本发明涉及鱼类人工授精
技术领域：
，具体为一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法。
背景技术：
：暗纹东方鲀为温水性底层江海洄游性鱼类，仅分布于中国、朝鲜。中国产于东海、黄海和渤海等地。每年3-6月溯河洄游，淡水中产卵、受精和孵化。红鳍东方鲀主要栖息于近海底层的暖温海水环境中，主要分布在西北太平洋区，由日本、韩国及俄罗斯沿海至东中国海，我国台湾分布于背部、东北部及东部海域。每年3-5月在海州湾地区产卵，5月上旬达盛产期，时间极短，孵化水温在17-18℃，海水中产卵、受精和孵化。暗纹东方鲀和红鳍东方鲀均隶属于鲀形目（tetraodontiformes）、鲀科（tetraodontidae）、东方鲀属（fugu）。但两者对于产卵、受精、孵化的水环境要求不同，暗纹东方鲀为淡水中产卵、孵化，所需水温在24±0.5℃左右，红鳍东方鲀为海水产卵、孵化，所需水温在19±0.5℃。由于两种鱼卵子和精子所处的渗透压不同，受精比较难，能否将淡水中发育的卵子与海水中发育的精子结合在一起，并能培育出生命体，关键是如何找到受精、胚胎发育、精子活力及受精的最佳生理盐水的浓度及有效的受精时效，目前，尚未有关于提高暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本杂交受精率方法报道。生理盐水是指生理学实验或临床上常用的渗透压与动物或人体血浆的渗透压基本相等的氯化钠溶液，用于两栖类动物时是0.67~0.70%，用于哺乳类动物和人体是0.85~0.9%，淡水和海水鱼类杂交的生理盐水的浓度未见报道，因此，亟待一种改进的技术来解决现有技术中所存在的这一问题。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法，通过干法混匀，一定比例生理盐水调节渗透压使其受精，以解决上述
背景技术：
中提出的问题。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法，包括以下步骤：步骤一：亲本选择：选择体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本进行杂交；步骤二：亲本雌雄鉴别与性比：母本腹部膨大，生殖孔外突，略呈菊花形，充血，性腺发育至iv期左右，轻压腹部无卵粒排出，性腺发育至v期，轻压腹部，有米黄色卵粒排出；父本腹部较小，轻压腹部生殖孔，有倒漏斗形生殖突起，性腺发育近v期时，挤压腹部有乳白色精液流出，挑选性成熟暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本，母本和父本个体比为2-3:1；步骤三：亲本催产：人工催产暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本，采用一针注射法。步骤四：配制生理盐水浓度：将0.9%的氯化钠溶液用蒸馏水配制成0.5%的生理盐水，以维持暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本细胞的正常形态并在5min内完成受精。步骤五：产卵与受精：人工催产达到效应时间后，将卵子和精子挤入干净的陶瓷盆中，用鸡毛或软毛刷轻轻搅拌均匀后加入生理盐水受精。优选的，所述步骤一中暗纹东方鲀母本选择标准为3-4龄、体重750g以上。优选的，所述步骤一中红鳍东方鲀父本选择标准为2-3龄、体重3000g以上。优选的，所述步骤三中一针注射法为对暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本注射鲤鱼脑垂体和促黄体素释放激素类似物，效应时间为42-48小时；其中，暗纹东方鲀母本，鲤鱼脑垂体的用量为2.5mg/kg，促黄体素释放激素类似物的用量为200ug/kg；其中，红鳍东方鲀父本，鲤鱼脑垂体的用量为1.5mg/kg，促黄体素释放激素类似物的用量为100ug/kg。优选的，所述步骤四中生理盐水浓度是指在淡水中氯化钠的百分含量。与现有技术相比，本发明的有益效果是：采用规格大、体质健壮、性成熟的暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本作为繁殖亲本，经过一次预催熟生理调控，通过干法使精子与卵子充分混匀，调节渗透压使精子与卵子结合，提高了暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本杂交育受精率，为提高淡水鱼类与海水鱼类杂交受精率具有重要的参考意义。具体实施方式下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明提供一种技术方案：一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法，包括以下步骤：步骤一：亲本选择：选择3-4龄、体重750g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的暗纹东方鲀母本和3-4龄、体重3000g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的红鳍东方鲀父本作为繁育亲本；步骤二：亲本雌雄鉴别与性比：母本腹部膨大，生殖孔外突，略呈菊花形，充血，性腺发育至iv期左右，轻压腹部无卵粒排出，性腺发育至v期，轻压腹部，有米黄色卵粒排出；父本腹部较小，轻压腹部生殖孔，有倒漏斗形生殖突起，性腺发育近v期时，挤压腹部有乳白色精液流出，挑选性成熟暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本，母本和父本个体比为2-3:1；步骤三：亲本催产：人工催产采用一针注射法对暗纹东方鲀母本鲤鱼脑垂体（pg）2.5mg/kg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）200ug/kg；红鳍东方鲀父本进行注射鲤鱼脑垂体（pg）1.5mg/kg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）100ug/kg，效应时间为42-48小时。步骤四：配制生理盐水浓度：将0.9%的氯化钠溶液用蒸馏水配制成0~0.8%的生理盐水。步骤五：人工催产达到效应时间后，捞取待产亲本，用手指堵住泄殖孔，再用干毛巾吸干鱼体表水分，将卵子和精子分别挤入事先消毒、干燥、洁净、光滑的陶瓷盆中，混合后用消毒后的鸡毛或软毛刷轻轻搅拌2min，使精、卵充分混合，再加入浓度为0~0.8%生理盐水调节渗透压受精，整个过程5min内完成。实施例一：一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法，包括以下步骤：步骤一：亲本选择：选择3龄、体重800g、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的暗纹东方鲀母本和3龄、体重3200g、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的红鳍东方鲀父本作为繁育亲本；步骤二：亲本雌雄鉴别与性比：母本腹部膨大，生殖孔外突，略呈菊花形，充血，性腺发育至iv期左右，轻压腹部无卵粒排出，性腺发育至v期，轻压腹部，有米黄色卵粒排出；父本腹部较小，轻压腹部生殖孔，有倒漏斗形生殖突起，性腺发育近v期时，挤压腹部有乳白色精液流出，挑选性成熟暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本，母本和父本个体比为2:1；步骤三：亲本催产：人工催产采用一针注射法对暗纹东方鲀母本鲤鱼脑垂体（pg）2mg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）160ug；红鳍东方鲀父本进行注射鲤鱼脑垂体（pg）4.8mg/kg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）320ug/kg，效应时间为48小时。步骤四：配制生理盐水浓度：将0.9%的氯化钠溶液用蒸馏水配制成0%的生理盐水。步骤五：人工催产达到效应时间后，捞取待产亲本，用手指堵住泄殖孔，再用干毛巾吸干鱼体表水分，将卵子和精子分别挤入事先消毒、干燥、洁净、光滑的陶瓷盆中，混合后用消毒后的鸡毛或软毛刷轻轻搅拌2min，使精、卵充分混合，再加入浓度为0%生理盐水调节渗透压受精，整个过程5min内完成。实施例二：一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法，包括以下步骤：步骤一：亲本选择：选择3龄、体重850g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的暗纹东方鲀母本和3龄、体重3300g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的红鳍东方鲀父本作为繁育亲本；步骤二：亲本雌雄鉴别与性比：母本腹部膨大，生殖孔外突，略呈菊花形，充血，性腺发育至iv期左右，轻压腹部无卵粒排出，性腺发育至v期，轻压腹部，有米黄色卵粒排出；父本腹部较小，轻压腹部生殖孔，有倒漏斗形生殖突起，性腺发育近v期时，挤压腹部有乳白色精液流出，挑选性成熟暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本，母本和父本个体比为2:1；步骤三：亲本催产：人工催产采用一针注射法对暗纹东方鲀母本鲤鱼脑垂体（pg）2.125mg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）170ug；红鳍东方鲀父本进行注射鲤鱼脑垂体（pg）4.95mg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）330ug，效应时间为48小时。步骤四：配制生理盐水浓度：将0.9%的氯化钠溶液用蒸馏水配制成0.2%的生理盐水。步骤五：人工催产达到效应时间后，捞取待产亲本，用手指堵住泄殖孔，再用干毛巾吸干鱼体表水分，将卵子和精子分别挤入事先消毒、干燥、洁净、光滑的陶瓷盆中，混合后用消毒后的鸡毛或软毛刷轻轻搅拌2min，使精、卵充分混合，再加入浓度为0.2%生理盐水调节渗透压受精，整个过程5min内完成。实施例三：一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法，包括以下步骤：步骤一：亲本选择：选择4龄、体重900g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的暗纹东方鲀母本和4龄、体重3500g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的红鳍东方鲀父本作为繁育亲本；步骤二：亲本雌雄鉴别与性比：母本腹部膨大，生殖孔外突，略呈菊花形，充血，性腺发育至iv期左右，轻压腹部无卵粒排出，性腺发育至v期，轻压腹部，有米黄色卵粒排出；父本腹部较小，轻压腹部生殖孔，有倒漏斗形生殖突起，性腺发育近v期时，挤压腹部有乳白色精液流出，挑选性成熟暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本，母本和父本个体比为3:1；步骤三：亲本催产：人工催产采用一针注射法对暗纹东方鲀母本鲤鱼脑垂体（pg）2.25mg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）180ug；红鳍东方鲀父本进行注射鲤鱼脑垂体（pg）5.25mg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）350ug，效应时间为48小时。步骤四：配制生理盐水浓度：将0.9%的氯化钠溶液用蒸馏水配制成0.5%的生理盐水。步骤五：人工催产达到效应时间后，捞取待产亲本，用手指堵住泄殖孔，再用干毛巾吸干鱼体表水分，将卵子和精子分别挤入事先消毒、干燥、洁净、光滑的陶瓷盆中，混合后用消毒后的鸡毛或软毛刷轻轻搅拌2min，使精、卵充分混合，再加入浓度为0.5%生理盐水调节渗透压受精，整个过程5min内完成。实施例四：一种提高暗纹东方鲀雌鱼和红鳍东方鲀雄鱼杂交受精率的方法，包括以下步骤：步骤一：亲本选择：选择4龄、体重850g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的暗纹东方鲀母本和4龄、体重3500g以上、体质健壮、无病无伤，性腺发育成熟的红鳍东方鲀父本作为繁育亲本；步骤二：亲本雌雄鉴别与性比：母本腹部膨大，生殖孔外突，略呈菊花形，充血，性腺发育至iv期左右，轻压腹部无卵粒排出，性腺发育至v期，轻压腹部，有米黄色卵粒排出；父本腹部较小，轻压腹部生殖孔，有倒漏斗形生殖突起，性腺发育近v期时，挤压腹部有乳白色精液流出，挑选性成熟暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本，母本和父本个体比为3:1；步骤三：亲本催产：人工催产采用一针注射法对暗纹东方鲀母本鲤鱼脑垂体（pg）2.125mg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）170ug；红鳍东方鲀父本进行注射鲤鱼脑垂体（pg）5.25mg和促黄体素释放激素类似物（lhrh-a2）350ug，效应时间为48小时。步骤四：配制生理盐水浓度：将0.9%的氯化钠溶液用蒸馏水配制成0.8%的生理盐水。步骤五：人工催产达到效应时间后，捞取待产亲本，用手指堵住泄殖孔，再用干毛巾吸干鱼体表水分，将卵子和精子分别挤入事先消毒、干燥、洁净、光滑的陶瓷盆中，混合后用消毒后的鸡毛或软毛刷轻轻搅拌2min，使精、卵充分混合，再加入浓度为0.8%生理盐水调节渗透压受精，整个过程5min内完成。以上每种生理盐水浓度配比均做有大量实验，经过实验对比，并做记录，下表为不同渗透压调节对暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本受精率的影响：生理盐水浓度.%00.20.50.8受精率.%44.659.896.578.8综上所述，当生理盐水浓度为0.5%时，暗纹东方鲀母本和红鳍东方鲀父本受精率最高。尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。当前第1页12