本发明涉及植物栽培技术领域，具体说是一种黑斑观音莲原种制作方法。
背景技术：
黑斑观音莲(alocasialaut.'black')属天南星科海芋属。引自丹麦，叶羽状浅裂，叶表面深绿色，背面浅紫红色彩，叶柄有深紫色斑纹。喜温暖、潮润环境，生长适温30℃左右，在15～20℃的条件下，生长停顿，进入休眠。休眠期间应控制水分，停止施肥。生长季节要求土壤和空气有较大的湿度，要求非直射光的明亮环境。可用分株、分球繁殖和组织培养(组培)。分株和分球繁殖春季至夏季为适期。
目前，黑斑观音莲的组培工艺通常包括：母本——原种制作——初代培养——初代切割与细菌检测——增殖切割——过渡培养——生根培养——出货。其中，原种制作是组培工艺中非常关键的一步。现有的原种制作方法，芽萌动时间长，真、细菌污染率及死亡率高，成活率低。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种无真、细菌污染和死亡现象的黑斑观音莲原种制作方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种黑斑观音莲原种制作方法，包括：
预处理：将母株置于干燥、通风的环境中，停止浇水、施肥，让其自然干燥至基质表面以下20～50mm处的土层干燥；
采种：选取长势壮的母株，将母株整株取出，去除根系及多余叶片，采用顶芽和茎段作为外植体，剥除外植体外面的包片，露出顶芽的芽点，切除茎段基部的杂质；
消毒：用洗洁精对外植体进行表面消毒，然后用无菌水清洗干净，根据外植体的大小进行分瓶；
再消毒：依外植体的大小用升汞水溶液消毒10～25min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体两端变色部分以及四周被腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；
培养：控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。
本发明的有益效果在于：区别于现有技术，本发明通过对母本进行预处理后再进行采种，采用顶芽和茎段作为外植体，对外植体进行两次消毒后再用培养基培养，并优化培养工艺，使芽萌动时间大大缩短至8～13天，彻底消除了真、细菌污染和死亡现象，种苗成活率可达100％。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明最关键的构思在于：对母本进行预处理后再进行采种，采用顶芽和茎段作为外植体，对外植体进行两次消毒后再用培养基培养，并优化培养工艺。
具体的，本发明提供的黑斑观音莲原种制作方法，包括：
预处理：将母株置于干燥、通风的环境中，停止浇水、施肥，让其自然干燥至基质表面以下20～50mm处的土层干燥；
采种：选取长势壮的母株，将母株整株取出，去除根系及多余叶片，采用顶芽和茎段作为外植体，剥除外植体外面的包片，露出顶芽的芽点，切除茎段基部的杂质；
消毒：用洗洁精对外植体进行表面消毒，然后用无菌水清洗干净，根据外植体的大小进行分瓶；
再消毒：依外植体的大小用升汞水溶液消毒10～25min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体两端变色部分以及四周被腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；
培养：控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。
其中，所述升汞水溶液的浓度为0.1wt％。
其中，用升汞水溶液消毒10～25min后，用无菌水清洗3次，每次3～5min。
其中，所述培养基中包含有6ba和iaa，6ba的含量为2.0mg/l，iaa的含量为0.3mg/l。
其中，所述培养基中还包含有ams、蔗糖和卡拉胶。
其中，所述培养基的ph值为6.0。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：区别于现有技术，本发明通过对母本进行预处理后再进行采种，采用顶芽和茎段作为外植体，对外植体进行两次消毒后再用培养基培养，并优化培养工艺，使芽萌动时间大大缩短至8～13天，彻底消除了真、细菌污染和死亡现象，种苗成活率可达100％。
实施例1
1、材料与方法
1.1试验材料
采用引自丹麦的黑斑观音莲作为母本，数量为1盆；经预处理后，选取母株上具有母本特性的轻度萎焉的顶芽和茎段作为外植体。其中，茎段4个，顶芽2个，外植体总数量为6个。
1.2试验方法
1.2.1试验步骤
制种前20～30天，将母本搬至母本预处理区，停止浇水、施肥，放置于干净、干燥、通风的环境(苗床上)，让其自然干燥。待其基质表面以下20～50mm处的土层干燥、均匀一致(用手捏成散沙状，不粘手)，植株叶片呈现轻度萎蔫时便可进行采种。选取长势壮的母株，把母株从盆中整株取出，去除根系及多余叶片再带回处理，剥除外植体外面的包片，使顶芽露出芽点，芽点四周平滑，切除茎段基部的杂质，让基部光滑，不出现凹凸不平的现象，外植体呈方形状。用洗洁精对外植体进行表面消毒，后用无菌水清洗干净，根据植物的大小进行分瓶，在杯盖上注明植物代码及消毒时间；依外植体的大小用浓度为0.1wt％的升汞水溶液消毒10-25min，消毒后用无菌水洗3次(每次3～5min)，然后用刀切除外植体两端变色部分以及四周被腐蚀的部分，使其露出新鲜组织再接种到培养基上(1个/瓶)。
1.2.2培养基
ph6.0
1.2.3培养条件
26±1℃300～500lx4～5w
1.2.4调查指标
顶芽和茎段侧芽萌动时间；真、细菌污染率及死亡率；成活率
2、结果与分析
2.1结果
该品种原种制作采用顶芽和茎段，一共6个外植体，消毒时间为18min的全部为茎段一共4个，成活4个；消毒时间为12min的为顶芽一共2个，成活2个；(其它见下表1)。
表1黑斑观音莲原种制作试验结果数据表
从表1的记载可知，采用本发明的黑斑观音莲原种制作方法，芽萌动时间仅需8～13天，总成活率为100％，无真、细菌污染和死亡现象。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。