一种从橄榄果渣中提取抑菌物质的方法和应用与流程

本发明属于食品副产物的深加工
技术领域：
，尤其涉及一种从橄榄果渣中提取抑菌物质的方法和应用。
背景技术：
：橄榄是橄榄科橄榄属乔木植物，高可达35米，胸径可达150厘米。橄榄果呈卵圆形至纺锤形，成熟时黄绿色，外果皮厚，核硬，两端尖，核面粗化，花期4-5月，果10-12月成熟。橄榄果渣是橄榄果经过压榨后，提取汁液或者油分后剩下的固体物质，包括有果皮、果肉、果籽、果梗等，通常是将果渣丢弃。废弃物的有效利用和保护环境已是一种必然趋势，而以甘肃陇南为首的地区年产橄榄油的副产物橄榄渣约14～18吨，且不能够得到有效利用，一方面造成了资源的浪费，另一方面造成了环境污染。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种从橄榄果渣中提取抑菌物质的方法和应用，采用本发明提供的方法能够从橄榄果渣中提取得到抑菌物质，对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用，而且增加了橄榄的附加值，减少环境污染。为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：本发明提供了一种从橄榄果渣中提取抑菌物质的方法，包括以下步骤：1)将橄榄果渣进行离心，将得到的清液过滤，得到橄榄果渣滤液；2)将所述步骤1)得到的橄榄果渣滤液与除油剂混合、静置，将得到的静置物离心，弃去除油剂层，得到除油溶液；3)将所述步骤2)得到的除油溶液与提取剂混合、漩涡，分离得到含多酚的上层液，除去含多酚的上层液中的提取剂后进行蒸馏，得到抑菌物质；所述菌包括金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌；所述提取剂包括乙酸乙酯、甲醇或乙醇。优选的，所述步骤1)和2)离心的条件独立的包括：所述离心的转速为3000～5000rpm，所述离心的时间为10～30min。优选的，所述步骤2)除油剂包括正己烷、石油醚、二氯甲烷、异辛烷或环己烷。优选的，所述橄榄果渣滤液与除油剂的体积比为0.5～1.5:0.5～1.5。优选的，所述步骤2)混合的方式包括漩涡，所述漩涡的时间为30～600s。优选的，所述步骤2)静置的时间为1～150min。优选的，所述步骤3)除油溶液与提取剂的体积比为0.5～1.5:1.5～2.5。优选的，所述步骤3)漩涡的时间为30～600s。优选的，所述步骤3)蒸馏的温度为50～60℃。本发明还提供了上述技术方案所述的方法得到的抑菌物质在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。本发明提供了一种从橄榄果渣中提取抑菌物质的方法，包括以下步骤：1)将橄榄果渣进行离心，将得到的清液过滤，得到橄榄果渣滤液；2)将所述步骤1)得到的橄榄果渣滤液与除油剂混合、静置，将得到的静置物离心，弃去除油剂层，得到除油溶液；3)将所述步骤2)得到的除油溶液与提取剂混合、漩涡，分离得到含多酚的上层液，除去含多酚的上层液中的提取剂后进行蒸馏，得到抑菌物质；所述菌包括金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌；所述提取剂包括乙酸乙酯、甲醇或乙醇。采用本发明提供的方法能够从橄榄果渣中提取得到多酚类物质，每100ml橄榄果渣滤液中能够提取得到4～5ml提取物，浓度为427mg/l，提取物能够抑制金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌，增加了橄榄的附加值，而且不会造成环境污染。附图说明图1为实施例3中提取物原液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈结果，抑菌圈直径为21.52mm。图2为实施例4中提取物原液对大肠杆菌的抑菌圈结果，抑菌圈直径为9.22mm。图3为对比例1和2的抑菌圈结果。取物原液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为21.54mm，极敏感；，乙酸乙酯对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为6mm，不敏感；橄榄渣滤液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为7mm，低度敏感。图4为对比例2的抑菌圈结果。取物原液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为19.56mm，极敏感；，乙酸乙酯对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为6mm，不敏感；橄榄渣滤液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为7mm，低度敏感。具体实施方式本发明提供了一种从橄榄果渣中提取抑菌物质的方法，包括以下步骤：1)将橄榄果渣进行离心，将得到的清液过滤，得到橄榄果渣滤液；2)将所述步骤1)得到的橄榄果渣滤液与除油剂混合、静置，将得到的静置物离心，弃去除油剂层，得到除油溶液；3)将所述步骤2)得到的除油溶液与提取剂混合、漩涡，分离得到含多酚的上层液，除去含多酚的上层液中的提取剂后进行蒸馏，得到抑菌物质；所述菌包括金黄色葡萄球菌；所述提取剂包括乙酸乙酯、甲醇或乙醇。本发明将橄榄果渣进行离心，将得到的清液过滤，得到橄榄果渣滤液。在本发明中，所述橄榄果渣是果实经冷榨后的剩余物。在本发明中，离心所述橄榄果渣，将得到的清液过滤，将得到的滤液优选再进行离心和过滤后，得到橄榄果渣滤液。在本发明中，所述离心的转速优选为3000～5000rpm，所述离心的时间优选为10～30min。在本发明中，所述橄榄果渣优选使用滤渣过滤掉橄榄果渣的固体颗粒后再进行离心。在本发明中，所述离心和过滤除去固体颗粒。本发明对所述过滤的条件没有特殊限定，采用常规即可。本发明将得到的橄榄果渣滤液与除油剂混合、静置，将得到的静置物离心，弃去除油剂层，得到除油溶液。在本发明中，所述混合的方式包括漩涡，所述漩涡的时间优选为30～600s。在本发明中，所述静置的时间优选为1～150min。在本发明中，所述离心的转速优选为3000～5000rpm，所述离心的时间优选为10～30min。在本发明中，所述离心除去除油剂。在本发明中，所述橄榄果渣滤液与除油剂的体积比优选为0.5～1.5:0.5～1.5，更优选为1:1。在本发明中，所述除油剂包括正己烷、石油醚、二氯甲烷、异辛烷或环己烷，所述除油剂除去油脂层。本发明对上述试剂的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。本发明将得到的除油溶液与提取剂混合、漩涡，分离得到含多酚的上层液，除去含多酚的上层液中的提取剂后进行蒸馏，得到抑菌物质。在本发明中，所述提取剂包括乙酸乙酯、甲醇或乙醇，所述提取剂能够提取橄榄果渣中的多酚物质。在本发明中，所述除油溶液与提取剂的体积比优选为0.5～1.5:1.5～2.5，更优选为1:2。本发明对上述试剂的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本发明中，所述漩涡的时间优选为30～600s。在本发明中，所述漩涡分层。本发明对除去含多酚的上层液中的提取剂的方法没有特殊限定，优选采用旋转蒸发仪真空蒸发除去。在本发明中，所述蒸馏的温度优选为50～60℃，更优选为55℃。在本发明中，所述抑菌物质为酪醇和羟基酪醇，含量分别为180.51mg/l、240.22mg/l。本发明还提供了上述技术方案所述的方法得到的抑菌物质在抑制金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌中的应用。在本发明中，所述金黄色葡萄球菌和大肠杆菌优选为金黄色葡萄球菌标准菌株atcc25923和大肠杆菌标准菌株atcc25922。下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。实施例1将橄榄果渣用滤纸过滤，除去橄榄果渣中的固体颗粒，进行离心(5000rpm，15min)和过滤，得到滤液，将得到的滤液再次离心(5000rpm，15min)和过滤，得到橄榄果渣滤液100ml，5000rpm离心15min，加正己烷100ml，涡旋600s，静置30min，10000rpm离心10min～30min。弃去正己烷层，加乙酸乙酯200ml，涡旋1h，在55℃下蒸馏，获得具有抑菌活性的溶液约5ml，即提取液原液，结果见表1。实施例2将橄榄果渣用滤纸过滤，除去橄榄果渣中的固体颗粒，进行离心(5000rpm，15min)和过滤，得到滤液，将得到的滤液再次离心(5000rpm，15min)和过滤，得到橄榄果渣滤液100ml，5000rpm离心15min，加正己烷100ml，涡旋600s，静置30min，10000rpm离心10min～30min。弃去正己烷层，加乙醇200ml，涡旋1h，在55℃下蒸馏，获得具有抑菌活性的溶液约2ml，即提取液原液，结果见表1。实施例3抑菌试验采用抑菌圈法，加实施例1得到的提取物原液60μl。取0.1ml～1ml金黄色葡萄球菌标准菌株菌悬液(107cfu/ml)加到100ml冷却至45℃～50℃的营养琼脂中，混合均匀，倾注平板，水平静置凝固后备用。往孔中(φ6mm)注入提取物，37℃培养24h，测定抑菌圈大小，结果见表2。实施例4抑菌试验采用抑菌圈法，加实施例1得到的提取物原液60μl。取0.1ml～1ml大肠杆菌标准菌株菌悬液(107cfu/ml)加到100ml冷却至45℃～50℃的营养琼脂中，混合均匀，倾注平板，水平静置凝固后备用。往孔中(φ6mm)注入提取物，37℃培养24h，测定抑菌圈大小，结果见表2。实施例5最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration，mic)采用抑菌圈法，配制质量浓度为0.00(无菌水)、0.00078125、0.0015625、0.03125、0.0625、0.25、0.5(原液)mg/ml提取物溶液，加样体积为60μl。取0.1ml～1ml金黄色葡萄球菌标准菌株菌悬液(107cfu/ml)加到100ml冷却至45℃～50℃的营养琼脂中，混合均匀，倾注平板，水平静置凝固后备用。往孔中(φ6mm)注入提取物，37℃培养24h，测定抑菌圈大小，结果见表3。表1实施例1和2的提取结果组号除油剂提取剂提取物体积提取物浓度(mg/l)实施例1正己烷乙酸乙酯5500.8实施例2正己烷乙醇1.7140从表1中可以得出，选用乙酸乙酯提取物浓度是乙醇提取无物的3.6倍。用乙酸乙酯提取橄榄果渣滤液废水中抑菌物质的效果好。表2实施例3和4的提取物的抑菌结果组号标准菌株加样物质d/mm敏感度实施例3金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物21.52极敏感实施例4大肠杆菌乙酸乙酯提取物9.22低度注：根据抗菌药物敏感性试验执行标准，抑菌圈直径d＝6mm为不敏感，6mm＜d＜10mm为低度敏感，10mm≤d＜15mm为中度敏感，15mm≤d＜20mm为高度敏感，d≥20mm为极敏感从表2中可以得出，金黄色葡萄球菌对乙酸乙酯提取物极敏感，大肠杆菌对乙酸乙酯提取物低度敏感。表3实施例5的提取物的最低抑菌浓度结果组号标准菌株加样物质加样浓度(mg/ml)d/mm敏感度实施例5金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物0.006不敏感实施例5金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物0.000781256不敏感实施例5金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物0.00156259.3低度实施例5金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物0.0312512.80中度实施例5金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物0.062514.92中度实施例5金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物0.2518.54高度实施例5金黄色葡萄球菌乙酸乙酯提取物0.521.52极敏感注：根据抗菌药物敏感性试验执行标准，抑菌圈直径d＝6mm为不敏感，6mm＜d＜10mm为低度敏感，10mm≤d＜15mm为中度敏感，15mm≤d＜20mm为高度敏感，d≥20mm为极敏感从表3中可以得出，乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.00078125mg/ml。对比例1乙酸乙酯组，抑菌试验采用抑菌圈法(同实施例1)，加乙酸乙酯60μl，抑菌结果见表2。对比例2橄榄果渣滤液(制备方法同实施例1)，抑菌试验采用抑菌圈法(同实施例1)，加原液60μl，抑菌结果见表2。对比例3橄榄果渣滤液提取物(制备方法同实施例1)，抑菌试验采用抑菌圈法(同实施例1)，加橄榄果渣滤液提取物60μl，抑菌结果见表4。表4抑菌结果注：根据抗菌药物敏感性试验执行标准，抑菌圈直径d＝6mm为不敏感，6mm＜d＜10mm为低度敏感，10mm≤d＜15mm为中度敏感，15mm≤d＜20mm为高度敏感，d≥20mm为极敏感从表4中可以得出，金黄色葡萄球菌对提取溶剂乙酸乙酯不敏感，对橄榄果渣滤液原液敏感度极低，对橄榄果渣滤液提取物极敏感。由以上实施例可以得出，采用本发明提供的方法能够从橄榄果渣中提取得到多酚类物质，每100ml橄榄果渣滤液中能够提取得到5～6ml提取物，提取物能够抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，增加了橄榄的附加值，而且不会造成环境污染。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12