本发明涉及一种块菌菌根苗的合成方法。
背景技术：
块菌（truffles）为了囊菌类、块菌目（tuberales）、块菌科（tuberaceae）、块菌属（tuber），是一类与维管束植物形成共生关系，具有很高营养价值与经济开发价值的地下名贵食用真菌、除具有较高的维生素b1、维生素b2与独特的口感及香味外，其内所含的雄性酮类成份是其它类食用菌所无法与之相比的，特别是欧美等国家块菌号称“黑色钻石”。
过去块菌主要靠自然生长，随着需求量的增长，掠夺式的采挖已导致自然野生产量逐年下降，目前已成为濒危物种。近年来，逐步开展了人工栽培块菌的研究，但一是接种块菌菌种均为子囊果均浆液，菌种纯度低，二是宿主植物苗和块菌菌根幼苗的培育在有菌的环境下进行，受外界杂菌的影响，造成块菌菌根苗合成的感染率只有60%以下，寄生成功率较低。
技术实现要素：
本发明的目的是针对上述存在的问题，提供一种感染率高的块菌菌根苗合成方法。
本发明是这样实现的：包括宿主植物苗的培育、块菌菌种接种、块菌菌根苗初期培育、块菌菌根苗后期培育，其特征是：
1、宿主植物苗的培育：宿主植物选用云南松、华山松、板栗、钓栲的任意一种，宿主植物的种子经消毒处理后，在无菌的环境下，使用无菌的基质培育80～100天；
2、块菌菌种接种：在装有空气净化器的无菌接种间内进行块菌菌种接种，作业前开起空气净化器30～50分种，将步骤1培养的宿主植物苗剪去根段末端1/3，根部按顺序蘸生根液和高纯度液体块菌菌种后，放入装有1/3基质的黑色育苗杯内，用接种枪瞄准宿主植物苗根部射入10～13ml高纯度液体块菌菌种，宿主植物苗扶正后加入基质至距杯上口1.0～1.5cm，生根液为吲哚乙酸水溶液浓度为1~2mg/l，基质为过2目砂窗过筛腐殖土、蛭石、石英砂按体积比2：1:1比例混匀后、调整水份30~35%，调整ph值7～8.5，经128℃高压灭菌2小时；
3、块菌菌根苗初期培育：将步骤2接种后的宿主植物苗放入到在装有空气净化器的无菌育苗室培育，1～3天育苗室温度控制在18～26℃，3天后，育苗室温度控制在昼26±1℃，夜15±1℃，每天光照时长10～12小时，光照度为1200～1500lx，每天开起空气净化器30～50分钟，培育15天后，菌根苗可移入塑料大棚培育；
4、块菌菌根苗后期培育：将步骤3菌根苗移入塑料大棚，3～5天内进行遮阳，遮光率为55～65%，5天后在大棚自然环境下培育，5～6个月后可到大田移栽。
本发明中一是接种块菌菌种使用了
本技术：
人生产的高纯度液体块菌菌种，二是宿主植物苗和块菌菌根苗初期培育在无菌的环境下进行，未受外界杂菌的影响，三是宿主植物苗蘸生根液和高纯度液体块菌菌种后，用接种枪瞄准宿主植物苗根部射入高纯度液体块菌菌种，宿主植物苗根部及周围菌种密布，为此，块菌菌根苗合成的感染率高，可以达到90%以上，比现有技术高出30%。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作具体说明。
1、宿主植物苗的培育：
（1）宿主植物种子的筛选和保存
宿主植物选用云南松、华山松、板栗、钓栲（大叶槠）任意一种，云南松、华山松种子用水洗去除空壳后晾干，装在玻璃罐或纱布袋中储藏备用；板粟、钓栲种子水洗去除霉烂变质与不饱满的种子、晾干表面水份，种子与湿度为25～35%的洁净河砂按体积比1：2的比例混合装入纸箱中并置于4～6℃的冷藏柜中保存备用；
（2）种子处理：
使用云南松、华山松种子时；用0.1%高锰酸钾溶液浸泡30分种，用清水冲洗2～3遍，再用30%h2o2溶液浸泡4小时，并用戴有防护橡胶手套的手搓洗，使种子表面坚硬的腊层尽量去除，以利种子吸收水份和播种后萌发，用无菌水冲洗3～4遍后，再用无菌水浸泡96小时，浸泡时至少每24小时更换一次无菌水，接着沥干水份后备用；使用板粟、钓栲（大叶槠）树种子时，用0.1%高锰酸钾溶液浸泡30分钟，用清水冲洗2～3遍后再用30%h2o2溶液浸泡2小时，浸泡时应随时搓洗，除去表面腊层，用无菌水冲洗3～4遍后，再用无菌水浸泡48小时，浸泡时至少每24小时更换一次无菌水，接着沥干水份后备用；
（3）育苗基质制备：过2目砂窗过筛腐殖土、蛭石、石英砂按体积比1:1:1比例混匀，加水调至含水量30～35%后，在128℃高压灭菌2小时备用；
（4）播种：基质装入专用塑料培养筐内，并将处理后的种子播入基质中培育，植入深度为2cm左右。
（5）育苗：播种后用无菌水浇灌、湿度控制在50～60%，播种后15天左右开始出芽，30天后苗基本上出齐，苗龄在90天后可开始接块菌种。
2、块菌菌种接种：在装有空气净化器的无菌接种间内进行块菌菌种接种，作业前开起空气净化器30～50分种，将步骤1培养的宿主植物苗剪去根段末端1/3，根部按顺序蘸生根液和高纯度液体块菌菌种后，放入装有1/3基质的黑色育苗杯内，用接种枪瞄准宿主植物苗根部射入10～13ml高纯度液体块菌菌种，宿主植物苗扶正后加入基质至距杯上口1.0～1.5cm，生根液为吲哚乙酸水溶液浓度为1~2mg/l，基质为过2目砂窗过筛腐殖土、蛭石、石英砂按体积比2：1:1比例混匀后、调整水份30~35%，用石灰粉调整调整ph值7～8.5，经128℃高压灭菌2小时；
3、块菌菌根苗初期培育：接种后的1-3天是菌种能否成活的关键时期，而接种后的7-15天又是菌种与植株共生能否成功的关键期，为此，将步骤2接种后的宿主植物苗放入在装有空气净化器的无菌育苗室培育，1～3天育苗室温度控制在18～26℃，3天后育苗室温度控制在昼26±1℃，夜15±1℃，每天光照时长10～12小时，光照度为1200～1500lx，每天开起空气净化器30～50分钟，培育15天后，菌根苗可移入塑料大棚培育；
4、块菌菌根苗后期培育：将步骤3菌根苗移入塑料大棚，3～5天内进行遮阳，遮光率为55～65%，5天后在大棚自然环境下培育，5～6个月后可到大田移栽。