一种茉莉花快速繁殖的方法与流程

文档序号:16879084发布日期:2019-02-15 21:50阅读:311来源:国知局
本发明属于茉莉繁殖领域,具体涉及一种茉莉花快速繁殖的方法。
背景技术
:茉莉花,别名:茉莉,拉丁文名:jasminumsambac(l.)ait,木犀科、素馨属直立或攀援灌木,高达3米。小枝圆柱形或稍压扁状,有时中空,疏被柔毛。叶对生,单叶,叶片纸质,圆形、椭圆形、卵状椭圆形或倒卵形,两端圆或钝,基部有时微心形,在上面稍凹入或凹起,下面凸起,细脉在两面常明显,微凸起,除下面脉腋间常具簇毛外,其余无毛;裂片长圆形至近圆形,先端圆或钝。果球形,呈紫黑色。花期5-8月,果期7-9月。茉莉的花极香,为著名的花茶原料及重要的香精原料;花、叶药用治目赤肿痛,并有止咳化痰之效。授权公告号为cn105230314b的中国发明专利,公开了一种茉莉的扦插繁殖方法,包括以下步骤:(1)插穗的准备;(2)插穗处理,将插穗上部浸没于200-1000mg/l的6-ba溶液中浸泡10~60s,将插穗下部浸没于200~1000mg/l的naa溶液或者iba溶液中浸泡处理10~60s;(3)扦插处理。该发明的茉莉扦插繁殖方法扦插所选取的插穗为茉莉移栽、换盆以及大田种苗更新等过程中修剪、截断或整形等产生的废弃根系,为茉莉扦插繁殖提供新途径,实现了资源的最大利用。该发明方法通过将插穗上部浸没于6-ba、下部浸没于naa溶液或者iba溶液中来达到促进插穗生根存活的目的,但是单独使用naa或者iba的效果不明显,而且iba易被光降解而失去促生根功效,因此该发明方法存在弊端。技术实现要素:本发明的目的在于提供一种茉莉花快速繁殖的方法,本发明方法操作简便、成本低廉,通过少量的茉莉种子即可获得大量的生根苗,效率较高,同时繁殖过程中吲哚丁酸不会被光降解,其生物学功效能得到较好的保存,最终获得的生根苗根条数多、根长度长,根系茂盛,成活率高。本发明为实现上述目的所采取的技术方案为:一种茉莉花快速繁殖的方法,包括:预处理、初步培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽,具体包括以下步骤:预处理:选取饱满、无虫害的茉莉种子,浸泡1~2h,剥除木质化种皮,然后以25~30%酒精冲洗1~2min,蒸馏水冲洗2~3遍,在超净工作台上以70~85%酒精浸泡15~30s,然后置于1g/lnaclo溶液中灭菌10~12min并不停搅拌,然后以无菌水冲洗5~6遍,取出后以无菌松树锯末催芽6~18h,剥取种胚冲洗后至于1~2℃冰箱中待用;茉莉种子经浸泡后较易剥除种皮,然后以较低浓度naclo溶液灭菌,不仅可有效灭杀茉莉种子附带的有害菌种,还不会对种胚造成损害,维持其生理学活性,保证其出芽率与成活率;同时无菌松树锯末中的松香溢出的苷类有助于活化种胚,进一步解除种子休眠,种子开始萌动,尽早进入萌发阶段,降低茉莉种子萌芽周期,加快繁殖育种;初步培养:初步培养基为ms培养基+2.5~2.8%蔗糖+0.5~0.7%琼脂+1.5~2%椰子汁,调节ph至6.2~6.5,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下接种种胚,培养温度为26~28℃、光照时间为12~14h、光照强度为2500~2800lux,培养25~28d后获得组培苗;初步培养步骤中,通过ms培养基配合蔗糖、琼脂、椰子汁来对茉莉种胚进行初步培养,可以获得较为优质的组培苗,茉莉种子的出苗率、幼苗健壮程度均较高,利于进行进一步的增殖培养与生根培养;增殖培养:增殖培养基为ms培养基+2.5~3%椰子汁+2.5~5mg/l吲哚乙酸,调节ph至6.3~6.5,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下选取优良、健壮的组培苗的茎段每2~3个节剪成一段,插入增殖培养基中诱导增殖,增殖培养温度为23~26℃、光照时间为10~12h、光照强度为2200~2500lux,培养25~28d后获得丛生芽;通过增殖培养,可以将茉莉种子经初步培养获得的少量组培苗获得较多苗系的丛生芽,大大提高茉莉花的繁殖速度与繁殖效率,降低繁殖成本;增殖培养基中的吲哚乙酸能能够作用于细胞,可刺激形成层细胞分裂与生长,促进木质部、韧皮部细胞分化,促进逾伤组织的形态建成,诱导腋芽和不定芽的产生,极大地提升丛生芽中幼芽的数量与质量,为进一步地分化生根培养做准备;生根培养:生根培养基为b5培养基+20~30mg/l酵母提取物+1.5~2.0mg/l吲哚丁酸+0.3~0.5mg/l(-)-8-苯基薄荷醇+2.5~3.0g/l丙醇+2.5~4.0mg/l萘乙酸钠,调节ph至6.5~6.8,高压灭菌后培养基凝固;挑选健壮丛生芽,剪取1.5~2.5cm有芽的茎段,接种到生根培养基中,生根培养温度为23~28℃、光照时间为10~14h、光照强度为2500~3000lux,培养30~35d后获得生根苗;将丛生芽的芽段进行分化生根培养,可极大地提高最终生根苗的数量,并最终仅需少量的茉莉种子即可获得大量的生根苗,提高效率,降低了成本;生根培养基中的吲哚丁酸、萘乙酸钠可有效刺激芽段形成层细胞的分裂,促进木质部、韧皮部细胞的分化,刺激愈伤组织根细胞生长,促进发根;生根培养基中的吲哚丁酸的有效效用时段仅仅只有1~2d,在此之后,吲哚丁酸即被光降解为吲哚与丁酸从而失去其应有的促生根功效,而在生根培养基中加入微量的(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液之后,(-)-8-苯基薄荷醇在丙醇存在的条件下可以与吲哚丁酸生成氢键而避免了其被光降解,此外,(-)-8-苯基薄荷醇与吲哚丁酸二者之间还可发生络合反应生成(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物,该复合物可以进入茎段体内而成为吲哚丁酸的一种稳定保存形式,从而避免了吲哚丁酸在体外被光降解,该(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物在适当条件下可解离出吲哚丁酸而游离至木质部、韧皮部细胞处促进生根,显著提高生根率与根的健壮度;移栽:选取根长2.5~5cm的健壮生根苗,从组培室转移到室内,先拧松瓶盖炼苗5~7d,然后去除瓶盖,与室内放置3~5d,取出生根苗,洗净根部培养基后温室移栽至茉莉基质中,完成茉莉花的快速繁殖;将健壮生根苗经炼苗后移栽至茉莉基质中,可以使生根苗较快地适应外界环境,有助于提高茉莉生根苗的抗病抗虫害能力,自身免疫力得到有效增强,本发明方法最终所得的生根苗根条数多、根长度长,根系茂盛,成活率高,是一种高效率、低成本的茉莉花快速繁殖方法。作为优选,无菌松树锯末催芽时,将2~5年生松树锯末高温灭菌,每1kg松树锯末施入55~60g聚乙二醇渗透液,将茉莉种子均匀拌入锯末中,保持40~45℃催芽;以含有聚乙二醇渗透液处理的松树锯末对茉莉种子进行催芽,使种子处于合适的温度,又能控制不让茉莉种子发芽,等到播种后茉莉种子发芽更整齐、更迅速。作为对本发明的进一步优选,聚乙二醇渗透液为含量为1.2~1.5g/l的聚乙二醇水溶液,聚乙二醇的分子量为4000~7000,聚乙二醇渗透液中还含有3.6~4.6mg/l的2-氟苯甲酸;聚乙二醇渗透液中的2-氟苯甲酸可以自由进入种子胚乳细胞内部,并可促进细胞对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分泌,从而可以高效率的提高6-磷酸葡萄糖脱氢生成6-磷酸葡糖酸内酯,大大提高己糖磷酸旁路反应的进行,促使种子内代谢途径由emp/tca转向ppp,种子休眠开始解除,种子开始萌动,提高茉莉种子的发芽率与芽种质量,降低坏芽比例,提升幼芽活力与免疫能力,提高繁殖效率与速度。作为优选,生根培养基的配置方法为:首先将当量的(-)-8-苯基薄荷醇、吲哚丁酸完全溶解到丙醇中,然后依次将酵母提取物、(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液、萘乙酸钠加入到b5培养基中;生根培养基中的吲哚丁酸的有效效用时段仅仅只有1~2d,在此之后,吲哚丁酸即被光降解为吲哚与丁酸从而失去其应有的促生根功效,而在生根培养基中加入微量的(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液之后,(-)-8-苯基薄荷醇在丙醇存在的条件下可以与吲哚丁酸生成氢键而避免了其被光降解,此外,(-)-8-苯基薄荷醇与吲哚丁酸二者之间还可发生络合反应生成(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物,该复合物可以进入茎段体内而成为吲哚丁酸的一种稳定保存形式,从而避免了吲哚丁酸在体外被光降解,该(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物在适当条件下可解离出吲哚丁酸而游离至木质部、韧皮部细胞处促进生根,显著提高生根率与根的健壮度。本发明的有益效果为:1)以较低浓度naclo溶液对茉莉种子进行灭菌,不仅可有效灭杀茉莉种子附带的有害菌种,还不会对种胚造成损害,维持其生理学活性,保证其出芽率与成活率;2)增殖培养可以将茉莉种子经初步培养获得的少量组培苗获得较多苗系的丛生芽,大大提高茉莉花的繁殖速度与繁殖效率,降低繁殖成本;3)聚乙二醇渗透液中的2-氟苯甲酸可以自由进入种子胚乳细胞内部,并可促进细胞对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分泌,从而可以高效率的提高6-磷酸葡萄糖脱氢生成6-磷酸葡糖酸内酯,大大提高己糖磷酸旁路反应的进行,促使种子内代谢途径由emp/tca转向ppp,种子休眠开始解除,种子开始萌动,提高茉莉种子的发芽率与芽种质量,降低坏芽比例,提升幼芽活力与免疫能力,提高繁殖效率与速度;4)(-)-8-苯基薄荷醇在丙醇存在的条件下可以与吲哚丁酸生成氢键而避免了其被光降解;此外,(-)-8-苯基薄荷醇与吲哚丁酸二者之间还可发生络合反应生成(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物,该复合物可以进入茎段体内而成为吲哚丁酸的一种稳定保存形式,从而避免了吲哚丁酸在体外被光降解;5)本发明方法最终所得的生根苗根条数多、根长度长,根系茂盛,成活率高,是一种高效率、低成本的茉莉花快速繁殖方法。本发明采用了上述技术方案提供一种茉莉花快速繁殖的方法,弥补了现有技术的不足,设计合理,操作方便。具体实施方式以下结合实施例对本发明作进一步详细描述:实施实施例1:一种茉莉花快速繁殖的方法,包括以下步骤:预处理:选取饱满、无虫害的茉莉种子,浸泡1h,剥除木质化种皮,然后以25%酒精冲洗1min,蒸馏水冲洗2遍,在超净工作台上以70%酒精浸泡15s,然后置于1g/lnaclo溶液中灭菌10min并不停搅拌,然后以无菌水冲洗5遍,取出后以无菌松树锯末催芽6h,剥取种胚冲洗后至于1℃冰箱中待用;茉莉种子经浸泡后较易剥除种皮,然后以较低浓度naclo溶液灭菌,不仅可有效灭杀茉莉种子附带的有害菌种,还不会对种胚造成损害,维持其生理学活性,保证其出芽率与成活率;同时无菌松树锯末中的松香溢出的苷类有助于活化种胚,进一步解除种子休眠,种子开始萌动,尽早进入萌发阶段,降低茉莉种子萌芽周期,加快繁殖育种;初步培养:初步培养基为ms培养基+2.5%蔗糖+0.5%琼脂+1.5%椰子汁,调节ph至6.2,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下接种种胚,培养温度为26℃、光照时间为12h、光照强度为2500lux,培养25d后获得组培苗;初步培养步骤中,通过ms培养基配合蔗糖、琼脂、椰子汁来对茉莉种胚进行初步培养,可以获得较为优质的组培苗,茉莉种子的出苗率、幼苗健壮程度均较高,利于进行进一步的增殖培养与生根培养;增殖培养:增殖培养基为ms培养基+2.5%椰子汁+2.5mg/l吲哚乙酸,调节ph至6.3,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下选取优良、健壮的组培苗的茎段每2个节剪成一段,插入增殖培养基中诱导增殖,增殖培养温度为23℃、光照时间为10h、光照强度为2200lux,培养25d后获得丛生芽;通过增殖培养,可以将茉莉种子经初步培养获得的少量组培苗获得较多苗系的丛生芽,大大提高茉莉花的繁殖速度与繁殖效率,降低繁殖成本;增殖培养基中的吲哚乙酸能能够作用于细胞,可刺激形成层细胞分裂与生长,促进木质部、韧皮部细胞分化,促进逾伤组织的形态建成,诱导腋芽和不定芽的产生,极大地提升丛生芽中幼芽的数量与质量,为进一步地分化生根培养做准备;生根培养:生根培养基为b5培养基+20mg/l酵母提取物+1.5mg/l吲哚丁酸+0.3mg/l(-)-8-苯基薄荷醇+2.5g/l丙醇+2.5mg/l萘乙酸钠,调节ph至6.5,高压灭菌后培养基凝固;挑选健壮丛生芽,剪取1.5cm有芽的茎段,接种到生根培养基中,生根培养温度为23℃、光照时间为10h、光照强度为2500lux,培养30d后获得生根苗;将丛生芽的芽段进行分化生根培养,可极大地提高最终生根苗的数量,并最终仅需少量的茉莉种子即可获得大量的生根苗,提高效率,降低了成本;生根培养基中的吲哚丁酸、萘乙酸钠可有效刺激芽段形成层细胞的分裂,促进木质部、韧皮部细胞的分化,刺激愈伤组织根细胞生长,促进发根;生根培养基中的吲哚丁酸的有效效用时段仅仅只有1~2d,在此之后,吲哚丁酸即被光降解为吲哚与丁酸从而失去其应有的促生根功效,而在生根培养基中加入微量的(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液之后,(-)-8-苯基薄荷醇在丙醇存在的条件下可以与吲哚丁酸生成氢键而避免了其被光降解,此外,(-)-8-苯基薄荷醇与吲哚丁酸二者之间还可发生络合反应生成(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物,该复合物可以进入茎段体内而成为吲哚丁酸的一种稳定保存形式,从而避免了吲哚丁酸在体外被光降解,该(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物在适当条件下可解离出吲哚丁酸而游离至木质部、韧皮部细胞处促进生根,显著提高生根率与根的健壮度;移栽:选取根长2.5cm的健壮生根苗,从组培室转移到室内,先拧松瓶盖炼苗5d,然后去除瓶盖,与室内放置3d,取出生根苗,洗净根部培养基后温室移栽至茉莉基质中,完成茉莉花的快速繁殖;将健壮生根苗经炼苗后移栽至茉莉基质中,可以使生根苗较快地适应外界环境,有助于提高茉莉生根苗的抗病抗虫害能力,自身免疫力得到有效增强,本发明方法最终所得的生根苗根条数多、根长度长,根系茂盛,成活率高,是一种高效率、低成本的茉莉花快速繁殖方法。无菌松树锯末催芽时,将松树锯末高温灭菌,每1kg松树锯末施入55g聚乙二醇渗透液,将茉莉种子均匀拌入锯末中,保持40℃催芽;聚乙二醇渗透液为含量为1.2g/l的聚乙二醇水溶液,聚乙二醇的分子量为4000~7000,聚乙二醇渗透液中还含有3.6mg/l的2-氟苯甲酸;以含有聚乙二醇渗透液处理的松树锯末对茉莉种子进行催芽,使种子处于合适的温度,又能控制不让茉莉种子发芽,等到播种后茉莉种子发芽更整齐、更迅速;聚乙二醇渗透液中的2-氟苯甲酸可以自由进入种子胚乳细胞内部,并可促进细胞对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分泌,从而可以高效率的提高6-磷酸葡萄糖脱氢生成6-磷酸葡糖酸内酯,大大提高己糖磷酸旁路反应的进行,促使种子内代谢途径由emp/tca转向ppp,种子休眠开始解除,种子开始萌动,提高茉莉种子的发芽率与芽种质量,降低坏芽比例,提升幼芽活力与免疫能力,提高繁殖效率与速度。对比例1:对比例1与实施例1基本相同,不同的是在预处理步骤中,无菌松树锯末中未施入聚乙二醇渗透液,其余步骤与参数均与实施例1相同。对比例2:对比例1与实施例1基本相同,不同的是在预处理步骤中,无菌松树锯末中施入的聚乙二醇渗透液中未含有2-氟苯甲酸,其余步骤与参数均与实施例1相同。实施例2:一种茉莉花快速繁殖的方法,包括以下步骤:预处理:选取饱满、无虫害的茉莉种子,浸泡2h,剥除木质化种皮,然后以30%酒精冲洗2min,蒸馏水冲洗3遍,在超净工作台上以85%酒精浸泡30s,然后置于1g/lnaclo溶液中灭菌12min并不停搅拌,然后以无菌水冲洗6遍,取出后以无菌松树锯末催芽18h,剥取种胚冲洗后至于2℃冰箱中待用;茉莉种子经浸泡后较易剥除种皮,然后以较低浓度naclo溶液灭菌,不仅可有效灭杀茉莉种子附带的有害菌种,还不会对种胚造成损害,维持其生理学活性,保证其出芽率与成活率;同时无菌松树锯末中的松香溢出的苷类有助于活化种胚,进一步解除种子休眠,种子开始萌动,尽早进入萌发阶段,降低茉莉种子萌芽周期,加快繁殖育种;初步培养:初步培养基为ms培养基+2.8%蔗糖+0.7%琼脂+2%椰子汁,调节ph至6.5,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下接种种胚,培养温度为28℃、光照时间为14h、光照强度为2800lux,培养28d后获得组培苗;初步培养步骤中,通过ms培养基配合蔗糖、琼脂、椰子汁来对茉莉种胚进行初步培养,可以获得较为优质的组培苗,茉莉种子的出苗率、幼苗健壮程度均较高,利于进行进一步的增殖培养与生根培养;增殖培养:增殖培养基为ms培养基+3%椰子汁+5mg/l吲哚乙酸,调节ph至6.5,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下选取优良、健壮的组培苗的茎段每3个节剪成一段,插入增殖培养基中诱导增殖,增殖培养温度为26℃、光照时间为12h、光照强度为2500lux,培养28d后获得丛生芽;通过增殖培养,可以将茉莉种子经初步培养获得的少量组培苗获得较多苗系的丛生芽,大大提高茉莉花的繁殖速度与繁殖效率,降低繁殖成本;增殖培养基中的吲哚乙酸能能够作用于细胞,可刺激形成层细胞分裂与生长,促进木质部、韧皮部细胞分化,促进逾伤组织的形态建成,诱导腋芽和不定芽的产生,极大地提升丛生芽中幼芽的数量与质量,为进一步地分化生根培养做准备;生根培养:生根培养基为b5培养基+30mg/l酵母提取物+2.0mg/l吲哚丁酸+0.5mg/l(-)-8-苯基薄荷醇+3.0g/l丙醇+4.0mg/l萘乙酸钠,调节ph至6.8,高压灭菌后培养基凝固;挑选健壮丛生芽,剪取2.5cm有芽的茎段,接种到生根培养基中,生根培养温度为28℃、光照时间为14h、光照强度为3000lux,培养35d后获得生根苗;将丛生芽的芽段进行分化生根培养,可极大地提高最终生根苗的数量,并最终仅需少量的茉莉种子即可获得大量的生根苗,提高效率,降低了成本;生根培养基中的吲哚丁酸、萘乙酸钠可有效刺激芽段形成层细胞的分裂,促进木质部、韧皮部细胞的分化,刺激愈伤组织根细胞生长,促进发根;生根培养基中的吲哚丁酸的有效效用时段仅仅只有1~2d,在此之后,吲哚丁酸即被光降解为吲哚与丁酸从而失去其应有的促生根功效,而在生根培养基中加入微量的(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液之后,(-)-8-苯基薄荷醇在丙醇存在的条件下可以与吲哚丁酸生成氢键而避免了其被光降解,此外,(-)-8-苯基薄荷醇与吲哚丁酸二者之间还可发生络合反应生成(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物,该复合物可以进入茎段体内而成为吲哚丁酸的一种稳定保存形式,从而避免了吲哚丁酸在体外被光降解,该(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物在适当条件下可解离出吲哚丁酸而游离至木质部、韧皮部细胞处促进生根,显著提高生根率与根的健壮度;移栽:选取根长5cm的健壮生根苗,从组培室转移到室内,先拧松瓶盖炼苗7d,然后去除瓶盖,与室内放置5d,取出生根苗,洗净根部培养基后温室移栽至茉莉基质中,完成茉莉花的快速繁殖;将健壮生根苗经炼苗后移栽至茉莉基质中,可以使生根苗较快地适应外界环境,有助于提高茉莉生根苗的抗病抗虫害能力,自身免疫力得到有效增强,本发明方法最终所得的生根苗根条数多、根长度长,根系茂盛,成活率高,是一种高效率、低成本的茉莉花快速繁殖方法。无菌松树锯末催芽时,将松树锯末高温灭菌,每1kg松树锯末施入60g聚乙二醇渗透液,将茉莉种子均匀拌入锯末中,保持45℃催芽;以含有聚乙二醇渗透液处理的松树锯末对茉莉种子进行催芽,使种子处于合适的温度,又能控制不让茉莉种子发芽,等到播种后茉莉种子发芽更整齐、更迅速。聚乙二醇渗透液为含量为1.5g/l的聚乙二醇水溶液,聚乙二醇的分子量为4000~7000,聚乙二醇渗透液中还含有4.6mg/l的2-氟苯甲酸;聚乙二醇渗透液中的2-氟苯甲酸可以自由进入种子胚乳细胞内部,并可促进细胞对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分泌,从而可以高效率的提高6-磷酸葡萄糖脱氢生成6-磷酸葡糖酸内酯,大大提高己糖磷酸旁路反应的进行,促使种子内代谢途径由emp/tca转向ppp,种子休眠开始解除,种子开始萌动,提高茉莉种子的发芽率与芽种质量,降低坏芽比例,提升幼芽活力与免疫能力,提高繁殖效率与速度。对比例3:对比例3与实施例2基本相同,不同的是在生根培养步骤中,生根培养基未添加(-)-8-苯基薄荷醇,其余步骤与参数均与实施例1相同。实施例3:一种茉莉花快速繁殖的方法,包括:预处理、初步培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽,具体包括以下步骤:预处理:选取饱满、无虫害的茉莉种子,浸泡1.5h,剥除木质化种皮,然后以28%酒精冲洗2min,蒸馏水冲洗3遍,在超净工作台上以80%酒精浸泡25s,然后置于1g/lnaclo溶液中灭菌10min并不停搅拌,然后以无菌水冲洗5遍,取出后以无菌松树锯末催芽12h,剥取种胚冲洗后至于1℃冰箱中待用;茉莉种子经浸泡后较易剥除种皮,然后以较低浓度naclo溶液灭菌,不仅可有效灭杀茉莉种子附带的有害菌种,还不会对种胚造成损害,维持其生理学活性,保证其出芽率与成活率;同时无菌松树锯末中的松香溢出的苷类有助于活化种胚,进一步解除种子休眠,种子开始萌动,尽早进入萌发阶段,降低茉莉种子萌芽周期,加快繁殖育种;初步培养:初步培养基为ms培养基+2.6%蔗糖+0.6%琼脂+1.8%椰子汁,调节ph至6.4,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下接种种胚,培养温度为28℃、光照时间为12h、光照强度为2600lux,培养26d后获得组培苗;初步培养步骤中,通过ms培养基配合蔗糖、琼脂、椰子汁来对茉莉种胚进行初步培养,可以获得较为优质的组培苗,茉莉种子的出苗率、幼苗健壮程度均较高,利于进行进一步的增殖培养与生根培养;增殖培养:增殖培养基为ms培养基+2.8%椰子汁+4mg/l吲哚乙酸,调节ph至6.4,高压灭菌后培养基凝固;无菌条件下选取优良、健壮的组培苗的茎段每3个节剪成一段,插入增殖培养基中诱导增殖,增殖培养温度为25℃、光照时间为10h、光照强度为2400lux,培养26d后获得丛生芽;通过增殖培养,可以将茉莉种子经初步培养获得的少量组培苗获得较多苗系的丛生芽,大大提高茉莉花的繁殖速度与繁殖效率,降低繁殖成本;增殖培养基中的吲哚乙酸能能够作用于细胞,可刺激形成层细胞分裂与生长,促进木质部、韧皮部细胞分化,促进逾伤组织的形态建成,诱导腋芽和不定芽的产生,极大地提升丛生芽中幼芽的数量与质量,为进一步地分化生根培养做准备;生根培养:生根培养基为b5培养基+25mg/l酵母提取物+1.8mg/l吲哚丁酸+0.4mg/l(-)-8-苯基薄荷醇+2.8g/l丙醇+3mg/l萘乙酸钠,调节ph至6.7,高压灭菌后培养基凝固;挑选健壮丛生芽,剪取2cm有芽的茎段,接种到生根培养基中,生根培养温度为26℃、光照时间为12h、光照强度为2900lux,培养32d后获得生根苗;将丛生芽的芽段进行分化生根培养,可极大地提高最终生根苗的数量,并最终仅需少量的茉莉种子即可获得大量的生根苗,提高效率,降低了成本;生根培养基中的吲哚丁酸、萘乙酸钠可有效刺激芽段形成层细胞的分裂,促进木质部、韧皮部细胞的分化,刺激愈伤组织根细胞生长,促进发根;生根培养基中的吲哚丁酸的有效效用时段仅仅只有1~2d,在此之后,吲哚丁酸即被光降解为吲哚与丁酸从而失去其应有的促生根功效,而在生根培养基中加入微量的(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液之后,(-)-8-苯基薄荷醇在丙醇存在的条件下可以与吲哚丁酸生成氢键而避免了其被光降解,此外,(-)-8-苯基薄荷醇与吲哚丁酸二者之间还可发生络合反应生成(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物,该复合物可以进入茎段体内而成为吲哚丁酸的一种稳定保存形式,从而避免了吲哚丁酸在体外被光降解,该(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物在适当条件下可解离出吲哚丁酸而游离至木质部、韧皮部细胞处促进生根,显著提高生根率与根的健壮度;移栽:选取根长4cm的健壮生根苗,从组培室转移到室内,先拧松瓶盖炼苗7d,然后去除瓶盖,与室内放置4d,取出生根苗,洗净根部培养基后温室移栽至茉莉基质中,完成茉莉花的快速繁殖;将健壮生根苗经炼苗后移栽至茉莉基质中,可以使生根苗较快地适应外界环境,有助于提高茉莉生根苗的抗病抗虫害能力,自身免疫力得到有效增强,本发明方法最终所得的生根苗根条数多、根长度长,根系茂盛,成活率高,是一种高效率、低成本的茉莉花快速繁殖方法。本实施例以无菌松树锯末催芽时,将松树锯末高温灭菌,每1kg松树锯末施入60g聚乙二醇渗透液,将茉莉种子均匀拌入锯末中,保持42℃催芽;以含有聚乙二醇渗透液处理的松树锯末对茉莉种子进行催芽,使种子处于合适的温度,又能控制不让茉莉种子发芽,等到播种后茉莉种子发芽更整齐、更迅速。本实施例聚乙二醇渗透液为含量为1.4g/l的聚乙二醇水溶液,聚乙二醇的分子量为4000~7000,聚乙二醇渗透液中还含有4mg/l的2-氟苯甲酸;聚乙二醇渗透液中的2-氟苯甲酸可以自由进入种子胚乳细胞内部,并可促进细胞对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分泌,从而可以高效率的提高6-磷酸葡萄糖脱氢生成6-磷酸葡糖酸内酯,大大提高己糖磷酸旁路反应的进行,促使种子内代谢途径由emp/tca转向ppp,种子休眠开始解除,种子开始萌动,提高茉莉种子的发芽率与芽种质量,降低坏芽比例,提升幼芽活力与免疫能力,提高繁殖效率与速度。本实施例生根培养基的配置方法为:首先将当量的(-)-8-苯基薄荷醇、吲哚丁酸完全溶解到丙醇中,然后依次将酵母提取物、(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液、萘乙酸钠加入到b5培养基中;生根培养基中的吲哚丁酸的有效效用时段仅仅只有1~2d,在此之后,吲哚丁酸即被光降解为吲哚与丁酸从而失去其应有的促生根功效,而在生根培养基中加入微量的(-)-8-苯基薄荷醇的丙醇溶液之后,(-)-8-苯基薄荷醇在丙醇存在的条件下可以与吲哚丁酸生成氢键而避免了其被光降解,此外,(-)-8-苯基薄荷醇与吲哚丁酸二者之间还可发生络合反应生成(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物,该复合物可以进入茎段体内而成为吲哚丁酸的一种稳定保存形式,从而避免了吲哚丁酸在体外被光降解,该(-)-8-苯基薄荷醇-吲哚丁酸复合物在适当条件下可解离出吲哚丁酸而游离至木质部、韧皮部细胞处促进生根,显著提高生根率与根的健壮度。对比例4:对比例4与实施例3基本相同,不同的是在预处理步骤中,无菌松树锯末中施入的聚乙二醇渗透液中未含有2-氟苯甲酸;生根培养步骤中,生根培养基未添加(-)-8-苯基薄荷醇,其余步骤与参数均与实施例3相同。测试例:通过目测法测定移栽时生根苗的平均生根条数与生根率,以游标卡尺法测定平均根长度,实施例1~3与对比例1~4的测定结果如表1所示。表.实施例与对比例中生根苗的生根状况统计例别平均生根条数(条)生根率平均根长度(cm)实施例118.5100.0%5.3对比例114.597.5%3.7对比例214.998.0%3.6实施例220.3100.0%5.5对比例313.995.5%3.2实施例320.6100.0%5.5对比例410.594.0%3.0由表1可以看出,实施例1~3中,生根率均达到了100%,而且实施例2与实施例3中平均根长度达到了4.5cm、平均生根条数超过了20条,说明本发明方法最终所得的生根苗根条数多、根长度长,根系茂盛,成活率高,是一种高效率、低成本的茉莉花快速繁殖方法。上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术,故在此不再详细赘述。以上实施方式仅用于说明本发明,而并非对本发明的限制,本领域的普通技术人员,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,还可以做出各种变化和变型。因此,所有等同的技术方案也属于本发明的范畴,本发明的专利保护范围应由权利要求限定。当前第1页12
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