一种白芨组培培养基的制作方法

文档序号:15833986发布日期:2018-11-07 07:38阅读:499来源:国知局
本发明涉及植物栽培
技术领域
,具体涉及一种白芨组培培养基。
背景技术
白芨,又名白及、紫蕙,为兰科白及属多年生草本植物,广泛分布于我国长江流域各省,主产于贵州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陕西等地,具有广泛的药用价值及园林价值。白芨是我国重要的中药材之一,以块茎入药,能收敛止血、消肿生肌,广泛应用于治疗肺结核及支气管扩张咳血、胃溃疡出血等症。白芨的花有紫红、白、蓝、黄和粉等色,可盆栽室内观赏,亦可点缀与较为荫蔽的花台、花镜或庭院的一角。白芨的块茎含有丰富的白芨多糖,其主要成分是葡萄甘露聚糖,目前这种物质被广泛应用于食品工业、医学卫生材料和日化工业中。长期以来,白芨市场主要依靠野生资源,随着需求量的增加以及价格的高涨,导致野生资源日渐枯竭。因此,解决白芨种苗快速繁殖技术是缓解市场供需矛盾的关键。目前,白芨组织培养的相关技术已经较为成熟,但使用传统培养基存在培养周期较长,培育过程易产生变异苗、球茎弱小、移栽成活率低等问题。因此,需要提供一种白芨组培培养基以满足使用需求。技术实现要素:为了解决上述背景中提到的问题,本发明目的在于提供一种白芨组培培养基。为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种白芨组培培养基,按浓度计包括:1/2浓度n6培养基大量元素、ms培养基有机物、ms培养基微量元素、植物生长素0.2~1.8mg/l、海藻提取物3.6~8.2mg/l、土豆汁25~40g/l、葡萄渣12~20g/l、蔗糖20~35g/l、琼脂粉8~20g/l,溶剂为水。作为本发明进一步的方案:所述白芨组培培养基,n6培养基大量元素的配方为:硝酸钾2600~2700mg/l、硫酸铵465~480mg/l、二水合氯化钙155~170mg/l、七水合硫酸镁170~210mg/l、磷酸二氢钾420~470mg/l,溶剂为水。作为本发明进一步的方案:所述白芨组培培养基,ms培养基有机物的配方为:胆碱20~32mg/l、烟酸0.5~1.3mg/l、盐酸吡哆醇0.9~1.7mg/l、盐酸硫胺素0.2~0.8mg/l、甘氨酸3~6mg/l,溶剂为水。作为本发明进一步的方案:所述白芨组培培养基,ms培养基微量元素的配方为:碘化钾1.02~1.36mg/l、硼酸4.9~6.2mg/l、四水硫酸锰21.2~23.8mg/l、七水硫酸锌7.9~9.3mg/l、钼酸钠0.18~0.27mg/l、五水硫酸铜0.01~0.03mg/l、氯化钴0.02~0.06mg/l、硫酸亚铁26.2~29.9mg/l、乙二胺四乙酸二钠26.5~33.1mg/l,溶剂为水。作为本发明进一步的方案:所述白芨组培培养基,植物生长素由天然芸苔素内酯、赤霉素、胺鲜酯按照重量比为1~4:3~6:4~11配置而成。作为本发明进一步的方案:所述白芨组培培养基,海藻提取物的制备方法包括以下步骤:将海藻研磨粉碎,加入蒸馏水,加热至80℃后停止加热,搅拌,缓慢加入a-淀粉,搅拌10min,冷却至室温,过滤,取滤渣,即得海藻提取物。本发明的白芨组培培养基,使用n6培养基的大量元素配以ms培养基的有机物和微量元素,使其更适宜白芨的组培;此外,使用了胆碱替代ms培养基有机物中的肌醇,胆碱是强有机碱,是卵磷脂的组成成分,是构成生物膜的重要组成成分,可以抑制细胞凋亡,促进转甲基代谢。添加了由天然芸苔素内酯、赤霉素、胺鲜酯配置的植物生长素,提高了白芨过氧化物酶和硝酸还原酶的活性,提高了叶绿素的含量,加快了光合速度,促进细胞分裂和伸长,促进根系发育,调节体内养分的平衡,缩短了培养周期。添加了海藻提取物富含维生素、矿物质、氨基酸及脂肪酸,能有效填补培养基营养物质的欠缺;此外,海藻含有不饱和脂肪酸、多肽,能起到抗氧化及杀菌作用。使用本发明的白芨组培培养基培育出的白芨苗根健壮,球茎大,变异现象少,移栽成活率高,生长快。具体实施方式下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。实施例1本发明实施例中,一种白芨组培培养基,按浓度计包括:1/2浓度n6培养基大量元素、ms培养基有机物、ms培养基微量元素、植物生长素0.6mg/l、海藻提取物6.6mg/l、土豆汁30g/l、葡萄渣18g/l、蔗糖25g/l、琼脂粉15g/l,溶剂为水。白芨组培培养基,n6培养基大量元素的配方为:硝酸钾2600mg/l、硫酸铵465mg/l、二水合氯化钙155mg/l、七水合硫酸镁170mg/l、磷酸二氢钾420mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基有机物的配方为:胆碱24mg/l、烟酸0.7mg/l、盐酸吡哆醇1.3mg/l、盐酸硫胺素0.4mg/l、甘氨酸4mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基微量元素的配方为:碘化钾1.16mg/l、硼酸5.2mg/l、四水硫酸锰21.8mg/l、七水硫酸锌8.3mg/l、钼酸钠0.23mg/l、五水硫酸铜0.02mg/l、氯化钴0.05mg/l、硫酸亚铁28.3mg/l、乙二胺四乙酸二钠31.5mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,植物生长素由天然芸苔素内酯、赤霉素、胺鲜酯按照重量比为1:3:6配置而成。白芨组培培养基,海藻提取物的制备方法包括以下步骤:将海藻研磨粉碎,加入蒸馏水,加热至80℃后停止加热,搅拌,缓慢加入a-淀粉,搅拌10min,冷却至室温,过滤,取滤渣,即得海藻提取物。实施例2本发明实施例中,一种白芨组培培养基,按浓度计包括:1/2浓度n6培养基大量元素、ms培养基有机物、ms培养基微量元素、植物生长素0.8mg/l、海藻提取物7.5mg/l、土豆汁40g/l、葡萄渣20g/l、蔗糖25g/l、琼脂粉13g/l,溶剂为水。白芨组培培养基,n6培养基大量元素的配方为:硝酸钾2700mg/l、硫酸铵480mg/l、二水合氯化钙170mg/l、七水合硫酸镁210mg/l、磷酸二氢钾450mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基有机物的配方为:胆碱26mg/l、烟酸1.3mg/l、盐酸吡哆醇1.6mg/l、盐酸硫胺素0.5mg/l、甘氨酸6mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基微量元素的配方为:碘化钾1.22mg/l、硼酸5.8mg/l、四水硫酸锰22.3mg/l、七水硫酸锌8.5mg/l、钼酸钠0.21mg/l、五水硫酸铜0.01mg/l、氯化钴0.06mg/l、硫酸亚铁27.7mg/l、乙二胺四乙酸二钠28.7mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,植物生长素由天然芸苔素内酯、赤霉素、胺鲜酯按照重量比为2:5:5配置而成。白芨组培培养基,海藻提取物的制备方法包括以下步骤:将海藻研磨粉碎,加入蒸馏水,加热至80℃后停止加热,搅拌,缓慢加入a-淀粉,搅拌10min,冷却至室温,过滤,取滤渣,即得海藻提取物。实施例3本发明实施例中,一种白芨组培培养基,按浓度计包括:1/2浓度n6培养基大量元素、ms培养基有机物、ms培养基微量元素、植物生长素1.8mg/l、海藻提取物4.2mg/l、土豆汁30g/l、葡萄渣18g/l、蔗糖30g/l、琼脂粉15g/l,溶剂为水。白芨组培培养基,n6培养基大量元素的配方为:硝酸钾2660mg/l、硫酸铵472mg/l、二水合氯化钙168mg/l、七水合硫酸镁185mg/l、磷酸二氢钾440mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基有机物的配方为:胆碱30mg/l、烟酸1.1mg/l、盐酸吡哆醇1.4mg/l、盐酸硫胺素0.5mg/l、甘氨酸3mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基微量元素的配方为:碘化钾1.09mg/l、硼酸6.1mg/l、四水硫酸锰22.5mg/l、七水硫酸锌9.2mg/l、钼酸钠0.22mg/l、五水硫酸铜0.03mg/l、氯化钴0.06mg/l、硫酸亚铁29.2mg/l、乙二胺四乙酸二钠28.1mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,植物生长素由天然芸苔素内酯、赤霉素、胺鲜酯按照重量比为1:1:2配置而成。白芨组培培养基,海藻提取物的制备方法包括以下步骤:将海藻研磨粉碎,加入蒸馏水,加热至80℃后停止加热,搅拌,缓慢加入a-淀粉,搅拌10min,冷却至室温,过滤,取滤渣,即得海藻提取物。实施例4本发明实施例中,一种白芨组培培养基,按浓度计包括:1/2浓度n6培养基大量元素、ms培养基有机物、ms培养基微量元素、植物生长素0.3mg/l、海藻提取物3.6mg/l、土豆汁28g/l、葡萄渣15g/l、蔗糖24g/l、琼脂粉10g/l,溶剂为水。白芨组培培养基,n6培养基大量元素的配方为:硝酸钾2630mg/l、硫酸铵480mg/l、二水合氯化钙170mg/l、七水合硫酸镁200mg/l、磷酸二氢钾450mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基有机物的配方为:胆碱22mg/l、烟酸1.1mg/l、盐酸吡哆醇1.4mg/l、盐酸硫胺素0.8mg/l、甘氨酸5mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基微量元素的配方为:碘化钾1.27mg/l、硼酸5.2mg/l、四水硫酸锰23.5mg/l、七水硫酸锌8.3mg/l、钼酸钠0.18mg/l、五水硫酸铜0.01mg/l、氯化钴0.04mg/l、硫酸亚铁26.9mg/l、乙二胺四乙酸二钠26.7mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,植物生长素由天然芸苔素内酯、赤霉素、胺鲜酯按照重量比为3:3:10配置而成。白芨组培培养基,海藻提取物的制备方法包括以下步骤:将海藻研磨粉碎,加入蒸馏水,加热至80℃后停止加热,搅拌,缓慢加入a-淀粉,搅拌10min,冷却至室温,过滤,取滤渣,即得海藻提取物。实施例5本发明实施例中,一种白芨组培培养基,按浓度计包括:1/2浓度n6培养基大量元素、ms培养基有机物、ms培养基微量元素、植物生长素1.4mg/l、海藻提取物7.7mg/l、土豆汁25g/l、葡萄渣15g/l、蔗糖30g/l、琼脂粉15g/l,溶剂为水。白芨组培培养基,n6培养基大量元素的配方为:硝酸钾2680mg/l、硫酸铵470mg/l、二水合氯化钙162mg/l、七水合硫酸镁190mg/l、磷酸二氢钾451mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基有机物的配方为:胆碱27mg/l、烟酸0.9mg/l、盐酸吡哆醇1.2mg/l、盐酸硫胺素0.5mg/l、甘氨酸5mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,ms培养基微量元素的配方为:碘化钾1.21mg/l、硼酸5.5mg/l、四水硫酸锰21.9mg/l、七水硫酸锌8.8mg/l、钼酸钠0.25mg/l、五水硫酸铜0.03mg/l、氯化钴0.06mg/l、硫酸亚铁27.5mg/l、乙二胺四乙酸二钠30.8mg/l,溶剂为水。白芨组培培养基,植物生长素由天然芸苔素内酯、赤霉素、胺鲜酯按照重量比为2:5:8配置而成。白芨组培培养基,海藻提取物的制备方法包括以下步骤:将海藻研磨粉碎,加入蒸馏水,加热至80℃后停止加热,搅拌,缓慢加入a-淀粉,搅拌10min,冷却至室温,过滤,取滤渣,即得海藻提取物。选取健壮的野生白芨蒴果,进行灭菌处理后,将白芨蒴果置于无菌滤纸上吸干水分后从果实中部剥开,将种子平均分成6份,其中5份分别播种到按照实施例1~5配方配置的培养基中,另外一份播种到普通的n6培养基中,将接种好的培养基转入培养室中培养,培养条件为:温度23~27℃,光照:1500~20001x,光照时数:12h/d。培养90天后,观察白芨组培苗情况。表1白芨组培苗情况表组别种子萌发率生根率球茎直径(cm)叶长(cm)叶宽(cm)实施例195%93%0.92.90.7实施例295%97%0.62.40.5实施例397%92%0.72.70.6实施例499%94%0.82.60.6实施例596%96%0.91.90.8n6培养基88%82%0.31.20.3对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。当前第1页12
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