本发明涉及一种黄花草木樨的无性繁殖方法，属于野生牧草育种领域。
背景技术：
黄花草木樨(melilotusofficinalis(l.)desr.)，又名黄香草木犀、黄甜车轴草、墨里老笃、金花草，为草木樨属植物，一年或两年生草本，茎高可达3m，全草有香气，在我国四川及长江流域以南各省区有野生种分布。黄花草木樨因其蛋白含量丰富，抗旱耐寒，根瘤菌固氮能力强，对温带中性或偏碱土壤有较强的适应性，对改良土质有重要作用。除了用于改良土质外，黄花草木樨还是优良的牧草饲料和绿肥，兼具药用、酿酒、造纸、蜜源等多种用途。尽管黄花草木樨用途广泛，但是种子发芽率低、成苗速度慢，其种质资源十分匮乏。目前国内外对其研究，也主要集中在药用价值的开发上，而在育种、栽培等方面的研究较少。由于地理隔离和长期的自然选择，野生黄花草木樨形成了形态、生理、生态、生化等方面的遗传多样性。如何通过快速的方法进行大面积推广种植，并保持母株的优良特征，是进行黄花草木樨种质创新高效利用的首要任务。但采集种子进行繁殖育种存在许多不足：一方面，野外资源调查时间并不一定是种子成熟期；另一方面，采集的种子难以保持母本的优良特性。采集优良茎条进行扦插繁殖，变异小，能保持母株的优良特征，是廉价、快速、简单的繁殖方法，但是新鲜黄花草木樨茎条直接扦插，茎条发根能力较弱，生根率较低，成活率并不高。
技术实现要素：
为了解决现有技术中的问题，本发明的目的在于提供一种野生黄花草木樨无性繁殖的方法，该方法操作简单、繁殖速度快、成本低廉，且野生黄花草木樨成活率高、茎条发根能力强。
除特殊说明外，本发明所述份数均为重量份，所述百分比均为质量百分比。
本发明的目的是这样实现的：
一种黄花草木樨无性繁殖的方法，包括生长激素溶液对黄花草木樨茎条处理和扦插步骤，其特征在于：所述生长激素溶液为浓度250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸和吲哚乙酸混合溶液，或者浓度为250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸和α-萘乙酸钠混合溶液，或者浓度为250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸钾和α-萘乙酸钠混合溶液。
本发明黄花草木樨无性繁殖的方法中，生长激素溶液为浓度250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸和吲哚乙酸混合溶液，指的是生长激素溶液中吲哚丁酸和吲哚乙酸的总浓度为250mg/l～1000mg/l。基于相同的理由，上述生长激素溶液为浓度250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸和α-萘乙酸钠混合溶液，指的是生长激素溶液中吲哚丁酸和α-萘乙酸钠的总浓度为250mg/l～1000mg/l；上述生长激素溶液为浓度250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸钾和α-萘乙酸混合溶液，指的是生长激素溶液中吲哚丁酸钾和α-萘乙酸的总浓度为250mg/l～1000mg/l。
本发明黄花草木樨无性繁殖的方法中，所述生长激素溶液中吲哚丁酸与吲哚乙酸的质量比优选为1:1；或者吲哚丁酸与α-萘乙酸钠的质量比优选为1:1；或者吲哚丁酸钾与α-萘乙酸钠的质量比优选为1:1。
本发明黄花草木樨无性繁殖的方法中，所述生长激素溶液为浓度500mg/l的吲哚丁酸和吲哚乙酸混合溶液，其中吲哚丁酸与吲哚乙酸的质量比优选为1:1。
本发明黄花草木樨无性繁殖的方法中，所述生长激素溶液对黄花草木樨茎条的处理方式为快速蘸取，蘸取时间不大于15秒。
本发明黄花草木樨无性繁殖的方法中，所述扦插基质为沙壤土基质、泥炭土与细沙以体积比1:1的混合基质或珍珠岩基质；优选沙壤土基质。
本发明黄花草木樨无性繁殖的方法，采用如下步骤：
(1)采条与制穗
3月中旬选取生长健壮、较粗的茎杆，在阴天或早上露水未干时进行采条，将茎杆去顶后剪成带3-4个节的插条，长度10-15cm，上切口在节上方0.5-1cm，下切口在节的下方0.5-1cm，切口平滑，剪去下部2个侧芽的叶片，保留上部的侧芽及叶片；
(2)扦插
首先，茎条在高锰酸钾0.1％-0.5％溶液中浸泡1小时消毒后；然后，插穗基部在生长激素溶液中快速蘸取后在基质中进行扦插，插条下部至少保证一个节在土壤中，扦插后浇水，并保持土壤湿润；待茎条成活后，连盆土一起移入大田内。
具体的说，一种黄花草木樨无性繁殖的方法，采用如下步骤：
(1)采条与制穗
3月中旬选取生长健壮、较粗的茎杆，在阴天或早上露水未干时进行采条，将茎杆去顶后剪成带3-4个节的插条，长度10-15cm，上切口在节上方0.5-1cm，下切口在节的下方0.5-1cm，切口平滑，剪去下部2个侧芽的叶片，保留上部的侧芽及叶片；
(2)扦插
首先，茎条在高锰酸钾0.1％-0.5％溶液中浸泡1小时消毒后；然后，插穗基部在生长激素溶液中快速蘸取后在基质中进行扦插，插条下部至少保证一个节在土壤中，扦插后浇水，并保持土壤湿润；待茎条成活后，连盆土一起移入大田内；所述生长激素溶液为浓度500mg/l的吲哚丁酸和吲哚乙酸混合溶液，其中吲哚丁酸与吲哚乙酸的质量比为1:1；所述快速蘸取时间不大于15秒；所述扦插基质为沙壤土基质。
本发明还提供生长激素溶液在黄花草木樨无性繁殖中的应用。
根据本发明的一个实施方案，生长激素溶液在黄花草木樨无性繁殖中的应用，所述生长激素溶液为浓度250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸和吲哚乙酸混合溶液，其中吲哚丁酸与吲哚乙酸的质量比为1:1。
根据本发明的一个实施方案，生长激素溶液在黄花草木樨无性繁殖中的应用，所述生长激素溶液为浓度250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸和α-萘乙酸钠混合溶液，其中吲哚丁酸和α-萘乙酸钠的质量比为1:1。
根据本发明的一个实施方案，生长激素溶液在黄花草木樨无性繁殖中的应用，所述生长激素溶液为浓度250mg/l～1000mg/l的吲哚丁酸钾和α-萘乙酸钠混合溶液，其中吲哚丁酸钾与α-萘乙酸钠的质量比为1:1。
有益效果：
1、本发明提供了一种黄花草木樨无性繁殖的方法，该方法通过特定浓度的复合生长激素溶液快速蘸取(不大于15秒)处理茎条，然后扦插繁殖，该方法促进了种茎不定根原基的发生及发育，加快根系的生长速度，增加单株根系的重量，不但能够有效提高黄花草木樨成活率，而且相比于在溶液中浸泡数小时，此方法更适合大规模生产。
2、本发明黄花草木樨无性繁殖，通过快速蘸取不同浓度浸种溶液后扦插，其生根率、根数、根长有明显差异。就生根率进行双因素方差分析，数据间差异极显著，不同浸种溶液间差异极显著，其中吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液生根率最高，生根效果最好，并且与另外两种溶液间差异极显著。不同浓度间差异也极显著，当浓度为500mg/l时，插条生根率最高，生根效果最好。就生根率而言，选择500mg/l的吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液的浸种液生根率最高，达到95％。而对插条生根数和根长进行双因素方差分析，数据间差异也极显著。其中，吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液生根数最多，生根效果最好。吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液溶液根长最长，生根效果最好。
3、本发明黄花草木樨无性繁殖，通过扦插在不同基质上的插条，其生根率、根数、根长有差异。其中，沙壤土、泥炭土+细沙中扦插的插条生根率间无显著差异，但于扦插在珍珠岩中的插条生根率比较，差异显著，但各处理间插条发根数量及根长无显著差异。当扦插于沙壤土中，种茎生根率可达95％，同时清水处理的种茎扦插在沙壤土中，生根率也达到49％，同时，插条的发根数量也可达到39条，根长也可达到22.5cm。泥炭土+细沙这种处理，其种茎生根率达到90％，同时清水处理的种茎在这种基质上的生根率也有45％，同时，插条的发根数量最高也有36条，根长最长有18.5cm。珍珠岩基质对插条的生根促进较差，生根率最高为82％，同时清水处理的插条在这种基质上的生根率为40％，插条的发根数量最高有33条，但清水处理的插条在这种基质上的发根数量仅为5条，根长最长为16.2cm。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行具体描述，在此指出以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术熟练人员可以根据上述发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。本发明所有原料及试剂均为市售产品。本发明所述巫山黄花草木樨为生长在巫山的野生黄花草木樨。
实施例1
黄花草木樨无性繁殖的方法，采用如下步骤：
(1)苗床及扦插基质准备
根据试验需要采用盆栽扦插，塑料育苗箱宽40cm、长80cm、高30cm。育苗箱内装入10cm厚的粗砂基础层，然后分别装入15cm厚3种基质：沙壤土、泥炭土+细沙(1:1混匀)、珍珠岩。扦插前1天用500倍百菌清溶液喷洒消毒。
(2)采条与制穗
3月中旬进行扦插。选取生长健壮、较粗的茎杆，在阴天或早上露水未干时进行采条。将茎杆去顶后剪成带3-4个节的插条，长度10-15cm，上切口在节上方0.5-1cm，下切口在节的下方0.5-1cm，切口平滑，剪去下部2个侧芽的叶片，保留上部的侧芽及叶片。
(3)浸种混合溶液的制备
混合液的配比采用的是同量配比的原则。
吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液配比方法：吲哚丁酸、吲哚乙酸各取0.5g，分别用75％乙醇10ml溶解后混合，混合液用水分别稀释到4l、2l、1l，配制成250mg/l、500mg/l、1000mg/l混合溶液。
吲哚丁酸+α-萘乙酸钠混合溶液配比方法：吲哚丁酸、α-萘乙酸钠各取0.5g，分别用75％乙醇10ml溶解后混合，混合液用水分别稀释到4l、2l、1l，配制成250mg/l、500mg/l、1000mg/l混合溶液。
吲哚丁酸钾+α-萘乙酸钠混合溶液配比方法：吲哚丁酸钾、α-萘乙酸钠各取0.5g，分别用75％乙醇10ml溶解后混合，混合液用水分别稀释到4l、2l、1l，配制成250mg/l、500mg/l、1000mg/l混合溶液。
(4)扦插
为保证成活率采用室内花盆进行扦插，待枝条成活后，连盆土一起移入大田内。首先，枝条在高锰酸钾0.1％-0.5％溶液中浸泡1小时消毒后。然后，插穗基部在浓度为250mg/l、500mg/l和1000mg/l三个浓度的吲哚丁酸+吲哚乙酸，吲哚丁酸+α-萘乙酸钠，吲哚丁酸钾+α-萘乙酸钠三种混合溶液中快速蘸取后在沙壤土、泥炭土+细沙和珍珠岩三种基质中进行扦插。插条下部至少保证一个节在土壤中。扦插后浇水，并保持土壤湿润。
试验设计
选取黄花草木樨植株中下部粗细均匀的健壮茎杆(用枝剪剪成10-15cm的茎段，每段3-4节)为繁殖体。扦插行株距5cm×10cm，扦插深度为3-4cm(插入至少1个枝节)。与3月20日扦插，开沟后按株距放种茎，种茎斜插，与地面成40-50°。试验采用双因素随机区组设计。试验用植物生长调节剂为萘乙酸钠、吲哚乙酸、吲哚丁酸、吲哚丁酸钾。该试验确定为清水对照、吲哚丁酸+吲哚乙酸，吲哚丁酸+α-萘乙酸钠，吲哚丁酸钾+α-萘乙酸钠4种处理，激素浸种液采用250、500、1000mg/l3种不同浓度梯度。该试验方案选择高浓度速蘸(15s)的方式进行。每个处理重复3次，每次处理50根插条。混合液的配比采用的是同量配比的原则，将吲哚丁酸、吲哚丁酸钾、吲哚乙酸、α-萘乙酸钠各取0.5g分别溶于10ml的75％乙醇溶液中，获得浸种母液，取所需的两种母液等体积混合后(20ml)倒入3980ml、1980ml、980ml清水中，搅拌均匀，获得浓度为250、500、1000mg/l的浸种液。扦插基质设3种，分别为沙壤土、泥炭土+细沙(1:1混匀)、珍珠岩。
扦插后，需用消毒液进行喷洒消毒，以免生根过程中发生病害，7d后用500倍液多菌灵喷雾消毒，14d后用800倍液百菌清消毒，依次交替。40d后进行取样测定
不同基质中插条生根率、生根数及根长差异性见表1。
表1、不同基质中插条生根率、生根数及根长
不同基质中插条生根率、生根数及根长差异性比较结果见表2。
表2、不同基质中插条生根率、生根数及根长差异性比较
注：aa、aba、ba均为统计学常用表示方法，同列不同小写字母表示差异显著，不同大写字母表示差异极显著。结果分析
不同扦插基质对扦插茎条生根的影响
结果表明，扦插在不同基质上的插条，其生根率、根数、根长有差异。其中，沙壤土、泥炭土+细沙中扦插的插条生根率间无显著差异，但于扦插在珍珠岩中的插条生根率比较，差异显著，但各处理间插条发根数量及根长无显著差异。当扦插于沙壤土中，种茎生根率可达95％，同时清水处理的种茎扦插在沙壤土中，生根率也达到49％，同时，插条的发根数量也可达到39条，根长也可达到22.5cm。泥炭土+细沙这种处理，其种茎生根率达到90％，同时清水处理的种茎在这种基质上的生根率也有45％，同时，插条的发根数量最高也有36条，根长最长有18.5cm。珍珠岩基质对插条的生根促进较差，生根率最高为82％，同时清水处理的插条在这种基质上的生根率为40％，插条的发根数量最高有33条，但清水处理的插条在这种基质上的发根数量仅为5条，根长最长为16.2cm。因此，采用沙壤土作为黄花草木樨的扦插基质，能够显著提高插条的成活率，更好的促进插条根的生成和根的生长。
试验结果表明：黄花草木樨种茎快速蘸取浸种溶液在3种基质中扦插后，在沙壤土中生根率最高可达95％，而对照组仅为49％，而在珍珠岩中扦插生根率最高可达77％，而对照组仅为40％。
不同浓度浸种溶液对扦插茎条生根的影响见表3，重复1、重复2、重复3实际为实验条件相同的三组平行实验，等同于重复1为组1，重复2为组2，重复3为组3。
表3、不同浓度浸种溶液对扦插茎条生根率、生根数及根长差异性比较
结果表明，快速蘸取不同浓度浸种溶液后扦插，其生根率、根数、根长有差异。就生根率进行双因素方差分析，数据间差异极显著。不同浸种溶液间差异极显著，其中吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液生根率最高，生根效果最好，并且与另外两种溶液间差异极显著，其次为吲哚丁酸+α-萘乙酸钠混合溶液，与吲哚丁酸钾+α-萘乙酸钠混合溶液间差异极显著。不同浓度间差异也极显著，当浓度为500mg/l时，插条生根率最高，生根效果最好，与250mg/l和1000mg/l两个浓度间差异极显著，而250mg/l和1000mg/l两个浓度间差异不显著。就生根率而言，选择500mg/l的吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液的浸种液生根率最高，达到95％。而对插条生根数和根长进行双因素方差分析，数据间差异也极显著。其中，吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液生根数最多，生根效果最好，与吲哚丁酸+α-萘乙酸钠混合溶液间差异不显著，与吲哚丁酸钾+α-萘乙酸钠混合溶液间差异极显著。吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液溶液根长最长，生根效果最好，与吲哚丁酸+α-萘乙酸钠混合溶液间差异不显著，与吲哚丁酸钾+α-萘乙酸钠混合溶液间差异极显著。因此，选择500mg/l的吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液作为黄花草木樨的快速蘸取溶液，能够显著提高插条的成活率，更好的促进插条根的生成和根的生长。
试验结果表明：黄花草木樨种茎快速蘸取不同浓度的3种浸种溶液扦插后，在500mg/l的吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液中生根率最高可达95％，而对照组仅为49％。
通过对黄花草木樨茎条的成活率、生根数及根长的测定，结果表明：黄花草木樨种茎快速蘸取浸种溶液在3种基质中扦插后，在沙壤土中生根率最高可达95％。黄花草木樨种茎快速蘸取不同浓度的3种浸种溶液扦插后，在500mg/l的吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液中表现出成活率高、生根率高、茎条发根能力强等特点。可以初步得出结论：快速蘸取500mg/l的吲哚丁酸+吲哚乙酸混合溶液后扦插在沙壤土中是黄花草木樨理想的无性繁殖方法。采用该扦插方法可有效提高黄花草木樨茎条成活率。