本发明涉及植物栽培技术领域，涉及一种美人蕉离体培养的方法。
背景技术：
美人蕉(cannaindica)，别名兰蕉、昙华，为美人蕉科、美人蕉属植物，多年生球根草本花卉，原产于美洲热带和非洲等地。美人蕉株高可达100～180cm，丛生，叶片大、叶片颜色丰富，花大，花色艳丽、颜色多样，花期长，是一种非常优良的园林绿化、景观美化植物。美人蕉叶片可吸收二氧化硫、氯化氢等有害物质，叶片虽易受害，但可重新长出新叶，很快恢复生长，也因此可作为监视有害气体污染指示植物，具有净化空气、保护环境作用。另外，美人蕉还可以用作药物治疗疮疡肿毒、子宫出血、白带、急性黄胆等疾病。现在已有一些城市将美人蕉作为主要绿化植物进行种植，但是由于传统繁殖方式种苗生产速度慢，严重限制了美人蕉大规模的应用。目前，美人蕉的繁殖主要通过种子及块茎分株繁殖方式进行。但是目前市场需求大的品种基本上结实率很低、甚至不结实，种子数量有限，而通过块茎分株方式繁殖受到材料本身状态、生产季节及土地的限制，每年产量远远满足不了市场的需求。同时，由于美人蕉长期繁殖材料长期处地下，容易受到各种病毒的感染，由于美人蕉多采用无性繁殖，一旦感染便很难通过化学药物根除。为了形成美人蕉规模化生产，探索出一种适合美人蕉组织快繁的方法是很有必要的。
技术实现要素：
本发明是为了克服现有技术的不足，提供一种生长效果好，扩繁快的美人蕉组培繁殖方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种美人蕉离体培养的方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取美人蕉地下带有芽的根茎作为外植体，将带芽的根茎基部切成带芽茎段，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得美人蕉初始芽，再将美人蕉初始芽转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根美人蕉；主要包括如下步骤：
（1）外植体处理：选取美人蕉地下带有芽的根茎作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，将带芽的根茎基部切成带芽茎段，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡30-40min，用清水洗净后用体积浓度0.15%hgcl2溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；
（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的美人蕉地下带有芽的根茎的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度500-1000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-22d，培养得到美人蕉初始芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的美人蕉初始芽转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度22-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；
（4）生根培养：将步骤（3）中分化出的芽长至1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-30d，得到生根美人蕉。
以上步骤（2）所述的诱导培养基的配方为：改良ls培养基+kt6.0-8.0mg/l+naa2.0-3.0mg/l+vc15mg/l+油菜素内酯20mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
以上步骤（3）所述的增殖培养基的配方为：改良ls培养基+kt3.0-5.0mg/l+naa1.5-2.0mg/l+zt0.1-0.5mg/l+甘氨酸10mg/l+油菜素内酯20mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上步骤（4）所述的生根培养基的配方为：改良ls培养基+kt1.5-2.0mg/l+naa0.5-1.0mg/l+vc10mg/l+vb220mg+甘氨酸10mg/l+聚乙烯吡咯烷酮30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的改良ls培养基的配方为：nh4no3880mg/l+kno3780mg/l+cacl2·2h2o300mg/l+mgso4.·7h2o350mg/l+kh2po4220mg/l+h3bo34.5mg/l+mnso4.·4h2o22.3mg/l+znso4·4h2o8.6mg/l+ki0.56mg/l+na2moo4·h2o0.25mg/l+cuso4.·5h2o0.025mg/l+cocl2·6h2o0.025mg/l+feso427.8mg/l+naedta37.0mg/l+肌醇75mg/l+烟酸0.5mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l+甘氨酸2mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l。
本发明具有的优点及有益效果如下：
1、本发明以美人蕉地下带有芽的根茎作为外植体，避免了分化诱导产生的后代变异情况，经过诱导培养基培养，美人蕉初始芽诱导率100%；经过4-5个周期增殖培养后接入生根培养基中培养，生根率达到100%。
2、本发明对ls基本培养基进行了改良，同时还添加多种物质，迅速有效的抑制美人蕉组培芽的病变，同时促进芽生长并且粗壮，使得培养基的营养更加全面，更有效的促使美人蕉芽诱导的发生、增殖和生根，实现大量增殖。
3、本发明通过对美人蕉进行诱导、增殖、生根，快速获得美人蕉组培苗，建立了良好的组培快繁体系，生根快，缩短了美人蕉组培时间，成本低，同时提高了美人蕉生根率和成活率，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：
选取美人蕉地下带有芽的根茎作为外植体，将带芽的根茎基部切成带芽茎段，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡30min，用清水洗净后用体积浓度0.15%hgcl2溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用。
将处理后的美人蕉地下带有芽的根茎的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度500lx，培养温度22-25℃，培养时间20-22d，培养得到美人蕉初始芽，初始芽诱导率达99%；其中，所述的诱导培养基的配方为：改良ls培养基+kt3.0mg/l+naa2.0mg/l+vc15mg/l+油菜素内酯20mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
将得到的美人蕉初始芽转接到增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度3000lx，培养温度22-25℃，培养时间20-25d，分化出芽；其中，所述的增殖培养基的配方为：改良ls培养基+kt3.0mg/l+naa1.5mg/l+zt0.1mg/l+甘氨酸10mg/l+油菜素内酯20mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
将增殖分化出的芽长至1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500lx，培养温度22-25℃，培养时间20-30d，得到生根美人蕉，生根率达到100%；其中，所述的生根培养基的配方为：改良ls培养基+kt1.5mg/l+naa0.5mg/l+vc10mg/l+vb220mg+甘氨酸10mg/l+聚乙烯吡咯烷酮30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的改良ls培养基的配方为：nh4no3880mg/l+kno3780mg/l+cacl2·2h2o300mg/l+mgso4.·7h2o350mg/l+kh2po4220mg/l+h3bo34.5mg/l+mnso4.·4h2o22.3mg/l+znso4·4h2o8.6mg/l+ki0.56mg/l+na2moo4·h2o0.25mg/l+cuso4.·5h2o0.025mg/l+cocl2·6h2o0.025mg/l+feso427.8mg/l+naedta37.0mg/l+肌醇75mg/l+烟酸0.5mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l+甘氨酸2mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l。
实施例2：
选取美人蕉地下带有芽的根茎作为外植体，将带芽的根茎基部切成带芽茎段，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡35min，用清水洗净后用体积浓度0.15%hgcl2溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用。
将处理后的美人蕉地下带有芽的根茎的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度1000lx，培养温度25-26℃，培养时间20-22d，培养得到美人蕉初始芽，初始芽诱导率达99%；其中，所述的诱导培养基的配方为：改良ls培养基+kt3.5mg/l+naa2.5mg/l+vc15mg/l+油菜素内酯20mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
将得到的美人蕉初始芽转接到增殖培养基中，光照时间11h/d，光照强度3000lx，培养温度25-26℃，培养时间20-25d，分化出芽；其中，所述的增殖培养基的配方为：改良ls培养基+kt3.5mg/l+naa1.8mg/l+zt0.4mg/l+甘氨酸10mg/l+油菜素内酯20mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
将增殖分化出的芽长至1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度200lx，培养温度25-26℃，培养时间20-30d，得到生根美人蕉，生根率达到100%；其中，所述的生根培养基的配方为：改良ls培养基+kt1.8mg/l+naa0.8mg/l+vc10mg/l+vb220mg+甘氨酸10mg/l+聚乙烯吡咯烷酮30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的改良ls培养基的配方为：nh4no3880mg/l+kno3780mg/l+cacl2·2h2o300mg/l+mgso4.·7h2o350mg/l+kh2po4220mg/l+h3bo34.5mg/l+mnso4.·4h2o22.3mg/l+znso4·4h2o8.6mg/l+ki0.56mg/l+na2moo4·h2o0.25mg/l+cuso4.·5h2o0.025mg/l+cocl2·6h2o0.025mg/l+feso427.8mg/l+naedta37.0mg/l+肌醇75mg/l+烟酸0.5mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l+甘氨酸2mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l。
实施例3：
选取美人蕉地下带有芽的根茎作为外植体，将带芽的根茎基部切成带芽茎段，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡40min，用清水洗净后用体积浓度0.15%hgcl2溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用。
将处理后的美人蕉地下带有芽的根茎的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度1000lx，培养温度26-28℃，培养时间20-22d，培养得到美人蕉初始芽，初始芽诱导率达99%；其中，所述的诱导培养基的配方为：改良ls培养基+kt4.0mg/l+naa3.0mg/l+vc15mg/l+油菜素内酯20mg/l+vb215mg/+琼脂粉3.6g/l+蔗糖20g/l。
将得到的美人蕉初始芽转接到增殖培养基中，光照时间12h/d，光照强度3500lx，培养温度26-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；其中，所述的增殖培养基的配方为：改良ls培养基+kt5.0mg/l+naa2.0mg/l+zt0.5mg/l+甘氨酸10mg/l+油菜素内酯20mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
将增殖分化出的芽长至1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度2000lx，培养温度26-28℃，培养时间20-30d，得到生根美人蕉，生根率达到100%；其中，所述的生根培养基的配方为：改良ls培养基+kt2.0mg/l+naa1.0mg/l+vc10mg/l+vb220mg+甘氨酸10mg/l+聚乙烯吡咯烷酮30mg/l+琼脂粉3.6g/l+蔗糖30g/l。
以上所述的改良ls培养基的配方为：nh4no3880mg/l+kno3780mg/l+cacl2·2h2o300mg/l+mgso4.·7h2o350mg/l+kh2po4220mg/l+h3bo34.5mg/l+mnso4.·4h2o22.3mg/l+znso4·4h2o8.6mg/l+ki0.56mg/l+na2moo4·h2o0.25mg/l+cuso4.·5h2o0.025mg/l+cocl2·6h2o0.025mg/l+feso427.8mg/l+naedta37.0mg/l+肌醇75mg/l+烟酸0.5mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l+甘氨酸2mg/l+盐酸吡哆醇0.5mg/l。