一种水曲柳组培苗一步法生根与移栽技术的制作方法

技术领域：

本发明属于林木遗传育种领域，植物组织培养范畴，水曲柳高效繁殖技术

背景技术：
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水曲柳种子具有深休眠的特性，休眠期高达数月，春化处理时间较长，繁殖速度慢，因此建立一个高效的繁殖技术尤为重要。同时，为保持优良品种的性状，并缩短繁殖时间，扩大繁殖系数，无性繁殖也是最优之选。水曲柳的组织培养主要是通过器官发生(芽、茎段、下胚轴)获得不定芽，而为实现规模化繁殖，需将不定芽进行生根移栽处理，但目前在水曲柳组织培养生根移栽方面仅有零散报道，未见系统性生根移栽技术的研究。本发明以水曲柳无性繁殖中组织培养为基础，将通过器官发生获得的不定芽继代培养出的水曲柳不定枝作为材料，进行生根试验。首先将不定枝壮苗，扩大株高与茎粗，为进行下一步生根选育长势优良的组培苗。本发明优化了水曲柳组培苗壮苗生根的体系，并建立了水曲柳组培不定枝生根移栽一体化技术。

技术实现要素：
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本发明提供了一种高效的水曲柳组培苗壮苗生根的方法，并建立了水曲柳组培苗一步法生根与移栽技术，具体内容包括：

1，水曲柳愈伤组织诱导的不定芽通过伸长培养28d后，继代培养在四种(wpm、ms、b5、is分别添加2.0mg/l6-ba、20g/l蔗糖、7g/l琼脂)培养基中，培养30d后统计株高，茎粗和存活率，最终得出wpm为水曲柳组培苗壮苗最适培养基。

2，将三种生长状态(半木质化单株苗、单株幼苗、丛生苗)的水曲柳组培苗于壮苗培养基(wpm+2.0mg/l6-ba+20g/l蔗糖+7g/l琼脂)中培养30d后统计生长情况，最终得出：半木质化单株幼苗(5.1cm)>丛生苗(4.6cm)>单株幼苗(1.7cm)。

3，通过外源添加两种激素(iba、naa)的多种组合试验，观察并统计根长、生根天数和生根率，综合得出：水曲柳组培苗在(wpm+1.4mg/liba+0.7mg/lnaa)培养基中生根率能达到80.54％。

4，设计两种移栽方式：①水曲柳组培苗经生根培养基诱导生根后进行移栽；②水曲柳组培苗直接移栽。培养条件：光照强度80μmol*m^-2*s^-1、光16h/暗8h、温度25±2℃、湿度80％-90％，培养30d后统计移栽成活率，有根移栽(93.33％)>无根移栽(63.33％)并建立水曲柳组培苗一步法生根与移栽技术。

本发明是水曲柳组培苗快速繁殖的关键技术之一，通过高效的水曲柳组培苗壮苗生根及生根移栽一体化技术既节省了时间成本也将带来巨大的经济效益，为水曲柳快速繁殖的规模化生产奠定了坚实的基础。

附图说明：

图1不同生长状态的水曲柳组培苗

图2水曲柳组培苗一步法生根与移栽

具体实施方式：

1，四种基本培养基对水曲柳组培苗壮苗的影响

水曲柳愈伤组织诱导的不定芽通过伸长培养28d后分别接种于添加2.0mg/l6-ba、20g/l蔗糖和7g/l琼脂的ms、wpm、b5、is培养基中，每个处理重复30瓶，每瓶接种1个外植体。30d后统计株高，茎粗、叶片状态(叶片数和叶色)和存活率。

表1基本培养基对水曲柳组培苗壮苗的影响

注：小写字母代表p<0.05水平上差异显著。

2，不定枝生长状态对水曲柳组培苗壮苗的影响

在无菌条件下将分别将半木质化单株苗(基部带有愈伤组织)、单株幼苗(基部少愈伤组织)和丛生苗(3-4株)组培苗接种于添加2.0mg/l6-ba和20g/l蔗糖的wpm培养基中，每个处理重复30瓶，每瓶接种1个外植体。30d后统计株高，茎粗、存活率。

表2不同生长状态的水曲柳组培苗壮苗的影响

注：小写字母代表p<0.05水平上差异显著。

3，两种激素组合对组培苗生根的影响

在无菌条件下将水曲柳组培苗分别接种于(0.3mg/lnaa、0.6mg/liba+0.9mg/lnaa、1.0mg/liba+0.1mg/lnaa、1.4mg/liba+0.7mg/lnaa、1.8mg/liba、2.2mg/liba+0.5mg/lnaa)(如表3)的wpm培养集中，蔗糖均为20g/l，每个处理重复30瓶，每瓶接种1个外植体。30d后统计根数、根长、生根天数和生根率。

表3激素组合对组培苗生根的影响

注：小写字母代表p<0.05水平上差异显著。

4，两种移栽方式对水曲柳组培苗成活率的影响

设计两种移栽方式：①水曲柳组培不定枝经生根培养基诱导生根后进行移栽；②水曲柳组培不定枝直接移栽到基质土中，在透明拉口袋内倒入(wpm+1.4mg/liba+0.7mg/lnaa)无蔗糖和琼脂的营养液，每组移栽20株，重复3次，30d后观察移栽苗状态，统计成活率。

组培苗移栽按照以下步骤：①按照草炭土：蛭石＝3：1的配比将基质混匀后装入无纺布育苗袋，用不含蔗糖和琼脂的生根培养基(wpm+1.4mg/liba+0.7mg/lnaa)浇透。②用镊子将健壮的水曲柳组培苗栽植于上述育苗袋基质中，在育苗袋外再套上透明塑料拉口袋，将其摆放于育苗盒中。③将育苗盒置于培养条件为温度25℃，湿度90％，光照强度80μmol*m-2*s-1，光16h/暗8h的温室中培养，7d后打开拉口袋，14d后去掉塑料拉口袋，每隔3d浇一次上述生根培养基。

表4不同移栽方式的水曲柳组培苗移栽的影响

注：小写字母代表p<0.05水平上差异显著。