本发明属于植物育种领域，具体涉及一种半活体培养测定樱桃需冷量的方法。
背景技术：
：需冷量是指落叶果树自然休眠所需的有效低温时数，多数落叶果树需要积累一定的需冷量后才能打破休眠，进行升温。需冷量对落叶果树适地适栽、设施栽培和预测气候变化具有重要的意义。樱桃果实外表色泽鲜艳、晶莹美丽，富含糖、蛋白质、维生素及钙、铁、磷、钾等多种元素，是一种高档水果，经济价值高，适合我国种值。通过设施栽培能够提早果实的成熟期，从而显著地提高经济效益，但樱桃和其它果树一样，需要积累一定的需冷量后才能打破自然休眠，从而正常开花结果。因此，只有知道樱桃各品种的需冷量，才能正确地选择设施地栽培品种和覆膜加温时间。现有的测量果树需冷量方法多是落叶后每隔一段时间直接从田间采集枝条，然后带回实验室进行光照培养，观察花芽或叶芽的萌芽率，然后根据当地气象局监测的气温或自动监测仪测定的温度进行测算，这种方法耗费时间长，且枝条易受外界温度不可控因素的影响，同时需要利用其它设备记录外界温度。刘仁道(刘仁道,刘建军.甜樱桃不同品种需冷量研究.北方园艺,2009(2)：84-85)等将枝条采集后直接放入4℃冰箱中保存，然后进行室温培养，但此方法的缺点是枝条长时间存放会出现干枯或发霉现象，且在冰箱中存放始终处于黑暗环境，对花芽分化有一定影响，不能精确地测定其需冷量。技术实现要素：本发明针对当前果树需冷量测定存在的问题，提出一种利用半活体培养测量法，除了控制温度以外，尽可能模拟外界环境条件，以便更为准确地测定樱桃的需冷量，为生产实践提供更为可靠的数据。该方法可用于其他落叶果树(桃、梨等)的需冷量测定，也可为其他植物的需冷量测定提供参考。即，本发明的第一目的在于提供一种半活体培养测定樱桃需冷量的方法，包括以下步骤：1)采集樱桃枝条；2)低温培养樱桃枝条；3)室温培养樱桃枝条，统计花芽和叶芽萌芽率，测定樱桃需冷量。优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述步骤1)中采集的樱桃枝条为12月中下旬樱桃树休眠后、采集带有饱满花芽的樱桃树上一年生枝条。优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述步骤1)中采集樱桃枝条的方法为剪平枝条基部，控制枝条长度30～50cm，且每根枝条上至少留有5个花芽。优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述步骤2)中低温培养的方法为将采集的枝条插入装有培养液的容器中，放入4～7℃低温培养箱中培养。更优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述步骤2)中低温培养的光照条件为白天/黑夜＝10h/14h，光照强度1200lx。优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述步骤3)中室温培养樱桃枝条的方法为每隔4天将低温培养箱中的枝条取出，剪去枝条基部，使枝条下部露出新鲜色，插入装有培养液的容器中，然后将装有枝条的容器放入白天温度25℃、晚上温度15℃的培养箱中进行培养15天。更优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述室温培养的光照条件为白天/黑夜＝14h/10h，光照强度2500lx。优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述需冷量测定的标准为以叶芽和花芽萌芽率达到50％为叶芽和花芽满足其自身需冷量，再用需冷量模型计算出樱桃需冷量。优选地，本发明所述的半活体培养测定樱桃需冷量的方法中，所述培养液为25g/l的蔗糖溶液；所述培养液在整个培养期间，每5天更换一次。本发明与现有技术相比，本发明至少具有以下优点：通过低温培养与室温培养交替应用，尽可能模拟外界条件，有效地控制了温度，避免枝条受外界温度不可控因素的影响或利用其它设备记录外界温度，为需冷量的计算提供方便。具体实施方式下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例11)枝条采集：于12月中旬短柄樱桃树和黑珍珠樱桃树落叶后，采集带有饱满花芽的一年生枝条，剪平枝条基部，控制枝条长度50cm，确保每根枝条上至少留有5个花芽。2)低温培养：将采集的枝条插入装有25g/l蔗糖培养液的容器中，放入4℃培养箱中进行培养，光照条件白天/黑夜＝10h/14h，光照强度1200lx。营养液每隔5天更换一次。3)室温培养：每隔4天将4℃培养箱中的枝条取出，剪去枝条基部，使枝条下部露出新鲜色，插入装有25g/l蔗糖培养液的容器中，然后将装有枝条的容器放入白天温度25℃、晚上温度15℃、白天/黑夜＝14h/10h、光照强度为2500lx的培养箱中进行培养。15天后，统计花芽和叶芽萌芽率，以叶芽和花芽萌芽率达到50％为叶芽和花芽满足其自身需冷量，再用需冷量模型计算出樱桃需冷量。表14℃培养后短柄和黑珍珠樱桃叶芽和花芽的萌芽率(％)培养时间144h240h336h432h528h624h720h816h短柄叶芽16.030.045.079.0100黑珍珠叶芽10.015.020.024.035.055.066.7100短柄花芽26.038.069.0100黑珍珠花芽10.022.036.044.072.7100从表1可以看到，短柄叶芽的需冷量为432h，花芽需冷量为336h；黑珍珠叶芽需冷量为624h，花芽需冷量为528h。实施例21)枝条采集：于12月中旬短柄和黑珍珠樱桃树落叶后，采集带有饱满花芽的一年生枝条，剪平枝条基部，控制枝条长度50cm，确保每根枝条上至少留有5个花芽。2)低温培养：将采集的枝条插入装有25g/l蔗糖培养液的容器中，放入7℃培养箱中进行培养，光照条件白天/黑夜＝10h/14h，光照强度1200lx。营养液每隔5天更换一次。3)室温培养：每隔4天将7℃培养箱中的枝条取出，剪去枝条基部，使枝条下部露出新鲜色，插入装有25g/l蔗糖培养液的容器中，然后将装有枝条的容器放入白天温度25℃、晚上温度15℃、白天/黑夜＝14h/10h、光照强度为2500lx的培养箱中进行培养。15天后，统计花芽和叶芽萌芽率，以叶芽和花芽萌芽率达到50％为叶芽和花芽满足其自身需冷量，再用需冷量模型计算出樱桃需冷量。表27℃培养后短柄和黑珍珠樱桃叶芽和花芽的萌芽率(％)从表2可以看到，短柄叶芽的需冷量为432h，花芽需冷量为336h；黑珍珠叶芽需冷量为624h，花芽需冷量为528h。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12