一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法与流程

本发明属于植株再生技术领域，主要涉及一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法。

背景技术：

用于离体再生的细胞分裂素类包括6-ba、kt、zt、tdz、cppu等，其中6-ba是应用历史最久的传统细胞分裂素，且对许多植物的离体再生都有很好的效果，应用广泛，其它种类的细胞分裂素则具有各自不同的特点，这些生长调节剂往往比传统的生长调节剂在诱导植物愈伤组织以及愈伤组织再生芽方面效率更高，对某些植物的离体再生有很好的效果。可适用于不同的植物，使外植体通过不同途径再生或者可诱导胚性愈伤组织等。

6-ba常常与生长素iba、naa、2,4-d配合使用，单独用6-ba也可诱导某些植物产生愈伤组织，或诱导愈伤组织分化不定芽。如黑麦草上的研究表明，一定浓度6-ba可提高黑麦草种子出愈率，且具有浓度效应，超过一定浓度后，出愈率降低。此外培养基中单独添加6-ba可有效促进魔芋原球茎愈伤组织分化。大多数植物则需6-ba与生长素的配合使用，如金银花愈伤组织不定芽诱导培养基为mb+2.0mg/l6-ba+0.1mg/liba。对高山红景天的研究表明，不同浓度6-ba与不同浓度naa配合可有效诱导出愈伤组织并使愈伤组织分化，具体效果因调节剂浓度不同而不同，可根据培养目的调整浓度。

cppu是一种人工合成的细胞分裂素类生长调节剂，别名为kt30，20世纪80年代由日本首先开发，之后引入中国，具有促进细胞分裂，促进果实肥大，增加产量的作用，因此市场上又叫膨大剂。其活性高，价格低，因此广泛地应用于植物组织培养。对苎麻再生的研究表明，cppu活性大大高于6-ba，1.0mg/lcppu可有效诱导叶片产生愈伤组织并再生不定芽，且cppu的添加可显著改变愈伤组织内源激素的含量，使其更加活跃。有利于不定芽的诱导。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是克服现有离体再生技术体系的不足，提供施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法，达到加快离体再生技术快速发展的目的。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

1、一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)分别以蓝果忍冬的无菌苗叶片，无芽茎段为外植体，将外植体进行消毒，用74％-76％的乙醇浸泡29-31s，用无菌水冲洗2-4次；

(2)再用0.05％-0.15％的hgcl2浸泡5-7min，无菌水冲洗4-7次，用无菌滤纸吸干表面水分；

(3)将外植体在ms培养基上培养，ms培养基分别添加6-ba(1.4-1.6mg/l)，iba(0.2-0.4mg/l)和kt(0.9-1.1mg/l)；

(4)将接种的外植体暗处理33-35天。

2、根据权利要求1所述的一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法，其特征在于，所述的乙醇浓度和浸泡时间优选参数为：浓度75％以及处理时间30s。

3、根据权利要求1所述的一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法，其特征在于，所述的无菌水冲洗外植体的次数优选参数：次数3次。

4、根据权利要求1所述的一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法，其特征在于，所述的hgcl2的浓度和浸泡时间优选参数：浓度0.1％以及时间6min。

5、根据权利要求1所述的一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法，其特征在于，所述的无菌水冲洗时间优选参数；次数6次。

6、根据权利要求1所述的一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法，其特征在于，所述的ms培养基的激素添加优选参数：ms+6-ba1.5mg/l+iba0.3mg/l+kt1.0mg/l

一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法属于组织培养相关技术，该方法包括以下步骤：分别以蓝果忍冬的无菌苗叶片，无芽茎段为外植体，将外植体进行消毒，用乙醇浸泡，用无菌水冲洗,再用hgcl2浸泡，无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干表面水分,将外植体在ms培养基上培养，ms培养基分别添加6-ba，iba和kt，最后将接种的外植体暗处理。通过本法发明建立的愈伤组织再生的方法，有利于节省资金，创造更大的经济价值，具有广泛的应用价值和发展前景。

附图说明

附图为本工艺技术路线图。

具体实施方式

实施例1：

(1)分别以蓝果忍冬的无菌苗叶片，无芽茎段为外植体，将外植体进行消毒，用74％-76％的乙醇浸泡29-31s，用无菌水冲洗2-4次；

(2)再用0.05％-0.15％的hgcl2浸泡5-7min，无菌水冲洗4-7次，用无菌滤纸吸干表面水分；

(3)将外植体在ms培养基上培养，ms培养基分别添加6-ba(1.4-1.6mg/l)，iba(0.2-0.4mg/l)和kt(0.9-1.1mg/l)；

(4)将接种的外植体暗处理33天。

实施例2：

(1)分别以蓝果忍冬的无菌苗叶片，无芽茎段为外植体，将外植体进行消毒，用74％-76％的乙醇浸泡29-31s，用无菌水冲洗2-4次；

(2)再用0.05％-0.15％的hgcl2浸泡5-7min，无菌水冲洗4-7次，用无菌滤纸吸干表面水分；

(3)将外植体在ms培养基上培养，ms培养基分别添加6-ba(1.4-1.6mg/l)，iba(0.2-0.4mg/l)和kt(0.9-1.1mg/l)；

(4)将接种的外植体暗处理34天。

实施例3：

(1)分别以蓝果忍冬的无菌苗叶片，无芽茎段为外植体，将外植体进行消毒，用74％-76％的乙醇浸泡29-31s，用无菌水冲洗2-4次；

(2)再用0.05％-0.15％的hgcl2浸泡5-7min，无菌水冲洗4-7次，用无菌滤纸吸干表面水分；

(3)将外植体在ms培养基上培养，ms培养基分别添加6-ba(1.4-1.6mg/l)，iba(0.2-0.4mg/l)和kt(0.9-1.1mg/l)；

(4)将接种的外植体暗处理35天。

技术特征：

技术总结
一种施加细胞分裂素和生长素促进蓝果忍冬愈伤组织再生的方法属于组织培养相关技术，该方法包括以下步骤：分别以蓝果忍冬的无菌苗叶片，无芽茎段为外植体，将外植体进行消毒，用乙醇浸泡，用无菌水冲洗,再用HgCl2浸泡，无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干表面水分,将外植体在MS培养基上培养，MS培养基分别添加6‑BA，IBA和KT，最后将接种的外植体暗处理。通过本法发明建立的愈伤组织再生的方法，有利于节省资金，创造更大的经济价值，具有广泛的应用价值和发展前景。

技术研发人员：霍俊伟;张妍;乔锦莉;秦栋
受保护的技术使用者：东北农业大学
技术研发日：2018.10.10
技术公布日：2019.01.08