本发明涉及植株的繁育方法，具体涉及一种将沾冬2号纯化为四倍体枣树的方法。
背景技术：
枣原产中国，是中国最具特色和优势的果树树种之一，栽培面积近3000万亩，产量多600万吨，占世界99%。近年来，随着枣产业的发展，栽培品种结构不断调整优化，鲜食枣的栽培越来越受到重视。‘冬枣’是目前我国第一大主栽优良鲜食枣品种，除了山东沾化以外，在河北、山西和陕西等地也都形成了一定的规模。但‘冬枣’果个偏小、栽培管理要求高，进行‘冬枣’遗传改良不仅是‘冬枣’，也是当前鲜食枣产业发展的必然需要。
果树多倍体常表现出果实巨大性等优良性状，在果树育种中一直受到高度重视。枣树的多倍性育种开始于20世纪70年代末期，但枣树人工诱变多倍体常常是获得嵌合体，嵌合体纯化仍是枣树人工多倍体诱变中需要面对的重要问题。当前田间大面积种植的‘沾冬2号’是源自‘冬枣’自然变异的倍性嵌合体材料（二、四混倍体），其生长特性不稳定，‘冬枣’果实偏小，枝条中每年会出现相当比例的二倍体‘冬枣’，并且其抗性低，近几年冻害严重，这增加了管理难度，降低了收益，严重影响了枣农的推广积极性，限制了该品种的推广发展。在枣树倍性种质创新中，已有人工诱变、胚乳培养获得多倍体的报道，但自然芽变倍性嵌合体的纯化研究尚未见报道。能否通过自然芽变倍性嵌合体的纯化，纯化嵌合体‘沾冬2号’获得四倍体冬枣，实现‘沾冬2号’的多倍化改良和换代升级，是目前行业内亟需解决的技术问题。
技术实现要素：
为了解决以上现有技术中的问题，本发明创造性的提出一种将沾冬2号纯化为四倍体枣树的方法，该方法通过自然芽变倍性嵌合体的纯化得到四倍体冬枣植株，无需像离体组培那样经历过渡培养、温室栽培、移栽下地等过程，可直接移栽入大田，具有可以进行再生材料田间快速评价的优势，提高了‘沾冬2号’的纯化效率，加速获得纯四倍体冬枣。
本技术：
采取的技术方案如下：
（1）从‘沾冬2号’冬枣栽培园筛选出品质优异且性状稳定达3年以上的‘沾冬2号’种质树体或枝条，检测筛选出四倍体枝条，采集单株中上部发育较好的一年生一年生枣头或二次枝作为接穗；
（2）采用继代嫁接方式，将步骤（1）中得到的接穗进行与沾冬2号进行嫁接，经过多次嫁接筛选后，筛选出经检测综合性状优异且稳定的纯四倍体冬枣株或枝作为良种接穗育苗专用；
（3）植株的倍性鉴定：叶形指数，节间作为指标进行形态学上的鉴定，利用常规压片法鉴定诱导植株的染色体数目，利用荧光显微镜观测保卫细胞叶绿体数目，气轧大小及密度，利用流式细胞仪检测诱导植株细胞的dna含量，区分为纯四倍体枝条或纯四倍体枣树苗；
（4）纯四倍体枣树苗直接移栽入大田纯四倍体种植园；纯四倍体枝条不断采接穗嫁接到性状稳定纯合四倍体优株或优枝上；
（5）不断进行四倍体植株的盆栽抗性试验、大田抗性试验，选择抗性水平高、性状优良的株系，果实品质的测定，从而纯化选育出优良的四倍体冬枣苗木。
其中，以上步骤（2）中嫁接方式为皮下接或芽接。
其中以上步骤（5）中的果实品质的测定方法为：对抗性水平高、性状优良的株系进行果实品质的测定，果实硬度利用gy-1型圆盘硬度计测定，果实的可溶固形物含量利用atago数字折射计prl测定，果实维生素c含量采用差分分析分光光度计法测定，果实的大小和重量测定，果核的有无，从而选育出优良的四倍体冬枣苗木。
其中，本申请中‘沾冬2号’冬枣树为二、四倍体嵌合体。
本发明的有益效果为：本申请通过自然芽变倍性嵌合体的纯化得到四倍体冬枣植株，无需像离体组培那样经历过渡培养、温室栽培、移栽下地等过程，可直接移栽入大田，具有可以进行再生材料田间快速评价的优势，提高了‘沾冬2号’的纯化效率，加速获得纯四倍体冬枣。
本申请以沾冬2号倍性嵌合体为材料，通过结合田间优选和不断的嫁接纯化的途径纯化二、四倍混倍体的‘沾冬2号’，获得性状优良的纯合冬枣四倍体植株并推广示范，促进冬枣品种的换代升级，提高了冬枣的产量和品质，个体树增产至少50％。本申请技术方案从材料重要性和新颖性、技术先进性和研究结果的应用价值等方面来看，与国内外本行业中的相关研究相比，均处于先进水平。
具体实施方式
下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
实施例：
1.项目实施地点
冬枣苗木田间选育在沾化县冬枣研究所下属的中国高新技术苗木繁育场进行。
2.项目实施规模
项目研究的不同阶段，规模由小到大，每种材料的规模在1000平方米左右，至开发阶段规模扩大。
3.项目实施方法
（1）从‘沾冬2号’冬枣栽培园筛选出品质优异且性状稳定达3年以上的‘沾冬2号’种质树体或枝条，检测筛选出四倍体枝条，采集单株中上部发育较好的一年生一年生枣头或二次枝作为接穗；
（2）采用继代嫁接方式，采用皮下接或芽接的方式，将步骤（1）中得到的接穗进行与沾冬2号进行嫁接，经过多次嫁接筛选后，筛选出经检测综合性状优异且稳定的纯四倍体冬枣株或枝作为良种接穗育苗专用；
（3）植株的倍性鉴定：叶形指数，节间作为指标进行形态学上的鉴定，利用常规压片法鉴定诱导植株的染色体数目，利用荧光显微镜观测保卫细胞叶绿体数目，气轧大小及密度，利用流式细胞仪检测诱导植株细胞的dna含量，区分为纯四倍体枝条或纯四倍体枣树苗；
叶形指数约为1.85，节间平均约3.7厘米。利用常规压片法鉴定诱导植株的染色体数目，染色体数目为48条，利用流式细胞仪测得为四倍体。
（4）纯四倍体枣树苗直接移栽入大田纯四倍体种植园；纯四倍体枝条不断采接穗嫁接到性状稳定纯合四倍体优株或优枝上；
（5）不断进行四倍体植株的盆栽抗性试验、大田抗性试验，选择抗性水平高、性状优良的株系，果实品质的测定，抽样100kg，测定结果如下：
果实硬度利用gy-1型圆盘硬度计测定，平均硬度达8.7㎏∕c㎡，果实的可溶固形物含量利用atago数字折射计prl测定，可溶性固形物为33%，果实维生素c含量采用差分分析分光光度计法测定，维生素c含量为310㎎∕100g，果实的大小和重量测定，平均单果重21.69g，最大单果重57.12g，果形指数为0.909，果核小，从而纯化选育出优良的四倍体冬枣苗木。