一种血叶兰新品种培育方法与流程

本发明涉及植物新品种培育技术领域，涉及兰科血叶兰属植物新品种的培育方法，具体涉及一种血叶兰新品种培育方法。

背景技术：

血叶兰(Ludisia discolor(ker-Gawl).A.Rich，又名石上藕、石蚕、公石松等，是兰科血叶兰属植物。分布于海南、福建、广东、广西、云南等热带亚热第地区，在东南亚如泰国、缅甸、越南等地也有分布。其株型紧凑，叶片脉纹亮丽，花朵洁白，可赏花观叶，常作为小盆栽或栽植于石头上作为园林小景，此外血叶兰具有滋阴润肺，安神健脾，清热凉血等功效，可治疗神经衰落，肺痨咳血以及食欲不振等症，在民间常作为治疗肺部疾病的草药来使用。因其具有较高的观赏及药用价值，近年来市场需求量逐年增加。

目前，市场销售的血叶兰主要依靠野外采集获得，因为该品种未见有大规模商业化种植，也未见有相关品种报道，产量及品质不稳定。并且，血叶兰野外采集的是全株，被采集过的地方种群锐减，在很长一段时间内得不到恢复，这种掠夺式的采集对野生资源破坏严重，加速了该物种的致危进程，血叶兰已被列为国家二级保护植物。因此为了血叶兰产业发展及保护野生资源，培育血叶兰新品种显得尤为必要。

技术实现要素：

本发明的目的是提供了一种血叶兰新品种培育方法，本发明的新品种培育方法具有可操作性高，品种稳定性强，繁殖速度快，可以在短时间内繁殖出大量种苗，满足商业化种植需求。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种血叶兰新品种培育方法，包括以下步骤：

(1)选育亲本的选择：从野外采集血叶兰资源中挑选植株健壮，节间短粗，叶片大，叶脉网纹明显作为亲本，移植于种质圃中，在2～3月开花季节进行异株杂交，待蒴果种皮由绿色变为褐色但种子未开裂时采摘备用；

(2)种子的无菌播种：

a、采摘的血叶兰种子在无菌操作台上用75％乙醇表面消毒30s，经无菌水冲洗3～4次后转入到0.1％升汞溶液种灭菌8～10min，其间不时摇晃，后用无菌冲洗3～4次后接入到萌发培养基中；

b、在黑暗条件下进行培养，5～8d种子吸胀膨大突破种皮，13～15d形成乳白色的圆球茎，伴随着圆球茎的形成，在其表面密生绒毛，此时转入到光照条件下培养，50～60d圆球茎伸长，在其顶端生长出叶片；

c、此后每30d继代一次，继代2～3次后接种至生根培养基中；

(3)优良单株的选择并形成株系：

a、无菌苗在生根培养基中培养90d后，有4～5片展开叶；

b、根据植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹育种目标，采用一次性单株选择法初选具有特异性的单株并编号，进行增殖培育，形成株系；

c、增殖培养方法为：将单株切割成2～3cm的小段，每小段含有2～3个节间，接种到增殖培养基中；

d、每45d继代一次，继代4～6次增殖到200株以上时接种到生根培养基中，生根培养基中培养60d后出瓶驯化栽培；

(4)株系形状评价：

a、将上述所得株系的生根植株将根部培养基洗净后稍晾干，用水苔将根部包裹移栽至105孔穴盘种植，置于温室中培养60d；

b、温室环境控制在温度24～26℃，湿度保持在80～90％，遮荫度80～85％；

c、30d后每15d浇一次水溶肥；

d、待植株长出4～6片叶片时，从植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹对株系的特异性、一致性和稳定性进行观察和评价，筛选有特异性、单株间表现一致、性状稳定的株系为血叶兰新品种。

进一步地，所述萌发培养基成分包括1/2MS、2g/L花宝1号、0.5～1mg/L NAA、30g/L土豆提取物、2g/L水解酪蛋白。

进一步地，所述继代培养基包括1/2MS、1g/L花宝1号、0.5～1mg/L 6-BA、30g/L土豆提取物、0.5g/L AC(活性炭)。

进一步地，所述生根培养基包括1/2MS、2g/L花宝1号、30g/L土豆提取物、0.5g/L AC。

进一步地，所述增殖培养基包括1/2MS、1g/L花宝1号、1～2mg/L 6-BA。

进一步地，所述水溶肥为水溶肥20-20-20。

本发明所有的培养基未经特殊说明的均添加蔗糖30g/L，固体培养基添加琼脂粉7g/L，pH值均为5.8～6.2。

附图说明

图1为本发明待蒴果种皮由绿色变为褐色但种子未开裂时采摘图；

图2为本发明种子吸胀膨大突破种皮，形成乳白色的圆球茎，在其表面密生绒毛时的图；

图3为本发明血叶兰90d后有4～5片展开叶时图；

图4为本发明选育出血叶兰“红玉”新品种图；

图5为本发明选育出血叶兰“黑玉”新品种图；

图6为本发明选育出血叶兰“墨玉”新品种图。

具体实施方式

实施例1

从野外收集植株健壮，节间短粗，叶片大，叶脉网纹丰富的材料作为亲本，于在2月开花季节进行异株自交，待蒴果种皮由绿色变为褐色但种子未开裂时采摘(图1)，采摘的血叶兰种子在无菌操作台上用75％乙醇表面消毒30s，经无菌水冲洗3次后转入到0.1％升汞溶液种灭菌8min，其间不时摇晃，后用无菌冲洗3次后接入到萌发培养基中；萌发培养基成分为1/2MS+2.0g/L花宝1号+0.5mg/L NAA+30g/L土豆提取物+2g/L水解酪蛋白。7d可以见到种子吸胀膨大突破种皮，15d形成乳白色的圆球茎，伴随着圆球茎的形成，在其表面密生绒毛(图2)，60d圆球茎伸长，在其顶端生长出叶片，在该培养基中继代3次后接种到生根培养基中，继代培养基为1/2MS+1g/L花宝1号+0.5mg/L 6-BA+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC；生根培养基为1/2MS+2g/L花宝1号+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC，90d后有4～5片展开叶(图3)，根据植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹等方面选择优良单株接种至继代增殖培养基中，增殖培养基成分为1/2MS+1g/L花宝1号+1.0mg/L 6-BA，经4次增殖到一定量后接种到生根培养基中，生根培养基为1/2MS+2g/L花宝1号+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC(活性炭)。生根培养60d后出瓶驯化栽培。用水苔将洗净根部的种苗包裹移栽至105孔穴盘种植，置于温室中培养。温室环境控制在温度24℃，湿度保持在90％左右，遮荫度85％。30d后每15d浇一次水溶肥20-20-20。待植株长出4～6片叶片时，从植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹等方面对株系的特异性、一致性和稳定性进行观察和评价，筛选有特异性、单株间表现一致、性状稳定的株系为血叶兰新品种。

实施例2

从野外收集植株健壮，节间短粗，叶片大，叶脉网纹丰富的材料作为亲本，于在3月开花季节进行异株自交，待蒴果种皮由绿色变为褐色但种子未开裂时采摘(图1)，采摘的血叶兰种子在无菌操作台上用75％乙醇表面消毒30s，经无菌水冲洗4次后转入到0.1％升汞溶液种灭菌9min，其间不时摇晃，后用无菌冲洗4次后接入到萌发培养基中；萌发培养基成分为1/2MS+2g/L花宝1号+0.8mg/L NAA+30g/L土豆提取物+2g/L水解酪蛋白。8d可以见到种子吸胀膨大突破种皮，14d形成乳白色的圆球茎，伴随着圆球茎的形成，在其表面密生绒毛(图2)，60d圆球茎伸长，在其顶端生长出叶片，在该培养基中继代2次后接种到生根培养基中，继代培养基为1/2MS+1g/L花宝1号+0.8mg/L 6-BA+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC；生根培养基为1/2MS+2g/L花宝1号+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC，90d后有4～5片展开叶(图3)，根据植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹等方面选择优良单株接种至继代增殖培养基中，增殖培养基成分为1/2MS+1g/L花宝1号+1.5mg/L 6-BA，经5次增殖到一定量后接种到生根培养基中，生根培养基为1/2MS+2g/L花宝1号+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC(活性炭)。生根培养60d后出瓶驯化栽培。用水苔将洗净根部的种苗包裹移栽至105孔穴盘种植，置于温室中培养。温室环境控制在温度25℃，湿度保持在90％左右，遮荫度85％。30d后每15d浇一次水溶肥20-20-20。待植株长出4～6片叶片时，从植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹等方面对株系的特异性、一致性和稳定性进行观察和评价，筛选有特异性、单株间表现一致、性状稳定的株系为血叶兰新品种。

实施例3

从野外收集植株健壮，节间短粗，叶片大，叶脉网纹丰富的材料作为亲本，于在2月开花季节进行异株自交，待蒴果种皮由绿色变为褐色但种子未开裂时采摘(图1)，采摘的血叶兰种子在无菌操作台上用75％乙醇表面消毒30s，经无菌水冲洗4次后转入到0.1％升汞溶液种灭菌10min，其间不时摇晃，后用无菌冲洗4次后接入到萌发培养基中；萌发培养基成分为1/2MS+2g/L花宝1号+1mg/L NAA+30g/L土豆提取物+2g/L水解酪蛋白。7d可以见到种子吸胀膨大突破种皮，15d形成乳白色的圆球茎，伴随着圆球茎的形成，在其表面密生绒毛(图2)，60d圆球茎伸长，在其顶端生长出叶片，在该培养基中继代3次后接种到生根培养基中，继代培养基为1/2MS+1g/L花宝1号+1mg/L 6-BA+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC；生根培养基为1/2MS+2g/L花宝1号+30g/L土豆提取物+0.5g/L AC，90d后有4～5片展开叶(图3)，根据植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹等方面选择优良单株接种至继代增殖培养基中，增殖培养基成分为1/2MS+1g/L花宝1号+2.0mg/L 6-BA，经4次增殖到一定量后接种到生根培养基中，生根培养基为1/2MS+2g/L花宝1号+30g/L土豆提取物+0.5g/LAC(活性炭)。生根培养60d后出瓶驯化栽培。用水苔将洗净根部的种苗包裹移栽至105孔穴盘种植，置于温室中培养。温室环境控制在温度26℃，湿度保持在90％左右，遮荫度85％。30d后每15d浇一次水溶肥20-20-20。待植株长出4～6片叶片时，从植株整体状态，节间粗细，叶形及叶脉脉纹等方面对株系的特异性、一致性和稳定性进行观察和评价，筛选有特异性、单株间表现一致、性状稳定的株系为血叶兰新品种。

图4为本发明选育出血叶兰“红玉”新品种图；图5为本发明选育出血叶兰“黑玉”新品种图；图6为本发明选育出血叶兰“墨玉”新品种图。

以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。