一种抗病灵芝孢子粉菌株选育方法
1.技术领域
2.本发明属于菌株选育方法领域，尤其涉及一种抗病灵芝孢子粉菌株选育方法。
[0003]
背景技术：
[0004]
灵芝(ganoderma lucidum)担子菌纲多孔菌目多孔菌科灵芝属真菌。是我国传统中医药产品，东汉时期的古医书《神农本草经》将其列为有效无毒的上品。孢子粉是灵芝生殖细胞，具有灵芝遗传活性物质。近60年孢子粉的药用价值受市场关注，栽培面积越来越大，病害对灵芝栽培危害也越来越重。研究表明我国有食用菌病害110种，包括真菌，病毒，细菌，粘菌四大类，灵芝主要病害有青霉，绿霉，木雩等真菌，在灵芝栽培各个阶段都有发生，生长期侵染灵芝菌蕾，消耗菌材养料，分泌毒素，抑制菌丝发育，灵芝子实体，菌柄和菌盖下层多孔组织均可受其感染，造成子实体刁亡，孢子粉减产，绝收。
[0005]
灵芝病害防治有选育抗病菌株，调控栽培条件，药剂防治等措施，由於灵芝也是真菌，药剂选择受到很大限制，对病原菌有效的药剂对灵芝真菌也有药害和抑制作用。食品安全也不允许使用对灵芝产品使用有害药剂。防治灵芝病害最有效方法是选育应用抗病菌种。但现有灵芝菌种中没有抗病优良菌株，也没有抗病灵芝孢子粉菌株选育方法。抗病菌株选育是灵芝孢子粉生产发展迫切要求解决的技术难题。
[0006]
技术实现要素：
[0007]
本发明实施例的目的在于提供一种抗病灵芝孢子粉菌株选育方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
[0008]
为实现上述目的，本发明实施例提供一种抗病灵芝孢子粉菌株选育方法，包括以下步骤：菌株选择：人工驯化野生灵芝，然后根据菌丝生长速度，菌落形态，耐高温表现、接种成活率选择抗病菌株；研究抗病菌株抗病能力：在灵芝病区，用段木培养基，在灵芝发育芝芽期、菌盖期、产孢期三个阶段研究菌株抗病能力，选育抗病菌株；应用效果研究：将选育抗病菌株进行生产性试验，检验菌株抗病效果实用性。
[0009]
优选地，所述人工驯化野生灵芝的操作步骤为：采集野生灵芝、组织分离和培养菌株。
[0010]
优选地，所述采集野生灵芝的条件为：采集地在日平均气温≥10℃，年有效积温在≥5700℃，年降雨量1650mm以上，森林复盖率70%以上亚热带山区，生长在朽木树桩上赤芝；灵芝菌盖10
‑
15cm，白色生长圈3cm，盖厚1cm以上，底部米黄色，发育健壮灵芝。
[0011]
优选地，所述组织分离：将灵芝菌柄基部切断，75%洒精浸泡，消毒棉花擦冼，用手术刀削去子实体皮壳，切成黄豆大小颗粒，经火焰消毒，移接到pda试管培养。
[0012]
优选地，所述培养菌株为：所述组织分离获得a301
‑
a306六个菌株；进行斜面菌丝转接，置27℃培养室，培养8天，测试菌丝形态。
[0013]
优选地，在芝芽期顶端白色鲜艳，长势健壮，评定存活，顶端灰黑色，芝芽萎缩评定死亡；菌盖期，盖边白色生长圈鲜艳，菌盖长势健壮，评定存活，盖边生长圈灰黑色，菌盖萎缩，评定死亡；产孢期，棚内温度25
‑
29℃时，菌盖下面菌管孔大量喷射孢子，菌盖底部黄色，评定存活，菌盖下面菌管孔不喷射孢子，菌盖底部灰黑色评定死亡。
[0014]
优选地，在研究抗病菌株抗病能力的过程中，在灵芝病区，灵芝栽培三年以上，环境中有机物质、土让，空气有大量青霉，绿链霉，木霉等病菌存在，用段木培养基。
[0015]
综上所述，由于采用了上述技术方案，具有以下有益效果：本发明实施例提供了一种抗病灵芝孢子粉菌株选育方法，通过本发明中的选育方法所得到的菌株孢子粉产量高，有良好繁殖孢子粉能力；通过本发明选育的菌株在芝芽期、菌盖期、产孢期的成活率高，有良好抗病能力。
具体实施方式
[0016]
为了使本发明实施例的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明实施例进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明实施例，并不用于限定本发明实施例。
[0017]
实施例1采集野生灵芝：采集地在日平均气温15℃，年有效积温在5800℃，年降雨量1650mm以上，森林复盖率70%以上亚热带山区，生长在朽木树桩上赤芝。灵芝菌盖15cm，白色生长圈3cm，盖厚1cm以上，底部米黄色，发育健壮灵芝。
[0018]
组织分离：将灵芝菌柄基部切断，75%洒精浸泡，消毒棉花擦冼，用手术刀削去子实体皮壳，切成黄豆大小颗粒，经火焰消毒，移接到pda试管培养。
[0019]
菌株试验，组织分离获得a301
‑
a306六个菌株。进行斜面菌丝转接，置27℃培养室，培养8天测试菌丝形态。结果如表1所示。
[0020]
表1编号
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形态颜色密度生长速庹（cm/d）a301平铺紧贴白色++++1.98a302平铺
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白色+++1.65a303绒毛状
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白色+++1.38a304平铺
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白色++1.92a305平铺灰色++1.30a306平铺紧贴白色++++1.93试验表明：灵芝驯化a301菌丝形态，颜色，密度好，发展快，菌丝生长速度1.98（cm/d）。
[0021]
将a301，与生产上应用的菌株b201为对照，研究菌株繁殖孢子能力。结果如表2所示。
[0022]
表2
菌株编号菌材段数菌材重量kg灵芝朵形采收孢子粉kg100kg段木孢子粉产量kg比较%b20130240盖径10
‑
13cm园形，底色米黄44.41.85100a30130240盖径13
‑
15cm，扇形底色金黄52.82.20118.9
试验表明；100kg段木孢子粉产量，a301孢子粉产量高于对照菌株18.9%，具有良好繁殖孢子能力。
[0023]
将选育的培育孢子粉菌株在病区进行抗病试验。
[0024]
试验地点：灵芝病区，灵芝栽培三年以上，环境中有机物质、土让，空气有大量青霉，绿链霉，木霉等病菌存在；用段木培养基。
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参试菌株：a301野生灵芝驯化；对照菌株b201龙泉当地应用生产菌株。
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试验方法：按”段木灵芝生产技术规程”完成树种选择，菌段制作，装袋灭菌等工序，菌段重8kg，参试菌株a301和b201接种段木发菌。
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a301和b201各选择发菌良好，无杂菌污染菌段50段，埋土栽培试验。
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建高2m芝棚，先盖一层尼龙膜，再加盖一层遮阳网；做好灵芝地喷水，通风等措施，调节棚内温湿度，温度控制在28℃，空气相对湿度85%。
[0029]
灵芝生长芝芽时修剪，一段菌材留一个芝芽，培育一个灵芝。在芝芽，菌盖，产孢三个阶段，测试菌株抗病能力。
[0030]
菌株抗病能力测定方法，芝芽期顶端白色鲜艳，长势健壮，评定存活；顶端灰黑色，芝芽萎缩评定死亡。菌盖期，盖边白色生长圈鲜艳，菌盖长势健壮，评定存活；盖边生长圈灰黑色，菌盖萎缩，评定死亡。产孢期，棚内温度28摄氏度时，菌盖下面菌管孔大量喷射孢子，菌盖底部黄色，评定存活；菌盖下面菌管孔不喷射孢子，菌盖底部灰黑色评定死亡。
[0031]
孢子粉产量计算：灵芝子实体发育成熟，白边消失，扎袋套筒培育孢子粉，套筒90天采收，以孢子粉干重与段木培养基之比计算孢子粉产量，湿重孢子粉85%折干。
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试验结果菌株抗病能力如表3所示。
[0033]
表3
试验表明：病区两年栽培试验，a301比对照芝b201芽期成活率比对照高55%。菌盖期高73.2%，产孢期高82.6%。a301有良好抗病能力。
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孢子粉产量如表4所示。
[0035]
表4试验表明：a301菌株段木栽培两年孢子粉产量比对照菌株b201高33.2%%，有良好抗病能力。
[0036]
应用效果检验：抗病菌株a301，与对照菌株b201各栽培段木16000kg，检查两年孢子粉产量计算栽培效益。结果如表5所示表5
应用效果表明：16000kg段木栽培，抗病菌株a301两年采收孢子粉690kg，高于对照菌株141.3%、销售收入69000元，高于对照菌株164.37%，增收利润20666元，高於对照菌株的153.57%，具有良好经济和社会效益，方法有良好实用性。
[0037]
综上所述：本发明实施例提供了一种抗病灵芝孢子粉菌株选育方法，通过本发明中的选育方法所得得到的菌株孢子粉产量高，有良好繁殖孢子粉能力；通过本发明选育的菌株在芝芽期、菌盖期、产孢期的成活率高，有良好抗病能力。
[0038]
对于本领域技术人员而言，显然本发明实施例不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明实施例的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明实施例。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明实施例的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明实施例内。
[0039]
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。