为限制与非生物和/或生物胁迫有关的干物质损失而对栽培植物进行预防性处理的方法与流程

1.本发明涉及栽培植物领域，特别是在田间，并涉及防止与所述栽培植物暴露于非生物和/或生物胁迫有关的有害影响，特别是干物质的损失，即每公顷，以及产量的减少。因此，本发明涉及一种为限制与非生物和/或生物胁迫有关的干物质损失而对栽培中的植物进行预防性处理的方法。其还涉及一种用于实施该方法的包含至少一种表面活性剂和植物甾醇混合物的浆液，以及用于制造所述组合物的基液。


背景技术：

2.植物，也就是作物，特别是观赏植物，会受到各种胁迫。特别是，植物经常暴露在环境中，无法逃避非生物胁迫源(干旱、寒冷、霜冻、盐度等)。同时，它们也暴露在生物胁迫源下，即由生物或有害生物(病毒、真菌、细菌、昆虫、害虫)的有害作用产生的胁迫。
3.一般来说，这些非生物和生物胁迫会引起植物的形态、生理、生化和分子变化，导致每公顷作物产量减少，即干物质产量减少。
4.换句话说，与在最佳条件(控制水的摄入量、昼夜周期、不受到非生物和/或生物胁迫等条件)下栽培的植物相比，例如在田间栽培的植物受到这些不同的胁迫，特别是具有植物干物质生产减少的影响。
5.为了抵抗非生物胁迫，特别是水胁迫(或干旱)，农民通过简化轮作和偏爱冬季作物进行了调整。这种简化的第一个后果是增加了外来物种(杂草)和害虫对植物药产品的抗性风险，但也增加了一年中同一时间大量施用产品造成水污染的风险。第二个后果是，与生产蛋白质的植物(豆类)相比，生产淀粉的植物(尤其是稻草谷物)的种植不均衡。此外，为了抵抗干旱，农民采用大面积灌溉作物的方式，这造成了生态和经济问题。
6.为了抵抗生物胁迫，农民使用借助自然机制的化学或生物防治的植物药产品。然而，鉴于化学品对人类健康和环境的潜在毒性，在农业中使用化学品是有争议的，因此有必要尽可能地限制这些产品的使用量，同时尽可能地优化其效果。
7.已经提出了治疗性处理，包括在植物暴露于生物或非生物胁迫之后，对其施用表面活性剂和/或植物甾醇的混合物。例如，ep 2,183,959或甚至jp s51 57556的文件中只描述了表面活性剂的应用。griebel等人或vriet等人的文件中描述了至少一种植物甾醇的应用。文件wo 2018/229710、cn 103,563,929、fr-a-3,069,756和fr-a-3,069,757描述了植物甾醇和表面活性剂的混合物的应用。
8.也有人提出在生物或非生物胁迫发生之前将组合物应用于受到该胁迫的植物，即作为一种预防性处理。例如，ebad等人的文件描述了这样的实验：在暴露于盐胁迫(非生物胁迫)之前，将葵花籽浸泡在仅包含β-谷甾醇的组合物中。这使得盐胁迫对植物生长的有害影响减少。
9.最后，cn 103,563,929、jp h07 89808或kr 2011 0124174的文件中描述了对遭受生物胁迫的植物进行治疗性处理的方法，包括应用植物甾醇和表面活性剂的混合物作为所
述组合物的辅助剂。然而，这些文件中描述的组合物并不能使其保持预期的产量。
10.同样，目前为缩小田间栽培和最佳条件下栽培之间的产量差距而实施的手段之一是对植物进行遗传改良(转基因生物或gmo)，使其超越其遗传潜力。然而，这种修改植物基因组的方法仍有争议，在包括法国在内的某些国家禁止其种植。
11.因此，本发明要解决的问题是开发一种制剂和方法，用于处理从未经改良的种子培育的植物，以便有效地减少因暴露于非生物和/或生物胁迫而引起的干物质损失，并且该制剂和方法不表现出上述缺点。


技术实现要素：

12.申请人发现，令人惊讶的是，基于植物甾醇混合物(包括β-谷甾醇)和至少一种表面活性剂的浆液作为预防措施(即在胁迫发生之前)应用于栽培中的植物，可以减少非生物和/或生物胁迫的有害影响，特别是干物质的损失以及每公顷产量的减少。
13.特别是出乎意料的是，根据本发明的混合物和处理方法能全面加强植物的活力。根据环境条件的不同，这种效应可能导致在作物被置于胁迫条件下时仍能保持最佳产量。换句话说，这是为了在每一个气候环境下的预期下保持产量，特别是干物质的生产。根据一个基本特征，当植物在最佳条件下栽培时，根据本发明的浆液和处理方法不会引起产量的增加。换言之，本发明不允许植物在没有或有胁迫的情况下超过其遗传潜力。下面的描述和实例特别表明，本发明的效果导致了植物的适应性(生理、生长、代谢等)，使其能够抵抗非生物和/或生物胁迫，并保持干物质的产量。
14.本发明涉及一种为限制与非生物和/或生物胁迫有关的干物质损失而对栽培植物进行预防性处理的方法，包括在所述非生物和/或生物胁迫发生之前，向植物施用一种包括以下内容的浆液：
[0015]-水；和
[0016]-包含至少一种表面活性剂和包括β-谷甾醇的植物甾醇混合物的基液。
[0017]
就本发明而言，“栽培植物”这一表述是与自然生长的植物相对的，因此，其指的是人类能够栽培(即播种、种植和开采)的所有植物。
[0018]
有利地是，为了本发明的目的，植物是在田间或受控条件下(例如在水培、盆栽、温室中)栽培的；优选根据本发明的植物是在田间栽培的。
[0019]
就本发明而言，术语“浆液”是指根据本发明的基液在水中或在包含水和一种或多种活性成分的溶液中稀释。换言之，浆液包括本发明的基液、水和可选的一种或多种活性成分。
[0020]
一般来说，非生物胁迫是导致干物质产量/生产下降的原因，是由干旱(缺水或水胁迫)、极端温度(热胁迫)、过量的水(洪水或“淹没”)、霜冻、风、土壤盐度(盐胁迫)、紫外线辐射、某些营养物质获取不足、土壤具有胁迫性特征(化学成分、氧化还原电位等)或机械损伤造成的，有利地是由干旱和/或极端温度造成的。
[0021]
根据一个特定的实施方案，非生物胁迫是水胁迫。根据另一个特定的实施方案，非生物胁迫是热胁迫。
[0022]
就本发明而言，“在非生物胁迫发生之前”这一短语，特别是就水胁迫而言，是指土壤中可用的水储备被适当填充的时期，也就是说，从可用的水储备完全充满(田间容量)的
时刻到萎蔫点之间的时期。
[0023]
就本发明而言，“在非生物胁迫发生之前”这一短语，特别是就热胁迫(或极端温度)而言，是指根据每个植物品种和这些品种的每个发育阶段，在冻敏和/或烫伤点之前的时期。换言之，这些是不利于植物生长和发育的温度，而不考虑任何其他的生长条件，例如，水分的摄入。
[0024]
关于干旱，申请人观察到根据本发明的混合物，作为预防措施应用于栽培植物，即在非生物胁迫发生之前，使得有可能诱导气孔的关闭，从而减少蒸腾作用。因此，植物的耗水量减少而不影响产量，即干物质的产量。
[0025]
换言之，本发明还涉及一种减少在水胁迫条件下栽培植物的水消耗的方法，包括在水胁迫发生之前将上述浆液施用于所述植物。
[0026]
在实际中，根据本发明的浆液(特别是植物甾醇，特别是β-谷甾醇)所发挥的生物机制刺激植物的活力，为植物提供更好的对水胁迫的抗性：
[0027]-对根系发育的刺激使得植物可以扩大其可获得的水分储蓄。
[0028]-β-谷甾醇在植物体内发出的信息促使气孔部分关闭，从而限制了蒸腾作用下的水分流失。
[0029]
就本发明而言，“刺激植物的活力”是指，例如，刺激植物的各种代谢途径，使植物对水胁迫有更好的抗性。
[0030]
有利地是，上述的生物机制会提高植物的整体活力。
[0031]
因此，植物可获得的水分储蓄的规模和该水分储蓄的消耗速率受信号的调控，这些信号的传递涉及植物甾醇，特别是β-谷甾醇。这两种机制导致了植物对其可获得的水分的消耗的优化。
[0032]
更具体地说，观察到了耐水胁迫的效果，特别是由本发明中使用的β-谷甾醇以及在暴露于胁迫之前施用浆液所产生的效果。
[0033]
根据一个特定的实施方案，导致干物质产量/生产下降的生物胁迫可能来自于生物体对栽培植物的有害作用，无论是真菌和/或细菌和/或病毒感染和/或害虫攻击和/或与杂草竞争。
[0034]
举例来说，植物的真菌感染是藤本植物、西红柿、马铃薯上的霜霉病，或者是小麦上的斑斑病(septoria)、大麦上的轮纹病(rynchosporia)或稻草谷物和葡萄上的白粉病；植物的细菌感染是冠瘿病、腐烂病甚至火烧病；植物的病毒感染可能是花叶病甚至黄矮病；能够攻击栽培植物的害虫是蚜虫、跳甲甚至象鼻虫。
[0035]
特别是，根据本发明的浆液可以减少真菌病害的强度，有利地是不影响其频率。
[0036]
就本发明而言，“在生物胁迫发生之前”，特别是在真菌感染的情况下，是指第一个症状出现之前的时期，例如，在栽培植物的叶子和/或茎上出现第一个斑点之前。
[0037]
就本发明而言，“真菌病害的强度”这一表述是指栽培植物的所有叶片上的病害强度的平均值。叶片上的病害强度是指该叶片被病害覆盖的面积。
[0038]
就本发明而言，“真菌病害的频率”这一表述是指观察到病害/病斑出现的叶片数量。
[0039]
从上述内容可以看出，在植物感染，特别是真菌感染发生前施用根据本发明的浆液，与未接受根据本发明的预防性处理的植物相比，可确保减少斑点/叶片变色的面积。
[0040]
申请人还观察到，根据本发明的浆液改善了植物的生长和发育，特别是当浆液在胁迫发生之前应用时，改善了幼苗的生长和发育。特别地，当通过浸泡种子来施用浆液时，这些改善更加有利。
[0041]
因此，本发明还涉及一种刺激幼苗生长和发育的方法，包括在非生物和/或生物胁迫发生之前，优选通过浸泡种子来施用上述混合物。因此，根据本发明的方法可以限制幼苗暴露在非生物和/或生物胁迫下的时间。此外，通过浸泡种子施用的产品的效果会持续一段时间，因为用本发明的组合物处理的植物对非生物和/或生物胁迫的耐受性更强。
[0042]
实际上，在非生物和/或生物胁迫方面，幼苗比成年植物更脆弱。接受过根据本发明的混合物处理的幼苗比没有接受过这种处理的幼苗更快地达到所谓的完全成熟状态(“成年”状态)。有利地是，包含在根据本发明的浆液中的表面活性剂有利于通过种子包膜的屏障，甚至有利于其包膜的破裂，从而加速发芽。然后，植物甾醇混合物(特别是β-谷甾醇)的外源性摄入可能刺激幼苗的生长和发育。
[0043]
从上述情况可以看出，幼苗可能遭受胁迫的时期减少了。
[0044]
根据本发明的化合物不是具有特定活性的产品，例如，杀真菌剂或甚至杀生物剂，这一事实使得在大量要考虑的作物上使用广谱性的产品成为可能，特别是这可以改进保护措施，从而提高小作物的收益率，对于这些小作物，可用的植物保护产品数量几乎为零。
[0045]
在实际中，根据本发明的浆液通过叶面喷洒、洒水、灌溉、浸泡种子、包被种子、滴水或重力浇灌栽培植物、添加到水培的培养基中或甚至浸泡来施用。
[0046]
就本发明而言：
[0047]
‑“
叶面喷洒”是指加压的浆液投射形成大量的微滴，然后覆盖在叶片的上侧和/或底部。
[0048]
‑“
灌溉”是指由植物的根系捕获土壤溶液中的水分供应；以及
[0049]
‑“
浸泡种子”是指将种子浸泡在包含该组合物的溶液中。
[0050]
有利地是，浆液以0.1l/ha至15l/ha的比率，优选以1l/ha至5l/ha的比率通过叶面喷洒施用在栽培植物上，优选在植物叶片的地面覆盖阶段。根据一个特定的实施方案，根据需要多次施用浆液，以对抗栽培植物在其生命中所遭受的所有非生物和/或生物胁迫，即直到它变得干枯或枯萎。
[0051]
有利地是，根据本发明的浆液仅通过叶面喷洒和/或灌溉和/或浸泡种子施用一次。
[0052]
根据一个特定的实施方案，栽培植物是叶绿素植物，有利地选自由如下组成的组：谷物、油料和蛋白质作物的大宗作物的植物；藤本植物；根茎植物；园艺植物；草皮植物；菜类植物；芳香剂和香料植物；旨在生产原料以将其转化的树木栽培或工业栽培植物。
[0053]
优选地，栽培植物选自由大豆、玉米、大麦、小米、匈牙利草、芒属植物、黍属植物、高粱、花生、小麦、油菜籽、向日葵、蛋白豌豆(protein peas)、紫花豌豆(field peas)、蚕豆(field bean)、羽扇豆、亚麻、截短苜蓿、葡萄、甜菜、马铃薯、豆类、莴苣、欧芹、水稻、萝卜、果树和观赏性植物组成的组。
[0054]
根据一个实施方案，植物甾醇混合物包括β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和菜籽甾醇。
[0055]
有利地是，β-谷甾醇占植物甾醇混合物质量的至少30％，优选占至少35％，补足植
物甾醇至100％的补充物在适当的情况下包括，特别是菜油甾醇、豆甾醇和菜籽甾醇。
[0056]
举例来说，根据本发明的植物甾醇混合物对应于从含油种子如大豆、松树、向日葵或油菜籽种子中获得的植物甾醇提取物。举例来说，可以提到cas号为949109-75-5的原料。
[0057]
根据一个实施方案，所述至少一种表面活性剂选自由如下组成的组：阴离子表面活性剂，有利地是那些极性头部是羧酸盐、磺酸盐或硫酸化醇的阴离子表面活性剂；阳离子表面活性剂，有利地是那些极性头部是胺、季胺或季铵酯的阳离子表面活性剂；两性表面活性剂，有利地是甜菜碱或磷脂衍生物；中性表面活性剂，有利地是乙氧基化物、烷醇胺、烷基葡糖苷、多元醇酯、烷基-单体和烷基-聚多糖苷或多元醇醚；天然表面活性剂，有利地是大豆卵磷脂或由氨基酸衍生的表面活性剂；和/或由天然原料合成的表面活性剂，有利地是多元醇衍生物，优选是糖和脂肪酸酯。
[0058]
有利地是，糖和脂肪酸酯是蔗糖硬脂酸酯、蔗糖棕榈酸酯及其聚酯。
[0059]
根据另一个特定的实施方案，根据本发明的方法包括在非生物和/或生物胁迫发生之前向植物施用浆液，所述浆液包括：
[0060]-一种混合物，其有利地包括β-谷甾醇，至少占混合物质量的30％，以及
[0061]
菜油甾醇、豆甾醇和菜籽甾醇；和
[0062]-至少一种表面活性剂，其包括蔗糖硬脂酸酯。
[0063]
有利地是，上述的至少一种表面活性剂是由蔗糖硬脂酸酯和蔗糖棕榈酸酯组成的混合物形式。
[0064]
根据一个特定的实施方案，在根据本发明的方法中使用的所述浆液的混合物的植物甾醇/表面活性剂质量比在0.01至5之间，有利地在0.1至2.5之间。
[0065]
根据另一个方面，本发明涉及一种用于实施上述方法的浆液，该浆液具体地包括水和由至少一种表面活性剂和包括β-谷甾醇的植物甾醇混合物组成的基液，成分如上所述。
[0066]
根据一个特定的实施方案，基液占浆液质量的1ppm至20％，有利地占1ppm至10％，以水或包含水和一种或多种活性成分的混合物作为补充物补足到100％。
[0067]
根据另一个方面，本发明涉及一种用于制造上述组合物的基液。在一个特定的实施方案中，所述基液是水包油乳液形式。乳液中的颗粒(或油滴)尺寸小于500μm，所述基液包括：
[0068]-水相，占基液质量的60％至95％，有利地包含防腐剂；
[0069]-油相，占基液质量的5％至40％，包含：
[0070]-至少一种表面活性剂；以及
[0071]-包括β-谷甾醇的植物甾醇混合物，
[0072]
所述基液的植物甾醇/表面活性剂混合物的质量比在0.01至5之间，有利地在0.1至2.5之间。
[0073]
在这个特定的实施方案中，基液是由构成油相的颗粒和植物甾醇混合物组成的乳剂形式。这些颗粒的尺寸小于500μm，有利地是小于200μm，优选小于100μm，特别是小于50μm，如果小于10μm则更好。
[0074]
根据一个特定的实施方案，颗粒的尺寸在0.1至10μm之间。
[0075]
术语“尺寸”是指颗粒的最大尺寸，即通过激光衍射确定的体积平均直径。
[0076]
有利地是，根据本发明的颗粒的尺寸小于植物气孔的尺寸(10μm左右)，以促进其渗透到所述植物中。根据本发明的一个特定实施方案，水相进一步包括防腐剂，有利地选自由苯甲醇或其盐类之一、苯甲酸或其盐类之一、脱氢乙酸或其盐类之一、水杨酸或其盐类之一以及山梨酸或其盐类之一组成的组。优选地，这种防腐剂占基液质量的0.1％至5％。
[0077]
从上述内容可以看出，根据本发明的浆液通过气孔和/或通过穿过角质层和/或通过栽培植物的根系吸收来渗入植物。
[0078]
在实际中，施用于植物的浆液是通过稀释基液而获得的。
[0079]
正如下文所见，如上所述，使用稳定的乳剂形式的构成浆液的基液，结合使用颗粒形式的表面活性剂/植物甾醇混合物，可以减少(有利地在田间施用的)β-谷甾醇的量，同时对非生物胁迫特别是水胁迫保持有效。
[0080]
在实际中，包含在基液中的水相占基液质量的60％至95％，有利地占70％至90％，优选占75％至88％。
[0081]
根据一个特定的实施方案，油相占基液质量的5％至40％，有利地占10％至30％，优选占12％至25％。
[0082]
出乎意料的是，申请人发现，根据本发明的表面活性剂改变了角质层的状态，使其具有渗透性，也就是说，它使植物甾醇混合物有可能渗透，从而到达叶片或植物的内部元素，例如，植物细胞。
[0083]
根据一个实施方案，根据本发明的植物甾醇和表面活性剂混合物与至少一种活性成分相结合。
[0084]
就本发明而言，术语“活性”是指使植物有可能抵抗非生物和/或生物胁迫的生物产品，有利地是：
[0085]-植物药产品，如生长调节剂、杀真菌剂、抑真菌剂、杀细菌剂、抑细菌剂、杀虫剂、杀螨剂、杀寄生虫剂、杀线虫剂、talpicide或甚至除草剂。
[0086]-基于自然机制的生物防治产品，使植物能够抵抗真菌感染、细菌感染、病毒感染、害虫攻击和/或与杂草竞争；优选杀真菌剂、抑真菌剂、杀细菌剂、抑细菌剂、杀虫剂、杀螨剂、杀寄生虫剂、杀线虫剂、talpicide或甚至除草剂；和/或
[0087]-营养物质，如微量元素或化肥。
[0088]
如前所述，浆液是指根据本发明的基液在水中或在由水和一种或多种活性成分组成的溶液中稀释。
[0089]
如前所述，栽培植物的传统处理方法特别包括在栽培植物上施用活性产品(植物药产品和/或生物防治产品和/或营养物质)，它们只通过与植物表面的相互作用而产生作用。它们不渗透到植物中，或通过被动扩散渗透到植物中，渗透率很低。
[0090]
出乎意料的是，申请人发现根据本发明的植物甾醇和表面活性剂与至少一种活性成分的结合有利于活性成分的扩散，通过前述的角质层和植物细胞膜通道机制被动渗透到植物细胞中。因此，根据本发明的浆液使更高浓度/数量的活性成分进入植物中成为可能。只要在胁迫发生之前喷洒，就可以观察到活性成分在植物中的系统作用，从而更好地控制非生物和/或生物胁迫。
[0091]
此外，浆液可能减少使用的活性成分的剂量，同时保证这些成分有更好的效果。
[0092]
该植物甾醇混合物以及表面活性剂具有上述相同的特性。
[0093]
根据一个特定的实施方案，油相占基液质量的0.5％至10％，有利地占0.5％至7％，优选占1％至5％。
[0094]
有利地是，在植物甾醇混合物中，β-谷甾醇的含量高于菜油甾醇、豆甾醇或菜籽甾醇(β-谷甾醇》菜油甾醇；β-谷甾醇》豆甾醇；β-谷甾醇》菜籽甾醇)。
[0095]
优选地，在混合物中，β-谷甾醇的含量高于菜油甾醇(β-谷甾醇》菜油甾醇)。
[0096]
在一个优选的实施方案中，β-谷甾醇占混合物质量的至少30％，菜油甾醇和豆甾醇各占混合物质量的至少15％，菜籽甾醇占混合物质量的至少1％。
[0097]
通过将合适的制剂与上述特定尺寸颗粒形式的植物甾醇载体化系统相结合，根据本发明的基液可以实现可能与活性成分结合的植物甾醇(特别是β-谷甾醇)的有效外源性供应。
[0098]
就本发明而言，“植物甾醇的载体化”是指通过水相运输疏水性的植物甾醇。
[0099]
为了促进植物甾醇(有利地是与活性成分结合的植物甾醇)渗透通过角质层，表面活性剂有利地占基液质量的0.2％至30％，优选占1％至20％，特别地占2.5％至15％。
[0100]
出乎意料的是，申请人发现，通过使用由蔗糖硬脂酸酯和蔗糖棕榈酸酯组成的混合物作为表面活性剂，根据本发明的基液通过角质层的渗透性得到进一步改善。
[0101]
在一个优选的实施方案中，该表面活性剂是一种混合物，包括：
[0102]-占表面活性剂质量20％至80％、有利地占70％的蔗糖硬脂酸酯，其单酯含量占蔗糖硬脂酸酯的20％至80％，有利地占70％，其余部分是二酯、三酯和/或聚酯的混合物；以及
[0103]-占表面活性剂质量20％至80％、有利地占30％的蔗糖棕榈酸酯，其单酯含量占蔗糖棕榈酸酯的20％至80％，有利地占30％，其余部分为二酯、三酯和/或聚酯的混合物。
[0104]
根据一个特定的实施方案，根据本发明的基液进一步包括至少一种选自包含如下的组的成分：
[0105]-至少一种流化剂，选自包含平均分子量在200-8000da之间，有利地在200-1000da之间，优选为400da的聚乙二醇的组；该流化剂有利地占基液质量的1％至15％，有利地占2％至8％；以及
[0106]-至少一种植物甾醇(或脂肪物质)增溶剂，选自包含油醇、油酸、亚油酸和植物油，优选是大豆油、沙棘油、玉米油、菜籽油、葵花籽油的组；该增溶剂有利地占基液质量的2至30％，有利地是4至15％；以及
[0107]-至少一种润湿剂，选自包含甲酯混合物的组，所述甲酯混合物有利地包含甲基十四酸酯、甲基十八酸酯和甲基十六酸酯，该润湿剂占基液质量的0.1％至5％；和/或
[0108]-至少一种螯合剂，选自包括天然螯合剂，有利地是植酸钠或基于氨基酸的螯合剂；和合成螯合剂，有利地是2,2
’‑
联吡啶、二巯基丙醇、乙二醇-双(2-氨基乙基)-n,n,n’,n
’‑
四乙酸、乙二胺四乙酸(egta)、乙二胺四乙酸(edta)、硝酸三乙酸、亚氨基二乙酸、水杨酸或还有三乙醇胺，优选是edta的组；该螯合剂有利地占基液质量的0.01％至5％；和/或
[0109]-至少一种防腐剂，有利地是苯甲醇；防腐剂有利地占基液质量的0.1％至5％。
[0110]
根据一个特定的实施方案，根据本发明的基液包括以下，有利地由以下组成：
[0111]-占基液质量0.2％至30％的至少一种表面活性剂，有利地是由蔗糖硬脂酸酯和蔗糖棕榈酸酯组成的混合物；
[0112]-占基液质量0.5％至10％的植物甾醇混合物，包括β-谷甾醇，有利地是β-谷甾醇
至少占该混合物质量的30％，其余部分包括菜油甾醇、豆甾醇和菜籽甾醇的混合物；
[0113]-占基液质量1％至15％的流化剂，有利地是平均分子质量(mn)在200至8000da之间的聚乙二醇，有利地是在250至1000da之间，优选400da；或上述的植物油；
[0114]-占基液质量0.1至5％的润湿剂，有利地是甲基酯的混合物，优选由十四烷酸甲酯、十八烷酸甲酯和十六烷酸甲酯组成；
[0115]-占基液质量0.1至5％的防腐剂，有利地是苯甲醇；
[0116]-占基液质量0.01％至5％的天然或合成螯合剂，有利地是如上所述，优选edta；和
[0117]-其余为水(qsp 100％水)。
[0118]
在实际中，根据本发明的基液是以稀释的形式应用的。换言之，乳液被稀释以形成对应于上述适用于栽培植物(特别是适用于田间)的组合物的浆液。
[0119]
有利地是，根据本发明的浆液的粘度小于或等于200cp，严格来说有利地是大于1cp且小于或等于100cp。根据本发明，使用brookfield粘度计、haake粘度计d测量粘度，测量是在室温下用l1针以100rpm转速进行的。
[0120]
有利地是，根据本发明的浆液的ph值在5到8之间；有利地是在6到7之间。
[0121]
根据另一个方面，本发明涉及一种制备上述基液的方法，包括以下步骤：
[0122]-制备油相，包括将包括β-谷甾醇的植物甾醇与至少一种表面活性剂混合，
[0123]
植物甾醇/表面活性剂的质量比在0.01和5之间，有利地在0.1和2.5之间；
[0124]-制备有利地包含防腐剂的水相；
[0125]-混合油相和水相；
[0126]-机械搅拌该混合物，即油相和水相，直到得到尺寸小于500μm的颗粒。
[0127]
根据本发明的一个特定实施方案，防腐剂如上所述。
[0128]
有利地是，油相的制造包含一个初步步骤，在本领域技术人员能够根据成分进行调整的温度下，如上所述将植物甾醇与至少一种流化剂和/或至少一种植物甾醇增溶剂和/或至少一种润湿剂混合，以便植物甾醇和表面活性剂的混合物是液体，使该过程制造乳剂成为可能。
[0129]
有利地是，水相被加热到一个本领域的技术人员将知道如何根据水相中含有的成分来调整的温度。
[0130]
根据本发明的基液、包含所述基液的浆液以及制造所述基液的方法具有在各方面与公司在植物药产品方面的需求相对应的优点：
[0131]-适用于田间，同时包含有效浓度的植物甾醇，以刺激栽培中的植物的生
[0132]
长并对非生物和/或生物胁迫作出反应；
[0133]-对环境的尊重；
[0134]-对人类没有危险；
[0135]-在栽培的植物品种方面有广泛的使用范围；
[0136]-没有诱导性的抗性；
[0137]-改善环境条件。
[0138]-经济利益。
[0139]-监管利益。
[0140]
为了说明本发明，并以非限制性的方式，从以下附图和实例中可以更清楚地看到
本发明和由其产生的优点。
附图说明
[0141]
图1显示了用根据本发明的浆液(基液在水中稀释至3质量％)处理的大豆作物相对于对照的大豆作物在24小时内土壤的抗水能力(w/r)的演变的原始数据和萎蔫点。
[0142]
图2显示了土壤的抗水能力(w/r)的平均值，该值是用根据本发明的浆液(基液在水中稀释至3质量％)处理的大豆作物相对于对照的大豆作物在24个滚动小时内测量的。
[0143]
图3表示使用根据本发明的浆液作为发芽前处理对高粱种子发芽的影响：经过处理的发芽种子(以水进行对照，或在含有根据本发明的基液的稀释至3质量％的浆液中)的百分比随时间(天数)的变化。
[0144]
图4表示使用根据本发明的浆液作为发芽前处理对高粱种子胚根生长的影响：胚根(以水进行对照，或在含有根据本发明的基液的稀释至3质量％的浆液中)平均尺寸随时间(天数)的变化。
[0145]
图5表示用根据本发明的混合物处理或不处理的藤本植物嫩叶被霜霉病感染的强度和频率的定量。
[0146]
图6表示用根据本发明的浆液处理或不处理的老藤本植物叶片被霜霉病感染的强度和频率的定量。
[0147]
图7表示用根据本发明的浆液处理或不处理的藤本植物叶片被霜霉病感染的强度和频率的定量。
具体实施方式
[0148]
1/根据本发明的基液的制备
[0149]
1.1/基液的组成
[0150]
根据本发明的基液的组成见表1。
[0151][0152]
1.2/基液的制造
[0153]
根据本发明的基液是按照以下程序步骤制造的：
[0154]-制备i)植物甾醇混合物、ii)聚乙二醇和iii)表面活性剂的混合物相应的油相；
[0155]-制备由水和苯甲醇组成的水相；
[0156]-通过搅拌混合油相和水相，直到获得1至10μm的颗粒尺寸。
[0157]
通过将根据本发明的基液在水中稀释成密度为3％的浓度来制备基液的稀溶液(或浆液)。
[0158]
2/评估根据本发明的浆液降低栽培中的大豆对水胁迫的敏感性的能力
[0159]
本试验的目的是表明，对大豆施用根据本发明的浆液会导致植物减缓对土壤中水分的消耗。该方法包括显示土壤的水分储备在处理模式下比在对照模式下减少得更慢。本发明的试验是在实验地的特定气候条件下进行的，包括通过灌溉供水，并且是在2019年。
[0160]
2.1/材料和方法
[0161]
2.1.1/对实验地的描述
[0162]
对实验地的描述见表2。
[0163]
表2
[0164][0165]
2.1.2/试验的模式
[0166]
表3列出了所试验的模式的描述。
[0167]
表3
[0168][0169]
根据本发明的浆液通过叶面喷洒施用，使用80l/ha体积的浆液，在以下气候条件下进行：温度为21℃，湿度为75％，无风。
[0170]
2.1.3/数据收集方法
[0171]
使用两个60cm的电容式探头监测土壤水分储备，分别放置在每个模式中。产量由放置在联合收割机料斗中的称重传感器来测量。
[0172]
2.1.4/统计分析
[0173]
在24小时滚动期(12:00-11:40)研究处理对土壤水分储备(w/r)变化的影响，然后单独在光合作用活动期(10:00-20:20)和呼吸期(20:40-9:40)分别进行研究。统计分析采用均值检验(学生t检验)和多元线性回归。
[0174]
2.2/结果的呈现
[0175]
2.2.1/土壤耗水率的研究
[0176]
图1表示探头记录的原始w/r变化数据，图2表示24个滚动小时内测量的平均w/r值。统计分析的结果见下文表4。
[0177]
表4
[0178][0179]
2.2.2/产量的测量
[0180]
产量数据(范围的中心区域)见表5。
[0181]
表5
[0182]
模式平均产量(kg/ha)根据本发明的浆液4589kh/ha对照4454kh/ha方差分析已验证t检验p值0.004401结论显著增加3％左右
[0183]
2.3/结论
[0184]
本试验表明，在大豆发育的早期阶段(bbch21)向其施用根据本发明的浆液，会使得植物从土壤中消耗水分的速度下降(“根据本发明的组合物”曲线从“对照”曲线移位)。此外，据观察，用根据本发明的组合物处理的植物没有达到萎蔫点，这与对照条件下的植物不同。换句话说，根据本发明的浆液的应用使植物有可能适应其水分的消耗，而不经受水胁迫的有害影响。
[0185]
此外，从这些数据中可以看出，对于相同的初始w/r土壤水平，经过处理的植物可以优化其耗水量。因此，在没有新水分供应的情况下，w/r达到萎蔫点的时刻被推迟了，植物将在其水舒适区保持更长的时间。这种现象与经处理的模式的产量减少无关。
[0186]
3/评估根据本发明的浆液降低栽培中的玉米对水胁迫的敏感性的能力
[0187]
3.1/材料和方法
[0188]
上述说明过的试验方案(大豆试验；实施例2)在玉米上重现，其条件见表6。
[0189]
表6
[0190]
试验玉米试验培养物(品种)玉米(dkc 4670)种子密度88,000g/ha设置区间1.2ha范围试验剂量5l/ha施用阶段bbch 18施用方法叶面喷洒浆液体积80l/ha施用期间天气条件温度21℃，湿度75％，无风。
[0191]
3.2/结果的呈现
[0192]
按照实施例2中介绍的方法收集和处理数据。得到的结果见表7。
[0193]
表7
[0194][0195]
产量分析显示两种模式之间没有显著的差异。
[0196]
3.3/结论
[0197]
根据与大豆试验(实施例2)相同的推理，该玉米试验证明了根据本发明的浆液对减少土壤中w/r植物的消耗率的有效性。
[0198]
4/根据本发明的浆液在大豆幼苗生长的不同阶段的施用的比较试验
[0199]
本试验的目的是确定根据本发明的浆液在大豆作物上的最佳施用阶段。
[0200]
4.1/材料和方法
[0201]
4.1.1/对实验地的描述
[0202]
对实验地的描述见表8。
[0203]
表8
[0204]
试验大豆试验作物(品种)大豆(es mentor)设置区间1.4公顷范围浆液体积80l/ha灌溉当前(频率为7天)
[0205]
4.1.2/试验的模式
[0206]
表9列出了所试验的模式的描述。
[0207]
表9
[0208][0209]
4.2/结果的呈现
[0210]
表10
[0211][0212]
4.3/结论
[0213]
根据本发明的浆液在bbch21阶段施用于大豆时，其效果似乎最佳。观察到的效果是刺激叶面系统的发育，更好地抵抗水胁迫，并提高产量。
[0214]
5/根据本发明的浆液在受控和最佳栽培条件下作为高粱幼苗发芽和生长的刺激物的使用。本试验的目的是评估根据本发明的浆液对刺激高粱幼苗发芽和生长的效果的维持。
[0215]
5.1/材料和方法
[0216]
该试验方案包括在发芽基液的培养皿中培养之前，将高粱种子放在含有根据本发明的基液的浆液中引发。对于未处理的对照组，以水取代引发液中根据本发明的基液。作物参数显示在表11中。
[0217]
表11
[0218][0219][0220]
种子经过7天的培养。播种(d0)后每隔24小时，观察以下参数：
[0221]-发芽的种子的百分比；
[0222]-胚根长度(mm)。
[0223]
5.2/结果和结论
[0224]
结果显示在图3和图4中。在整个试验中，经过根据本发明的基液的3％溶液浸泡处理的高粱种子比对照批次的种子发芽更快。根据实验条件，与对照批次相比，经处理的批次的发芽速率提高了约8小时。这一点可通过测量胚根的生长情况得到证实：经处理的种子的胚根尺寸明显增大(第2天是1.9倍)。
[0225]
6/评估根据本发明的浆液降低栽培中的藤本植物(嫩叶、老叶和丛枝)对霜霉病的敏感性的能力
[0226]
本试验的目的是证明根据本发明的浆液在增强植物对生物胁迫的抵抗力方面的有效性。
[0227]
6.1/材料和方法
[0228]
6.1.1/对实验地的描述
[0229]
对实验地的描述见表12。
[0230]
表12
[0231]
试验藤本植物试验作物(品种)藤本植物(ugni blanc)行间排列3米藤本植物间排列1.2米实验设置区间7株藤本植物的微型地块，重复4次特殊情况人为污染试验浆液剂量1l/ha
[0232]
6.1.2/试验的模式
[0233]
表13列出了所试验的模式的描述。
[0234]
表13
[0235][0236]
6.1.3/数据收集方法
[0237]
6.1.3.1/病害发展的测量
[0238]
病害的发展是用两个互补的指标来评估的：
[0239]-病害频率：发现病害的叶片的百分比；和
[0240]-病害强度(单位：％)。所有叶片上的平均病害强度。因此，叶片上的强度相当于该叶片被病害覆盖的面积(％)。
[0241]
在嫩叶、老叶和丛枝上进行评估。对于每个器官，每个模式的样本来自200个个体(每个微型地块50个)。
[0242]
6.1.3.2/统计分析
[0243]
对于这种试验，所进行的检验是：
[0244]-频率相等的chi2检验(均值相等)；和
[0245]-强度相等的mann-whitney-wilcoxon检验(均值相等)。
[0246]
6.1.4/结果的呈现
[0247]
对嫩叶、老叶和丛枝的统计结果分别见图5、6和7。
[0248]
6.1.4.1/频率相等的测试(chi2)
[0249]
表14
[0250][0251]
结论：根据本发明的浆液对病害强度的影响在叶片上并不明显，但在事先处理过的丛枝上，病害明显减少。
[0252]
6.1.4.2/强度均值相等的检验(mann-whitney-wilcoxon)。
[0253]
表15
[0254][0255]
结论：在观察的3个器官上，与对照方法的相同器官相比，受益于根据本发明的溶液的藤本植物的病害强度明显降低。在这个试验中，通过向藤本植物施用根据本发明的浆液，病害的强度可减少30％至50％。
[0256]
7/通过叶面喷洒使用根据本发明的浆液的条件
[0257]
根据本发明的预防性处理方法可以改善植物的活力，使其能够有效地抵抗非生物和/或生物胁迫。根据本发明的混合物必须在行间覆盖阶段通过植物的叶片施用(行播作物栽培)。
[0258]
从上文可以看出，根据本发明的浆液的施用时间取决于栽培植物的种类、其无性生长、播种日期和2行幼苗之间的行间或草质部分的距离。
[0259]
表19显示了玉米、大豆和蛋白种子作物的这些数据。
[0260]
表19
[0261]