其中肌醇单独配成100倍；L-酪氨酸配成20倍，NAA配成0.1mg·mL-1，6-BA配成0.1mg·mL-1,将所有母液保存在4℃的冰箱里；
（1.2）培养基配制
第一步生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg·L-1+6-BA0.6mg·L-1+ L-酪氨酸50mg·L-1+活性炭2.0g·L-1+肌醇50mg·L-1，琼脂粉7 g·L-1，白糖20 g·L-1，pH 5.5；
第二步生根培养基：MS+肌醇50mg·L-1，琼脂7 g·L-1，白糖40 g·L-1，pH 5.5；
琼脂粉采用凝胶强度>1300g/cm2的琼脂粉，一般每升用量5克左右；
培养基采用240ml玻璃培养瓶分装，不使用普通的透气瓶盖，采用14×14cm的白色牛皮纸，再使用
白色棉绳扎紧瓶口；
（1.3）培养基灭菌
瓶装培养基在10h内完成灭菌，灭菌方式采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105MPa、温度121℃条件下灭
菌20min～30min；锅内的灭菌物以不超过锅的容量3/4，高压灭菌时锅内使用蒸馏水；
（1.4）培养基保存
灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7d内使用，2℃～4℃条件下14d内使用；培养基应保存于
洁净环境中，注意避光和防尘；
（2）组培苗培养条件
培养室的温度控制在25℃±3℃，相对空气湿度控制在70%～80%，光照强度为27μmol•m-2•s-1～
36μmol•m-2•s-1，光照时间为12h/d；
（3）生根培养
（3.1）第一步生根培养
将诱导出的朝鲜蓟丛生芽，高1.5厘米以上的芽切割下来，移入第一步生根培养基中；移栽完毕后，放入组培培养架上，关掉培养架上的灯，并用报纸将瓶苗盖上，遮光2天；
（3.2）第二生根培养
15-20天后，有一小部分瓶苗长出白色的根；如果根系不是很长的话，一律接种到第二步生根培养基中；若根系太长或者太多，就留下来直接驯化；
（4）炼苗
（4.1）炼苗标准
当幼苗发育到2～3 片叶、3～5 条根，叶片约1～2 cm 长、根长0.5～1cm时，即可进行炼苗处理；
（4.2）组培苗驯化
将装组培苗的培养瓶从培养架上取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20℃～25℃，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，以保湿降温，封口炼苗1d～2d；
（4.3）开瓶锻炼
封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注入超过培养基表面0.5cm高的自来水，温度控制在20℃～25℃，2d～3d后即可移栽；
（5）移栽
（5.1）基质准备
栽培基质采用草炭土和珍珠岩，按5:2比例配制；新基质不需要消毒，使用过的基质用使用2000倍高锰酸钾溶液浸泡12h，使用128孔穴盘种植幼苗；
（5.2）移栽种植
移栽前，用自来水把根系上的培养基冲洗干净，用1000倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部，放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软，再栽入已准备好的基质中；栽后将基质浇透水，随即拱膜保湿，7～l0天后揭膜通风炼苗；
（5.3） 病虫害管理
苗期病害主要为立枯病，主要防治方法：育苗前使用0.05%炭疽福美作药土防治，或50%多菌灵、70%甲基硫菌灵等作药土防治，每平方米用药8～9克；幼苗发病前期喷药防治，选用70%土菌消（恶霉灵）可湿性粉1000倍液，或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液，隔周喷施，共喷两次；
虫害主要是蚂蚁，防治方法：应在育苗床周边撒一圈百虫灵等驱蚁药；
（5.4） 大田移栽标准
当苗高8～10cm，叶片3～4时，带基质移栽到大田。
本发明的优点是：本发明采用二步生根法对朝鲜蓟组培苗生根，使根系的诱导和生长分开，而每一步使用的培养基配方，都是朝鲜蓟组培上的首创。通过采用白色牛皮纸，大大降低瓶内的湿度，玻璃化现象有效遏制。这种羊皮纸透气很好，大多用于水稻、油菜等作物的套袋育种中，而且该纸可有效阻止外界的霉菌等进入，不会对瓶苗造成污染。增加琼脂粉用量以及遮光处理，这对降低玻璃化和增加生根率都非常有效。生根率提高，从20%提高到86%。瓶苗驯化成活率提高，从65%提高到92%。
具体实施方式
下面的实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。
实施例1：
一种朝鲜蓟品种LORCA（劳卡）二步生根方法，包括如下步骤：
（1） 生根培养基配制
（1.1）母液配制及保存
选用化学纯或分析纯的化学药品，根据MS培养基配方，大量元素配成20倍，其中CaCl2单独配成40
倍；微量元素配成100倍；铁盐配成100倍；有机物配成100倍，其中肌醇单独配成100倍；L-酪氨酸配成20倍，NAA配成0.1mg·mL-1，6-BA配成0.1mg·mL-1,将所有母液保存在4℃的冰箱里；
（1.2）培养基配制
第一步生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg·L-1+6-BA0.6mg·L-1+ L-酪氨酸50mg·L-1+活性炭2.0g·L-1+肌醇50mg·L-1，琼脂粉7 g·L-1，白糖20 g·L-1，pH 5.5；
第二步生根培养基：MS+肌醇50mg·L-1，琼脂7 g·L-1，白糖40 g·L-1，pH 5.5；
琼脂粉采用凝胶强度>1300g/cm2的琼脂粉，一般每升用量5克左右；
培养基采用240ml玻璃培养瓶分装，不使用普通的透气瓶盖，采用14×14cm的白色牛皮纸，再使用
白色棉绳扎紧瓶口；
（1.3）培养基灭菌
瓶装培养基在10h内完成灭菌，灭菌方式采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105MPa、温度121℃条件下灭
菌20min～30min；锅内的灭菌物以不超过锅的容量3/4，高压灭菌时锅内使用蒸馏水；
（1.4）培养基保存
灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7d内使用，2℃～4℃条件下14d内使用；培养基应保存于
洁净环境中，注意避光和防尘；
（2）组培苗培养条件
培养室的温度控制在25℃±3℃，相对空气湿度控制在70%～80%，光照强度为27μmol•m-2•s-1～
36μmol•m-2•s-1，光照时间为12h/d；
（3）生根培养
（3.1）第一步生根培养
将诱导出的朝鲜蓟丛生芽，高1.5厘米以上的芽切割下来，移入第一步生根培养基中；移栽完毕后，放入组培培养架上，关掉培养架上的灯，并用报纸将瓶苗盖上，遮光2天；
（3.2）第二生根培养
15-20天后，有一小部分瓶苗长出白色的根；如果根系不是很长的话，一律接种到第二步生根培养基中；若根系太长或者太多，就留下来直接驯化；
（4）炼苗
（4.1）炼苗标准
当幼苗发育到2～3 片叶、3～5 条根，叶片约1～2 cm 长、根长0.5～1cm时，即可进行炼苗处理；
（4.2）组培苗驯化
将装组培苗的培养瓶从培养架上取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20℃～25℃，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，以保湿降温，封口炼苗1d～2d；
（4.3）开瓶锻炼
封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注入超过培养基表面0.5cm高的自来水，温度控制在20℃～25℃，2d～3d后即可移栽；
（5）移栽
（5.1）基质准备
栽培基质采用草炭土和珍珠岩，按5:2比例配制；新基质不需要消毒，使用过的基质用使用2000倍高锰酸钾溶液浸泡12h，使用128孔穴盘种植幼苗；
（5.2） 移栽种植
移栽前，用自来水把根系上的培养基冲洗干净，用1000倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部，放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软，再栽入已准备好的基质中；栽后将基质浇透水，随即拱膜保湿，7～l0天后揭膜通风炼苗；
（5.3） 病虫害管理
苗期病害主要为立枯病，主要防治方法：育苗前使用0.05%炭疽福美作药土防治，或50%多菌灵、70%甲基硫菌灵等作药土防治，每平方米用药8～9克；幼苗发病前期喷药防治，选用70%土菌消（恶霉灵）可湿性粉1000倍液，或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液，隔周喷施，共喷两次；
虫害主要是蚂蚁，防治方法：应在育苗床周边撒一圈百虫灵等驱蚁药；
（5.4） 大田移栽标准
当苗高8～10cm，叶片3～4时，带基质移栽到大田。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。