本发明涉及冻精领域，具体涉及一种冻精细管装入指形管的方法。
背景技术：
种公畜繁殖性能在很大程度上决定了饲养群体的生产水平，俗话说，母猪好，好一窝；公猪好，好一坡。自然繁殖过程中每年需要饲养数量较大的种公畜以满足养殖企业母猪配种的需要，极大地增加了企业的养殖成本。尽管精液采集、稀释、常温保存及人工授精技术可以提高种公畜的利用效率，减少公畜的饲养数量，间接提高企业的养殖效益。然而，鲜精常温保存时间有限，保存过程中质量变化大，不利于公畜精液利用效率的进一步提高。因此，精液超低温冷冻保存技术可以进一步提高精液的利用效率。
此外，2018年我国大范围爆发“非洲猪瘟”疫情，大部分饲养洋猪的企业损失巨大，部分地方猪也受到重创。在这种大背景下，在地方猪活体保种基础上对其遗传资源进行保护已势在必行。精液冷冻是一种重要的保存雄性动物遗传资源的生物保种技术，冷冻精液可以提高优秀个体的使用效率，提高优秀种公畜的使用年限，可以改变家畜配种方式，打破季节性限制，实现优秀种公畜跨地区长距离使用。同时还降低了保种成本，提高保种效率，甚至可以用于突发传染病爆发的储备供应。
冷冻精液目前采用较多的是细管冻精，将精液与稀释液混合液体灌装入0.25ml或0.5ml细管并封口，使用程序化冷冻仪或其他方法设备使细管及其内部液体温度降低至-110℃～-150℃，然后投入液氮中。为方便冻精产品的管理与使用，通常冻精细管投入液氮后需要装入指形管中，每支指形管可以装入0.25ml细管27支或0.5ml细管11支。传统方法需要在液氮内操作，是一种水平方向装管的方法，操作人员手部需要悬在液氮正上方操作，装管效率低，耗时长，稍有不慎容易造成手部冻伤，并且液氮消耗量非常大，增加了冻精生产成本。
技术实现要素：
本发明的目的在于：提供一种冻精细管装入指形管的方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种冻精细管装入指形管的方法，具体步骤如下：
(1)组装装管工具
准备泡沫箱，塑料杯，将塑料杯开口朝上装入泡沫箱中；
向组装好的装管器中倒满液氮，液氮量至少盖过塑料杯口；
(2)冻精细管投入液氮
将冷冻好的冻精细管投入装满液氮的塑料杯中，冻精细管的棉塞端朝上投入；
(3)冻精细管装入指形管
使用长镊子夹取指形管慢慢浸入液氮，使其完全淹没在液氮中装有冻精细管的塑料杯中；用长镊子将冻精细管逐支提起装入指形管中，棉塞端朝上即可。
优选地，步骤(1)中泡沫箱的尺寸为：长20cm、宽10cm、深15cm。
优选地，步骤(1)中塑料杯的尺寸为：直径9cm、深度12cm。
优选地，步骤(2)中冻精细管在塑料杯中的摆放方式为同一方向，即冻精细管的棉塞端同向摆放。
优选地，步骤(2)中冻精细管的冷冻是经过程序化冷冻仪或熏蒸法冷冻的。
本发明的有益效果在于：
本发明的冻精细管装入指形管的方法，是一种垂直方向装管的方法，使用一定尺寸的泡沫盒、塑料杯及长镊子，将冻精细管提起快速装入指形管，可以在不影响冻精质量的情况下提高装管效率，防止手部冻伤等安全事故的发生，减少液氮的损耗。
具体实施方式
1.配制解冻液
①使用电子天平准确称取2g田园奥瑞冻精试剂e，溶入40ml纯水中，使用磁力搅拌器搅拌，使其充分溶解；
②使用1000μl移液器将配制好的解冻液分装入15ml离心管中，0.25ml冻精细管对应2.5ml解冻液,0.5ml冻精细管对应5ml解冻液；
③分装好的解冻液旋紧离心管盖置于37℃水浴锅中预热。
2.组装装管工具
①准备长20cm宽10cm深15cm的泡沫箱一只，直径9cm深度12cm塑料杯两只，将塑料杯开口朝上装入泡沫箱中；
②向组装好的装管器中倒满液氮，液氮量至少盖过塑料杯口。
3.冻精细管投入液氮
经过程序化冷冻仪或熏蒸法冷冻好的冻精细管投入液氮中，注意冻精细管在码管器上的摆放方式应当是同一方向，即棉塞端同向摆放。投入液氮时，棉塞端朝上投入装满液氮的塑料杯中。
4.冻精细管装入指形管
使用长镊子夹取指形管慢慢浸入液氮，使其完全淹没在液氮中装有冻精细管的塑料杯中。用长镊子将冻精细管逐支提起装入指形管中，棉塞端朝上。一支指形管可以装入0.5ml冻精细管11支或0.25ml冻精细管27支。
5.精子冻后活力检测
①使用25cm长镊子夹取装好的冻精细管立即投入50℃水浴锅中快速摆动15s；
②擦去冻精细管表面水分，用剪刀剪去封口端，将液体推入提前预热的解冻液中，混匀；
③吸取5μl，滴加入猪仙子细胞计数板腔室中，用猪仙子zxz-8001全自动精子分析仪检测活力。
6.装管效率比较
使用计时器计时统计，1分钟内传统装管方法与本方法的装管数量。比较两种方法的装管效率，结果如表1所示：
表1.传统装管方法与新型装管方法装管效率比较
7.精子冻后活力损失率比较
分别解冻传统装管方法与本方法装管后的冻精，计算冻后精子活力与鲜精活力差值，比较两种装管方法的精子冻后活力损失率，结果如表2所示：
活力损失率＝(鲜精活力-解冻后活力)/鲜精活力
表2.传统装管方法与新型装管方法解冻后精子活力损失比较
结果分析：
结果表明，与传统装管方法对比，本发明的装管方法液氮消耗量降低，装管效率提高47.4％，解冻后精子活力没有明显降低。所以，本发明的装管方法明显优于传统装管方法，具有简单经济高效的特点。
1.一种冻精细管装入指形管的方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)组装装管工具
准备泡沫箱，塑料杯，将塑料杯开口朝上装入泡沫箱中；
向组装好的装管器中倒满液氮，液氮量至少盖过塑料杯口；
(2)冻精细管投入液氮
将冷冻好的冻精细管投入装满液氮的塑料杯中，冻精细管的棉塞端朝上投入；
(3)冻精细管装入指形管
使用长镊子夹取指形管慢慢浸入液氮，使其完全淹没在液氮中装有冻精细管的塑料杯中；用长镊子将冻精细管逐支提起装入指形管中，棉塞端朝上即可。
2.根据权利要求1所述的一种冻精细管装入指形管的方法，其特征在于：步骤(1)中泡沫箱的尺寸为：长20cm、宽10cm、深15cm。
3.根据权利要求1所述的一种冻精细管装入指形管的方法，其特征在于：步骤(1)中塑料杯的尺寸为：直径9cm、深度12cm。
4.根据权利要求1所述的一种冻精细管装入指形管的方法，其特征在于：步骤(2)中冻精细管在塑料杯中的摆放方式为同一方向，即冻精细管的棉塞端同向摆放。
5.根据权利要求1所述的一种冻精细管装入指形管的方法，其特征在于：步骤(2)中冻精细管的冷冻是经过程序化冷冻仪或熏蒸法冷冻的。