一种快速检测萝卜不育系纯度的方法与流程

1.本发明属于蔬菜遗传育种技术领域，尤其是一种萝卜不育系纯度的快速检测方法。


背景技术：

2.萝卜(raphanus sativus l.)，属十字花科萝卜属，一、二年生草本植物。我国是全球最大的萝卜生产国，常年种植面积约1950万亩。虽然我国萝卜栽培面积大，但缺乏优良的萝卜品种，严重依赖国外进口品种，这也促使国内育种单位加大了对萝卜育种的力度，加速萝卜优良品种的选育。
3.萝卜具有明显的杂种优势，主要利用自交不亲和系和雄性不育系繁制杂交种。在利用自交不亲和系制种时，亲本的自交不亲和性易受高温及干旱影响，从而产生一定的自交率，影响杂交种子的纯度。采用雄性不育系制种能够解决这一问题，不仅可以提高杂交种子的纯度，还可以防止亲本流失，保护育种者的利益(张丽等，2020)。不育系材料的纯度可以直接影响后期繁种、制种，而常规雄性不育系选育过程具有严重的季节限制，需要在第二年春季萝卜开花期对杂交及回交后代进行育性鉴定，需要一整季的时间去鉴定。因此，针对萝卜雄性不育系材料纯度提出快速鉴定的方法十分必要，且通过本方法可打破季节限制，在当代种子收获后即可鉴定不育系的纯度，大大缩短了鉴定时间。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于克服萝卜原先的生长周期，通过对萝卜不育系材料的种子进行春化处理促使其提前开花，从而提出一种快速检测萝卜不育系纯度的方法，耗时短，方法简单。
5.一种快速检测萝卜不育系纯度的方法，包含以下步骤：
6.(1)材料准备
7.(1.1)挑选萝卜不育系材料种子。
8.(1.2)将备好的种子催芽，使其萌动即可。
9.(2)春化处理
10.春化温度与春化时间对萝卜后期抽薹开花影响较大，一般在0～6℃下10～20天就可使萝卜种子经历春化阶段从而提前抽薹开花。温度过高或过低以及春化时间较短都不利于萝卜提前开花，因此控制温度与时间是提早萝卜先期抽薹开花的有力措施。
11.(2.1)精确控温：将萌动的种子放入冰箱中，温度设定为4℃。
12.(2.2)适时控湿：种子放入冰箱后要控制种子表面湿度，湿度过高易引起种子徒长，湿度过低也会对种子造成不良影响。
13.(2.3)根据前期对萝卜不育系材料的性状调查以及春化实验数据整理统计，将耐抽薹的萝卜不育系种子放置4℃冰箱25天，将易抽薹的萝卜不育系种子放置4℃冰箱15天。
14.(3)田间播种
15.在播种时，将不同材料的种子分别播在不同的小区内。采用膜下滴灌，水肥一体化，5-10天浇水一次。
16.(4)指标统计
17.播种后要及时观察材料，播种后2个月左右统计各个材料的开花数，并计算开花率(开花株数/全部出苗数*100％)。此外，需及时记录各个植株的育性，并计算不育率(不育株数/全部开花株数*100％)，不育率越高说明纯度越佳。
18.进一步，步骤(1)中要挑选颗粒饱满，质量佳的种子用于后期操作；
19.进一步，步骤(2)中要每天观察材料，注意把控种子表面湿度，使种子保持最佳将状态，且先将耐抽薹型萝卜种子放置冰箱处理10天后再将易抽薹型萝卜不育系材料放置于冰箱处理15天，使其同一时间播种，以便后期统计；
20.进一步，步骤(3)中在苗期要注意防治病虫害，特别是菜青虫，后期也要定期追肥。
21.进一步，步骤(4)观察、统计不育率时，要在晴天的上午十点左右进行。
22.本发明与现有技术相比较，本发明的实施效果如下：
23.(1)与传统方式相比，原有的方法耗时周期长，效率低；(2)与分子标记快速鉴定相比，虽然分子标记技术能在苗期快速鉴定，但该方法操作复杂，前期投入大，成本高；(3)与一般春化方法相比，一般春化方法较为粗犷，精准度低。
24.综上所述，本方法操作简单，经济高效，且耗时短，使用本方法只需70-80天左右即可完成萝卜不育系纯度的快速检测，能够有效提高萝卜育种工作者的育种质量，加快育种进度。
附图说明
25.图1为田间拍摄的萝卜不育株；
26.图2为田间拍摄的萝卜不育系材料中发现的可育株。
具体实施方式
27.下面结合具体实施方式对本发明内容作进一步说明：
28.(1)材料准备
29.(1.1)在当代繁制的萝卜不育系材料中挑选出色泽佳，颗粒饱满的种子。
30.(1.2)挑选出饱满健壮的种子后，采用“温汤浸种法”对种子进行消毒，随后将种子平铺在湿润的纱布中置于28℃的发芽箱中进行催芽12小时，待其稍微露白后将种子放置在铺有滤纸的培养皿中。
31.(2)春化处理
32.(2.1)精确控温：选用控温条件较好的冰箱作为本次的试验设备，温度设为4℃。将盛有种子的培养皿放入冰箱中，同时也将酒精温度计放入其中，以便后期随时监控冰箱内温度。
33.(2.2)适时控湿：在将培养皿放入冰箱前应将其中的滤纸湿透。在整个试验期内至少保证每天观察一次培养皿中的滤纸，如若滤纸较干可将其喷湿从而保持滤纸湿润，如若湿度较大则需控水，并随时观察。
34.(2.3)根据前期对萝卜不育系材料的性状调查以及实验数据整理统计，萝卜不育
系材料可分为耐抽薹型与易抽薹型，先将耐抽薹的萝卜不育系种子放置4℃冰箱10天后再将易抽薹的萝卜不育系种子放置4℃冰箱继续春化15天。
35.(3)田间播种
36.春化处理完毕后，分别将这两个材料的种子播在不同的小区。采用膜下滴灌，水肥一体化，5-10天浇水一次。在苗期要注意病虫害防治，在开花初期以磷钾肥为主，同时在盛花期注意补充硼肥。
37.(4)指标统计
38.播种后2个月左右统计各个材料的开花数，并计算开花率(开花株数/全部出苗数*100％)。此外，在晴天上午10点左右统计各个材料全部开花植株的育性，并计算不育率(不育株数/全部开花株数*100％)(表1)。
39.表1不同材料的开花率及不育率
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以上仅是本发明的具体应用范例，对本发明的保护范围不构成任何限制。凡采用等同变换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之内。