本发明属于五小叶槭培养
技术领域：
，尤其涉及一种五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法。
背景技术：
：五小叶槭是中国四川特有种，生长于海拔2200-3000米的河谷地带。五小叶槭最早为洛克(j.f.rock)于1929年在木里发现，由德国的diels教授于1931年命名。落叶乔木，高达10米。树皮深褐色或灰褐色，常裂成不规则的薄片脱落。小枝圆柱形，无毛；当年生枝紫色，多年生枝紫褐色，有椭圆的皮孔。冬芽圆锥状，鳞片卵形，先端锐尖，紫色，复瓦状排列。掌状复叶，有小叶4-7，通常5；小叶纸质犷窄披针形，长5-9厘米，宽1.4-1.7厘米，先端锐尖，基部楔形或阔楔形，全缘；小叶柄长5-8毫米，淡黄色，无毛；上面深绿色，无毛，下面灰白色，略被白粉，主脉在上面显著，在下面凸起，侧脉17-19对、在两面均仅微显著；叶柄长67厘米，淡紫色，无毛。伞房花序，由着叶的小枝顶端生出，无毛；总花梗长1-1.5厘米；花淡绿色，杂性，雄花与两性花同株；萼片5，长圆卵形，长2.2-2.5毫米；花瓣5，长圆形或狭长圆形，长3.5-4毫米；雄蕊8，花丝无毛，长6毫米，花药黄色，卵圆形，在两性花中雄蕊较短；花盘位于雄蕊的外侧；子房被淡黄色疏柔毛，花柱无毛，柱头反卷。小坚果淡紫色，凸起，直径5毫米，略被疏柔毛；翅淡黄绿色，宽1厘米，连同小坚果长2.5-2.8厘米，张开近于锐角或钝角；果梗细瘦、长2-3厘米，无毛；总果梗长1.5-2厘米。花期4月，果期9月。由于五小叶槭野生体仅存在于中国四川省，数量稀少，因此，需要建立一种人工快速繁殖的培养方法来培育五小叶槭，以达到保护和商业化利用的目的。综上所述，现有技术存在的问题是：目前五小叶槭的人工繁殖技术只有种子繁殖，由于种子收集困难，萌发率低，繁殖速度慢。技术实现要素：针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法。本发明是这样实现的，通过枝条组培，达到短期快速繁殖的目的。一种五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法，所述五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法包括以下步骤：步骤一，采集3年生以下，嫩梢长度为4～6cm的五小叶槭带芽枝条为外植体材料；步骤二，带芽枝条剪去叶片，切割成带芽茎段，对带芽茎段进行消毒，其具体消毒过程为：75％酒精浸泡50s，用10％次氯酸钠浸泡30min；步骤三，带芽茎段置于培养基中培养，培养基ms+naa0.05mg/l+6-ba0.05mg/l+ga32.0mg/l+ac1.0g/l；步骤四，壮苗培养，培养基为ms+ga31.0mg/l+naa0.05mg/l+6-ba0.05mg/l+ac1.0g/l；步骤五，生根培养，培养基为white+iba1.2mg/l+6-ba1.0mg/l+ac1.0g/l；步骤六，生根培养后7～15d，将装有五小叶槭苗的组培罐移至室外遮阴棚或温室中进行闭罐炼苗15～20d，遮阴度为50％～70％；闭罐炼苗结束后，再打开组培罐盖，在自然光下进行开罐炼苗3～7d；炼苗结束后，用镊子将五小叶槭苗从组培罐中移出，洗净五小叶槭苗根部；步骤七，直接移栽，或使用0.1％～0.3％的高锰酸钾溶液或500倍多灵菌溶液清洗五小叶槭苗；步骤八，移栽后定期施肥，进行水肥管理，培育得到五小叶槭树苗。进一步，所述开罐炼苗包括：松开组培罐盖1～2d；部分开罐1～2d；完全开罐1～3d。进一步，所述五小叶槭苗的生长基质体积比为草炭：珍珠岩：蛭石＝2:1:1。本发明的另一目的在于提供一种利用所述五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法的五小叶槭。本发明的优点及积极效果为：1、本发明采用带芽枝条来繁育五小叶槭树苗，带芽枝条上具有较多带芽茎段，取材方便；对带芽枝条进行消毒后，即可进行诱导丛生芽的萌发，所需材料少，理论上不受现有五小叶槭数量少、种子少的限制，可使带芽茎段丛生芽和腋芽的萌发量和萌发效率在短时间内达到最大值。2、本发明根据诱导带芽茎段腋芽萌发所用的培养基组分及配比，在带芽茎段具有最大萌发效率和萌发量的前提下，采用相同的培养基进行增殖培养，可在保证具有最大增殖效率的前提下，促使带芽茎段在增殖培养过程中继续萌发丛生芽和腋芽，提升五小叶槭苗的成活率和得率。另外，诱导萌发丛生芽和腋芽过程所用培养基和增殖培养基组分相同，无需向增殖培养基中添加新成分，大大降低了培养基的配比成本(30-40％)。3、本发明通过增殖培养基培养后，得到五小叶槭苗；选用壮苗培养基组分时，以增殖培养基的组分为参考，调整其中各组分配比，以使壮苗效果达到最大化。另外，壮苗培养基和增殖培养基组分相同，仅组分配比不同，无需向壮苗培养基中添加新成分，大大降低了培养基的配比成本(30-40％)。4、采用本发明进行炼苗，可使五小叶槭苗的炼苗成活率达到80％以上。本发明以带芽茎段为外植体，建立了一套完整的五小叶槭组培快速繁殖技术体系，有效解决了带芽茎段在消毒、增殖、生根、炼苗过程中存在的技术问题，可在短期内培育大量的五小叶槭苗，并且，炼苗技术成熟，成活率可达80％以上。附图说明图1是本发明实施例提供的五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法流程图。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。本发明采用五小叶槭带芽枝条为外植体进行培养，无需经过破休眠处理，在繁育前期生长快，大大缩短了繁育时间，可在短期内培育得到大量的五小叶槭树苗，且成活率可达到80％以上。下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。如图1所示，本发明实施例提供的五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法包括以下步骤：s101：采集3年生以下，嫩梢长度为4～6cm的五小叶槭带芽枝条为外植体材料；s102：带芽枝条剪去叶片，切割成带芽茎段，对带芽茎段进行消毒，其具体消毒过程为：75％酒精浸泡50s，然后再用10％次氯酸钠浸泡30min；s103：带芽茎段置于培养基中培养，培养基ms+naa0.05mg/l+6-ba0.05mg/l+ga32.0mg/l+ac1.0g/l；s104：壮苗培养，培养基为ms+ga31.0mg/l+naa0.05mg/l+6-ba0.05mg/l+ac1.0g/l；s105：生根培养，培养基为white+iba1.2mg/l+6-ba1.0mg/l+ac1.0g/l；s106：生根培养后7～15d，将装有五小叶槭苗的组培罐移至室外遮阴棚或温室中进行闭罐炼苗15～20d，遮阴度为50％～70％；闭罐炼苗结束后，再打开组培罐盖，在自然光下进行开罐炼苗3～7d；炼苗结束后，用镊子将五小叶槭苗从组培罐中移出，洗净五小叶槭苗根部；s107：直接移栽，或使用0.1％～0.3％的高锰酸钾溶液或500倍多灵菌溶液清洗五小叶槭苗，再用清水清洗后，再分别移栽至4组消毒灭菌后的基质中，浇足定根水，每5天喷施一次营养液，并注意遮阴和通风换气，以50孔育苗盘为一区，3个重复，生长60d后统计成活率和平均株高；s108：移栽后定期施肥，并按常规方法进行水肥管理，培育得到五小叶槭树苗。下面结合具体实施例对本发明的应用原理作进一步的描述。实施例1：本发明实施例提供的五小叶槭枝条快速繁殖的培养方法包括以下步骤：(1)采集3年生以下，嫩梢长度为4～6cm的五小叶槭带芽枝条为外植体材料；(2)消毒灭菌带芽枝条消毒灭菌：将带芽枝条剪去叶片，切割成带芽茎段，对带芽茎段进行消毒，其具体消毒过程为：用75％乙醇消毒10～40s，然后采用无菌水冲洗2～5次，再用0.01％hgcl2溶液浸泡3～6min；用75％乙醇处理后和不同浓度(5％、10％和20％)次氯酸钠溶液处理不同时间(5、15、30min)，无菌水换洗8次，接种。记录种子污染率和存活率。吸干水分，消毒处理结果见表1；表1处理0.1％升汞消毒时间/min污染率/％发芽率/％1333.3245.0020350.000460.000表2处理处理方法污染率/％存活率/％170％乙醇50s，5％次氯酸钠5min1000270％乙醇50s，10％次氯酸钠5min50.122.1370％乙醇50s，20％次氯酸钠5min26.733.3470％乙醇50s，5％次氯酸钠15min90.26.8570％乙醇50s，10％次氯酸钠15min16.971670％乙醇50s，20％次氯酸钠15min11.158.7770％乙醇50s，5％次氯酸钠30min67.720870％乙醇50s，10％次氯酸钠30min3.692970％乙醇50s，20％次氯酸钠30min3.371.0由表2可知，带芽茎段成活率最高的为8号消毒处理过程，即75％酒精浸泡50s，然后再用10％次氯酸钠浸泡30min。(3)设立9组含有不同naa、6-ba、ga3和ac含量的ms培养基(见表3)，将经步骤(2)消毒处理后的带芽茎段分别置于9组培养基中培养，于24±1℃、2000lx下，光照10h/d，诱导带芽茎段腋芽的萌发，增殖培养，得到五小叶槭苗，其结果见下表；所述ms培养基中naa加入量为0.03～0.07mg/l、6-ba加入量为0.03～0.07mg/l、ga3加入量为0～2.0mg/l、ac加入量为0.5～1.5g/l；表3带芽茎段诱导腋芽萌发的结果5号培养基的萌发率为92％，远高于其余培养基的萌发率，因此，诱导带芽茎段腋芽萌发的最适培养基为5号培养基，其具体配比为：ms+naa0.05mg/l+6-ba0.05mg/l+ga32.0mg/l+ac1.0g/l。(4)壮苗培养用含有不同量的naa、6-ba和ga3的9组ms培养基，每组培养基中ac的加入量为1.0g/l，分别于24±1℃、2000lx下，光照10h/d，培育步骤(3)中的五小叶槭苗36天，统计平均苗高；表4壮苗培养结果壮苗培养的适宜培养基为ms+ga31.0mg/l+naa0.05mg/l+6-ba0.05mg/l+ac1.0g/l，在此培养基上培养的五小叶槭苗平均苗高可达2.22cm。(5)生根培养采用含有不同量的iba、6-ba和ac的white、wpm和1/4ms培养基，分别于24±1℃、2000lx下，光照10h/d，培养步骤(4)中生长状态良好的五小叶槭苗至生根，其结果表5；iba的加入量为1～1.5mg/l、6-ba的加入量为0～1.5mg/l、ac的加入量为0.5～1.5g/l1.2,1.0,1.0表5生根培养正交实验结果由表中的生根率可知，五小叶槭苗进行生根培养的最佳培养基为white+iba1.2mg/l+6-ba1.0mg/l+ac1.0g/l。(6)炼苗移栽炼苗过程包括闭罐炼苗和开罐炼苗，其具体过程如下：闭罐炼苗：生根培养后7～15d，将装有五小叶槭苗的组培罐移至室外遮阴棚或温室中进行闭罐炼苗15～20d，遮阴度为50％～70％；开罐炼苗：闭罐炼苗结束后，再打开组培罐盖，在自然光下进行开罐炼苗3～7d，开罐炼苗分为三个阶段，首先松开组培罐盖1～2d，然后部分开罐1～2d，最后完全开罐1～3d；在开罐炼苗过程中，光照较强时应注意采取措施，避免五小叶槭苗被灼伤；炼苗结束后，用镊子将五小叶槭苗从组培罐中移出，洗净五小叶槭苗根部，避免根部残留的蔗糖和营养物质成为致病微生物生长的培养基，可有效防止五小叶槭苗移栽后烂根死亡；然后直接移栽，或使用0.1％～0.3％的高锰酸钾溶液或500倍多灵菌溶液清洗五小叶槭苗，再用清水清洗后，再分别移栽至4组消毒灭菌后的基质中，浇足定根水，每5天喷施一次营养液，并注意遮阴和通风换气，以50孔育苗盘为一区，3个重复，生长60d后统计成活率和平均株高；基质各组分体积比如下：(1)珍珠岩+蛭石(1:1)；(2)腐殖质土；(3)泥炭+珍珠岩(1:1)；(4)草炭+珍珠岩+蛭石(2:1:1)基质消毒灭菌过程为：(1)于120℃将基质置于烘箱中烘烤20min，或在0.1mpa的灭菌锅中，保压20～30min；(2)用5％的福尔马林或0.3％硫酸铜溶液淋透基质，然后覆盖塑料布，7d后揭开，并翻动基质，使气味挥发。根据统计结果可得五小叶槭苗的最佳生长基质为草炭+珍珠岩+蛭石(2:1:1)。(7)移栽后的管理移栽后需定期施肥，并按常规方法进行水肥管理，培育得到五小叶槭树苗。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12