本发明涉及植物种子处理领域，具体而言，涉及一种促进红花龙胆种子萌发的方法及其种苗。
背景技术：
红花龙胆gentianarhodantha，又名龙胆草、土白连、九月花、星秀花、冷风吹或雪里梅，为龙胆科龙胆属植物，生长于海拔570～1750米的高山灌丛、草地及林下，是《中华人民共和国药典》2015年版新收载品种。红花龙胆以根及全草入药，味苦，性寒，归肝、胆经，具有清热利湿、消炎止咳，解毒之功效。中医临床常用于急性黄疸型肝炎，痢疾，小儿肺炎，支气管炎，支气管哮喘，肺结核，淋巴结结核，小便不利，眼结膜炎以及外用治痈疖疮疡，烧烫伤等病症。
红花龙胆为典型的高山植物，喜冷凉气候，有较强的耐寒性；生长过程中对温度要求不严格，但种子萌发时，必须有适宜的温度和一定的光照条件，否则种子出芽率很低，已经严重限制了人们对这种优良资源的研究和利用。
目前对红花龙胆种子萌发方面的研究鲜有人涉及，更没有大面积人工种植红花龙胆的先例。因此，为促进红花龙胆资源的可持续利用、改善品质和红花龙胆优良品种的推广，进行红花龙胆萌发方面的研究显得十分的必要。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种促进红花龙胆种子萌发的方法，所述红花龙胆种子萌发方法通过用种子处理液在萌发前对种子进行浸种处理，可快速高效的破除红花龙胆种子休眠并使其在10～20天中的萌发率比蒸馏水浸种萌发处理高出10～30％，且种子发芽整齐，节省了红花龙胆种子育种的时间。
本发明的第二目的在于提供一种红花龙胆种苗，该红花龙胆种苗通过上述促进红花龙胆种子萌发的方法制得，其出苗率高，出苗整齐度均匀。
本发明提供的一种促进红花龙胆种子萌发的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)配制种子处理液：配制硝酸钾、氯化钙或赤霉素溶液作为种子处理液；
(2)种子萌发前浸种处理：将红花龙胆种子用纱布包裹，置于步骤(1)种子处理液中，在18～22℃的环境下浸种20～30小时，随后放入3～5℃的环境下浸种10～15小时，然后弃浸种液，将种子清洗干净，完成浸种处理；
(3)萌发出芽：将步骤(2)浸种处理后的种子放入铺有湿润滤纸的培养皿上，随后放入培养箱中培养10～20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子。
进一步地，任选地进行步骤(4)萌发出苗：将步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰拌匀，均匀播种于苗床上进行萌发出苗90～120天，得到红花龙胆种苗。
进一步地，上述步骤(1)中硝酸钾溶液质量百分浓度为1％～5％；上述步骤(1)中氯化钙溶液质量百分浓度为0.25％～2％；上述步骤(1)中赤霉素溶液质量体积浓度为50mg/l～800mg/l。
进一步地，上述步骤(2)种子清洗的方法为用蒸馏水冲洗4～5次，每次3～8分钟。
进一步地，上述步骤(3)中培养箱为光照培养箱，上述光照培养箱的培养温度为23～28℃，光照强度为2～4级，每12小时光照12小时黑暗交替。
进一步地，上述步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰的质量比为1:500～1000。
进一步地，上述步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子播种前2～4天，用0.05～0.1％的高锰酸钾溶液均匀泼洒于苗床，对土壤进行消毒，并在播种前2～3小时用清水浇透苗床。
进一步地，上述萌发出苗的环境要求为土壤含水量45～65％，地表空气湿度60～70％，温度20～25℃。
进一步地，上述促进红花龙胆种子萌发的方法，所述方法具体包括如下步骤：
(1)配制种子处理液：配制硝酸钾、氯化钙或赤霉素溶液作为种子处理液；
所述硝酸钾溶液质量百分浓度为1％、2％、3％、4％和5％；
所述氯化钙溶液质量百分浓度为0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％；
所述赤霉素溶液质量体积浓度为50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l；
(2)种子萌发前浸种处理：将红花龙胆种子用2～3层纱布包裹，置于步骤(1)种子处理液中，在18～22℃的环境下浸种20～30小时，随后放入3～5℃的环境下浸种10～15小时，然后弃浸种液，将种子用蒸馏水冲洗4～5次，每次3～8分钟，完成浸种处理；
(3)萌发出芽：将步骤(2)浸种处理后的种子放入铺有2～3层湿润滤纸的培养皿上，随后放入光照培养箱中，在温度为23～28℃，光照强度为2～4级，每12小时光照12小时黑暗交替培养10～20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子；
任选地进行，
(4)萌发出苗：将步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰以1:500～1000的质量比拌匀，均匀播种于苗床上进行萌发出苗90～120天，萌发出苗的环境要求为土壤含水量45～65％，地表空气湿度60～70％，温度20～25℃，得到红花龙胆种苗。
本发明提供的一种红花龙胆种苗，所述红花龙胆种苗由上述的促进红花龙胆种子萌发的方法制得。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的促进红花龙胆种子萌发的方法，上述种子萌发方法通过将硝酸钾、氯化钙或赤霉素溶液作为种子处理液，在种子萌发前进行浸种处理，首先在18～22℃的环境下浸种20～30小时，随后放入3～5℃的环境下浸种10～15小时，然后在培养箱中进行每12小时光照12小时黑暗交替的恒温培养，得到的红花龙胆种子的发芽率十分理想，种子的发芽率比应用蒸馏水浸种进行萌发的方法高出20～30％，解决了红花龙胆作为高山植物，在其种子萌发时，不能快速高效的破除红花龙胆种子休眠，以及在萌发培养过程中环境温度，光照等条件不易控制，导致种子的发芽率很低，育种时间长等问题，并最终为促进红花龙胆资源的可持续利用提供了基础。
(2)本发明提供的红花龙胆种苗，该红花龙胆种苗通过上述促进红花龙胆种子萌发的方法制得，其出苗率明显高于用蒸馏水萌发后进行出苗的种子的出苗率，且种子出苗整齐。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
根据本发明的一个方面一种促进红花龙胆种子萌发的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)配制种子处理液：配制硝酸钾、氯化钙或赤霉素溶液作为种子处理液；
(2)种子萌发前浸种处理：将红花龙胆种子用2～3层纱布包裹，置于步骤(1)种子处理液中，在18～22℃的环境下浸种20～30小时，随后放入3～5℃的环境下浸种10～15小时，然后弃浸种液，将种子清洗干净，完成浸种处理；
(3)萌发培养：将步骤(2)浸种处理后的种子放入铺有湿润滤纸的培养皿上，随后放入培养箱中培养10～20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子。
本发明中，上述硝酸钾属于二元复合肥。其植物营养素钾、氮的总含量可达50％左右，具有良好的物理化学性质。在本发明红花龙胆种子萌发过程中应用特定浓度的硝酸钾溶液对种子进行处理具有打破休眠，提高种子活力，提高出苗率的作用。硝酸钾中的k+作为多种酶(如nad激酶、atp酶等)的激活剂，可以在一定程度上提高或促进多种酶的活性，也使细胞膜得到部分修复，还可参与诱导植物体内促性激素的生物合成及其活力调控，从而使红花龙胆种子生活力提高，促进发芽。
本发明中，上述氯化钙作为细胞的结构成分，参与并维持生物体的代谢活动，维持生物体内的酸碱平衡，维持细胞的渗透压，尤其对于植物吸收养分有重要作用。氯化钙中的钙离子既是一种营养元素，而且还是偶联胞外信号与胞内生理生化反应的第二信使，对植物的生长发育有重要的调控作用。
本发明中，上述赤霉素作为一种植物激素被应用于红花龙胆种子的萌发，赤霉素可以提高植物体内生长素的含量，进而加速细胞的伸长，对细胞的分裂也有促进作用，它可以促进细胞的扩大，除此之外，赤霉素还有着抑制侧芽休眠作用。
本发明中，上述红花龙胆种子为经过筛选的完整、无损伤的淡褐色成熟种子，上述红花龙胆种子均为选取长2.275～1.550mm，宽1.900～1.125mm，种子长宽比1.444～1.000，每千粒种子重为0.1296～0.1248g的种子。
在本发明的一种优选实施方式中，任选地进行步骤(4)萌发出苗：将步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰拌匀，均匀播种于苗床上进行萌发出苗90～120天，得到红花龙胆种苗。
在本发明的一种优选实施方式中，上述步骤(1)中硝酸钾溶液质量百分浓度为1％～5％；上述步骤(1)中氯化钙溶液质量百分浓度为0.25％～2％；上述步骤(1)中赤霉素溶液质量体积浓度为50mg/l～800mg/l。
本发明中，通过对上述硝酸钾、氯化钙和赤霉素溶液的浓度比例的进一步调整和优化，从而进一步优化了本发明红花龙胆种子萌发的效果。
在本发明的一种优选实施方式中，上述步骤(2)种子清洗的方法为用蒸馏水冲洗4～5次，每次3～8分钟。
在本发明的一种优选实施方式中，上述步骤(3)中培养箱为光照培养箱，光照培养箱的培养温度为23～28℃，光照强度为2～4级，每12小时光照12小时黑暗交替。
在本发明的一种优选实施方式中，上述步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰的质量比为1:500～1000。
在本发明的一种优选实施方式中，上述步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子播种前2～4天，用0.05～0.1％的高锰酸钾溶液均匀泼洒于苗床，对土壤进行消毒，并在播种前2～3小时用清水浇透苗床。
上述在萌发出苗前用高锰酸钾溶液对苗床进行消毒，可以有效杀死土壤里的病菌，使红花龙胆更好的出苗生长，避免苗期病虫害的发生。
在本发明的一种优选实施方式中，上述萌发出苗的环境要求为土壤含水量45～65％，地表空气湿度60～70％，温度20～25℃。
本发明萌发出苗的培养过程中，根据土壤湿度、温度、天气情况适时对苗床浇水，保持土壤湿润，一般晴天每天一次，阴天2～3天一次，雨天不浇水，定期清除杂草、防虫，定时观察、记录。
在上述优选实施方式中，在苗床上搭建一个遮阳网，遮阳网的遮荫度为60％～70％。
在本发明的一种优选实施方式中，所述方法具体包括如下步骤：
(1)配制种子处理液：配制硝酸钾、氯化钙或赤霉素溶液作为种子处理液；
所述硝酸钾溶液质量百分浓度为1％、2％、3％、4％和5％；
所述氯化钙溶液质量百分浓度为0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％；
所述赤霉素溶液质量体积浓度为50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l；
(2)种子萌发前浸种处理：将红花龙胆种子用2～3层纱布包裹，置于步骤(1)种子处理液中，在18～22℃的环境下浸种20～30小时，随后放入3～5℃的环境下浸种10～15小时，然后弃浸种液，将种子用蒸馏水冲洗4～5次，每次3～8分钟，完成浸种处理；
(3)萌发培养：将步骤(2)浸种处理后的种子放入铺有2～3层湿润滤纸的培养皿上，随后放入光照培养箱中，在温度为23～28℃，光照强度为2～4级，每12小时光照12小时黑暗交替培养10～20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子；
任选地进行，
(4)萌发出苗：将步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰以1:500～1000的质量比拌匀，均匀播种于苗床上进行萌发出苗90～120天，萌发出苗的环境要求为土壤含水量45～65％，地表空气湿度60～70％，温度20～25℃，得到红花龙胆种苗。
在上述优选实施方式中，优选地，所述方法具体包括如下步骤：
(1)配制种子处理液：配制硝酸钾、氯化钙或赤霉素溶液作为种子处理液；
所述硝酸钾溶液质量百分浓度为1％、2％、3％、4％、5％；
所述氯化钙溶液质量百分浓度为0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％；
所述赤霉素溶液质量体积浓度为50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l；
(2)种子萌发前浸种处理：将红花龙胆种子用2层纱布包裹，置于步骤(1)种子处理液中，在20℃的环境下浸种24小时，随后放入4℃的环境下浸种12小时，然后弃浸种液，将种子用蒸馏水冲洗4次，每次5分钟，完成浸种处理；
(3)萌发培养：将步骤(2)浸种处理后的种子放入铺有2层湿润滤纸的培养皿上，随后放入光照培养箱中，在温度为25℃，光照强度为3级，每12小时光照12小时黑暗交替培养18天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子；
任选地进行，
(4)萌发出苗：将步骤(2)浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰以1:500～1000的质量比拌匀，均匀播种于苗床上进行萌发出苗90～120天，萌发出苗的环境要求为土壤含水量45～65％，地表空气湿度60～70％，温度20～25℃，得到红花龙胆种苗。
根据本发明的一个方面，一种红花龙胆种苗，所述红花龙胆种苗由上述的促进红花龙胆种子萌发的方法制得。
实施例1
一种促进红花龙胆种子萌发的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)选取450粒红花龙胆种子，分为三组，每组150粒红花龙胆种子，随后各用2层纱布包裹，分别置于浓度为1％、2％和3％的硝酸钾种子处理液中，其中，
第一组置于1％的硝酸钾种子处理液中；
第二组置于2％的硝酸钾种子处理液中；
第三组置于3％的硝酸钾种子处理液中；
然后将三组种子在20℃的环境下浸种24小时，随后放入4℃的环境下浸种12小时，弃浸种液；
(2)将弃浸种液后的三组种子用蒸馏水冲洗4次，每次5分钟，完成浸种处理；
(3)将上述三组步骤(2)浸种处理后的种子分别放入铺有2层湿润滤纸的培养皿上，随后放入培养箱中培养20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子；
(4)在上述步骤(3)培养箱培养过程中，对种子出芽期内连续观测，并分别对三组种子的发芽数进行统计，计算出红花龙胆种子发芽率、发芽势和发芽指数。
实施例2
一种促进红花龙胆种子萌发的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)选取750粒红花龙胆种子，分为五组，每组150粒红花龙胆种子，随后各用2层纱布包裹，分别置于浓度为0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％的氯化钙种子处理液中，其中，
第一组置于0.25％的氯化钙种子处理液中；
第二组置于0.5％的氯化钙种子处理液中；
第三组置于1％的氯化钙种子处理液中；
第四组置于1.5％的氯化钙种子处理液中；
第五组置于2％的氯化钙种子处理液中，
然后将五组种子在20℃环境下浸种24小时，随后放入4℃的环境下浸种12小时，然后弃浸种液；
(2)将弃浸种液后的五组种子用蒸馏水冲洗4次，每次5分钟，完成浸种处理；
(3)将上述五组步骤(2)浸种处理后的种子分别放入铺有2层湿润滤纸的培养皿上，随后放入培养箱中培养20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子；
(4)在上述步骤(3)培养箱培养过程中，对种子出芽期内连续观测，并分别对五组种子的发芽数进行统计，计算出红花龙胆种子发芽率、发芽势和发芽指数。
实施例3
一种促进红花龙胆种子萌发的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)选取750粒红花龙胆种子，分为五组，每组150粒红花龙胆种子，随后各用2层纱布包裹，分别置于浓度为50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l的赤霉素种子处理液中，其中，
第一组置于50mg/l的赤霉素种子处理液；
第二组置于100mg/l的赤霉素种子处理液中；
第三组置于200mg/l的赤霉素种子处理液中；
第四组置于400mg/l的赤霉素种子处理液中；
第五组置于800mg/l的赤霉素种子处理液中，
然后将五组种子在20℃环境下浸种24小时，随后放入4℃的环境下浸种12小时，然后弃浸种液；
(2)将弃浸种液后的五组种子用蒸馏水冲洗4次，每次5分钟，完成浸种处理；
(3)将上述五组步骤(2)浸种处理后的种子分别放入铺有2层湿润滤纸的培养皿上，随后放入培养箱中培养20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子；
(4)在上述步骤(3)培养箱培养过程中，对种子出芽期内连续观测，并分别对五组种子的发芽数进行统计，计算出红花龙胆种子发芽率、发芽势和发芽指数。
对比例1
一种促进红花龙胆种子萌发的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)取150粒红花龙胆种子，随后用2层纱布包裹，置于蒸馏水中，在20℃环境下浸种24小时，随后放入4℃的环境下浸种12小时，然后弃浸种液；
(2)将弃浸种液后的种子用蒸馏水冲洗4次，每次5分钟，完成浸种处理；
(3)将上述步骤(2)浸种处理后的种子放入铺有2层湿润滤纸的培养皿上，随后放入培养箱中培养20天，并保持滤纸湿润，得到发芽后的红花龙胆种子；
(4)在上述步骤(3)培养箱培养过程中，对种子出芽期内连续观测，并对发芽数进行统计，计算出红花龙胆种子发芽率、发芽势和发芽指数。
效果例1
为表明本发明促进红花龙胆种子萌发的方法具有快速高效的破除红花龙胆种子休眠，提高种子发芽率，缩短种子育种时间的技术效果。
特选择实施例1～3与对比例1，针对其种子萌发后的发芽率、发芽势、发芽指数、发芽时滞和发芽历时对使用不同试剂浓度浸种的实施方式进行萌发对比评价，试验结果如下表1所示：
表1：不同试剂浓度浸种对红花龙胆种子萌发的影响
效果评价：
由上述表1可知，经过萌发前种子处理液处理过的种子其发芽率明显高于对比例1中未经种子处理液处理的种子，其中，浓度为1％的硝酸钾溶液处理后的种子发芽率为72.67％，比对比例1高出20.67％，浓度为100mg/l的赤霉素浸溶液处理后的种子发芽率为82％，比对比例1提高了30％。
实施例4
选择4月中下旬一天，在肥沃松软、透气性与保水性好的土壤上进行种子播种，播种前3天将土壤深翻25cm，开厢挖沟，厢长10m，宽1m，沟深20cm，并用0.1％高锰酸钾溶液均匀泼洒于苗床消毒土壤，播种前2小时用清水浇透苗床；
使用实施例1的方法浸种处理后的三组红花龙胆种子分别与草木灰按1:500的混合比例拌匀，均匀播撒于苗床上，种子播种量为50g/亩。萌发出苗的环境要求为土壤含水量为50％，地表空气湿度为60％，温度为20℃，并搭建遮阳网，遮阳网的遮荫度为70％。根据土壤湿度、温度、天气情况适时浇水，保持土壤湿润，进行为期100天的出苗实验。定期清除杂草、防虫，定时观察、记录。
实施例5
选择4月中下旬一天，在肥沃松软、透气性与保水性好的土壤上进行种子播种，播种前3天将土壤深翻25cm，开厢挖沟，厢长10m，宽1m，沟深20cm，并用0.1％高锰酸钾溶液均匀泼洒于苗床消毒土壤，播种前2小时用清水浇透苗床；
使用实施例3的方法浸种处理后的第二组、第三组和第四组红花龙胆种子分别与草木灰按1:500的混合比例拌匀，均匀播撒于苗床上，种子播种量为50g/亩。萌发出苗的环境要求为土壤含水量为50％，地表空气湿度为60％，温度为20℃，并搭建遮阳网，遮阳网的遮荫度为70％。根据土壤湿度、温度、天气情况适时浇水，保持土壤湿润，进行为期100天的出苗实验。定期清除杂草、防虫，定时观察、记录。
对比例2
选择4月中下旬一天，在肥沃松软、透气性与保水性好的土壤上进行种子播种，播种前3天将土壤深翻25cm，开厢挖沟，厢长10m，宽1m，沟深20cm，并用0.1％高锰酸钾溶液均匀泼洒于苗床消毒土壤，播种前2小时用清水浇透苗床；
使用对比例1的方法浸种处理后的红花龙胆种子与草木灰按1:500的混合比例拌匀，均匀播撒于苗床上，种子播种量为50g/亩。萌发出苗的环境要求为土壤含水量为50％，地表空气湿度为60％，温度为20℃，并搭建遮阳网，遮阳网的遮荫度为70％。根据土壤湿度、温度、天气情况适时浇水，保持土壤湿润，进行为期100天的出苗实验。定期清除杂草、防虫，定时观察、记录。
效果例2
为表明本发明促进红花龙胆种子萌发的方法具有快速高效的破除红花龙胆种子休眠，提高种子发芽率，并可以提高已发芽种子出苗率的技术效果。
特选择实施例4和实施例5的出苗方法与对比例2的出苗方法，针对地面出苗实验的出苗数和出苗率进行出苗对比评价，试验结果如下表2所示：
表2：地面出苗率实验结果
效果评价：
由上述表2可知，使用本发明促进红花龙胆种子萌发的方法得到的发芽后的种子，其出苗率明显高于对比例2中未经本方法处理的种子，其中，浓度为1％的硝酸钾溶液处理后的种子出苗数为183，比对比例2的73株，高出110株，浓度为100mg/l的赤霉素溶液处理后的种子出苗率为136株，比对比例2的73株，高出63株。由上述结果可知，使用本发明促进红花龙胆种子萌发的方法得到的发芽后的种子，其出苗率明显高于未经本发明方法处理的种子。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。