杀昆虫组合的制作方法

本发明描述并要求保护用于防治和/或根除害虫的富含半胱氨酸的杀昆虫蛋白(crip)和杀昆虫剂(ia)的新杀昆虫组合，所述杀昆虫剂例如化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、毒素、毒物、毒药、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物、原核生物体或真核生物体(以及由所述原核生物体或真核生物体产生的试剂)。

背景技术：

1、许多昆虫是疾病的载体。按蚊属(anopheles)的蚊子是zika病毒、基孔肯雅病毒和疟疾的主要载体，疟疾是由锥虫属(trypanosoma)的原生动物引起的疾病。埃及伊蚊(aedesaegypti)是引起黄热病和登革热的病毒的主要载体。其他病毒，各种类型脑炎的致病因子，也由伊蚊属物种(aedes spp.)蚊子携带。班氏丝虫(wuchereria bancrofti)和马来丝虫(brugia malayi)是引起丝虫病的寄生蛔虫，通常由库蚊属(culex)、曼蚊属(mansonia)和按蚊属的蚊子传播。

2、马蝇和鹿蝇可传播兔热病(土拉巴斯德氏菌(pasteurella tularensis))和炭疽(炭疽杆菌(bacillus anthracis))的细菌性病原体，以及在热带非洲引起罗阿丝虫病的寄生蛔虫(罗阿丝虫)。

3、潜蝇属(hippelates)的眼潜蝇可携带引起雅司病(雅司螺旋体(treponemapertenue))的螺旋菌病原体，并且也可传播结膜炎(红眼病)。舌蝇属(glossina)的采采蝇传播引起非洲昏睡病的原生动物病原体(冈比亚锥虫(trypanosoma gambiense)和罗得西亚锥虫(t.rhodesiense))。白蛉属(phlebotomus)中的白蛉是在南美洲引起卡里翁氏病(奥罗亚热)的细菌(杆菌状巴通体(bartonella bacilliformis))的载体。在亚洲和北非的部分地区，它们传播引起白蛉热(三天热)的病毒因子以及引起利什曼病的原生动物病原体(利什曼原虫(leishmania)属)。

4、因此，为了保护我们赖以生存的农作物，并保障人类和动物的健康，需要有效的杀昆虫处理。

5、此处，我们描述了杀昆虫剂(ia)和富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)的组合。ia是一种或多种化学物质、分子、核苷酸、多核苷酸、肽、多肽、蛋白质、毒素、毒物、毒药、杀昆虫剂、杀虫剂、有机化合物、无机化合物、原核生物体和/或其产物(诸如细菌毒素)或真核生物体和/或其产物(诸如真菌毒素)。可将ia组合以提供比单独使用的任何ia的加和效果更大的杀昆虫效果。

6、crip是具有半胱氨酸残基的肽、多肽和/或蛋白质，在一些实施方案中，这些半胱氨酸残基能够形成二硫键；这些二硫键形成支架基序，该支架基序在各种不相关的蛋白质家族中都可观察到。属于crip家族的肽的示例是抑制剂胱氨酸结(ick)肽。ick肽包括许多具有杀昆虫活性的分子。此类ick肽通常对天然存在的生物靶标物种，通常是昆虫或某种类型的蛛形纲动物具有毒性。通常ick肽可具有节肢动物来源诸如蝎子或蜘蛛的毒液。

7、此处，我们描述了ia和crip的新型杀昆虫剂组合。例如，我们尤其描述了杀昆虫有效组合，该杀昆虫有效组合包含(1)一种或多种crip或其药学上可接受的盐；一种或多种crip-杀昆虫蛋白或其药学上可接受的盐；或者它们的组合；和(2)一种或多种杀昆虫剂(ia)，以及使用它们保护我们赖以生存的农作物并保障人类和动物的健康的方法。

技术实现思路

1、本发明描述了如何将crip和ia组合，使得它们提供的杀昆虫效果大于单独使用的任何ia或crip的加和杀昆虫效果。本公开描述了如何制备和使用crip和ia的组合来杀死和防治昆虫，甚至是杀昆虫剂抗性昆虫，并且甚至在低剂量下。不受理论的束缚，我们对crip和ia的理解使我们能够教导本领域的普通技术人员，创造新型方法、组合物、化合物(蛋白质和肽)和程序来保护植物并防治昆虫。

2、本公开描述了包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)和杀昆虫剂(ia)的组合。

3、此外，本公开描述了包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)和杀昆虫剂(ia)的组合，其中ia是细菌毒素、真菌毒素、凝集素、印楝(azadirachta indica)化合物、硼化合物、病毒或它们的组合；并且其中crip是u1-漏斗网蛛毒素-ta1b肽、u1-漏斗网蛛毒素-ta1b变体多肽(tvp)、海葵毒素、av3变体多肽(avp)、巴西游走蛛(phoneutria)毒素或atracotoxin(actx)。

4、此外，本公开描述了一种组合物，该组合物包含包括富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)和杀昆虫剂(ia)的组合，并且还包含赋形剂。

5、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种(bacillus thuringiensis ssp.kurstaki)菌株evb-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据seq id no:1所示氨基酸序列的氨基酸序列的u1-漏斗网蛛毒素-ta1b肽。

6、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株evb-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据seq id no:2所示氨基酸序列的氨基酸序列的u1-漏斗网蛛毒素-ta1b变体多肽(tvp)。

7、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株evb-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据seq id no:67所示氨基酸序列的氨基酸序列的av3-变体多肽(avp)。

8、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株evb-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据seq id no:65所示氨基酸序列的氨基酸序列的γ-cntx-pn1a毒素。

9、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含球孢白僵菌(beauveria bassiana)菌株ant-03孢子和具有根据seq id no:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

10、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种(bacillus thuringiensis ssp.tenebrionis)菌株nb-176中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据seq id no:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

11、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌戈尔斯德亚种菌株evb-113-19中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据seq id no:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

12、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含从苏云金芽孢杆菌以色列亚种(bacillus thuringiensis ssp.israelensis)菌株bmp 144中分离的一种或多种发酵固体、孢子或毒素，和具有根据seq id no:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

13、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含发光光杆状菌(photorhabdusluminescens)毒素和actx；其中发光光杆状菌毒素是发光光杆状菌毒素复合物(tca)，包括tcaa(seq id no:616)、tcab(seq id no:617)、tcac(seq id no:618)和tcaz(seq id no:619)；并且其中actx肽是u+2-actx-hv1a毒素(seq id no:61)。

14、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含雪滴花(galanthus nivalis)凝集素(gna)和actx；其中gna具有seq id no:35所示的氨基酸序列；并且其中actx肽是具有根据seq id no:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

15、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含印楝素和actx；其中印楝素是具有以下化学式的印楝素：c35h44o16；并且其中actx是具有根据seq id no:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

16、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含硼酸化合物和actx；其中硼酸化合物具有化学式h3bo3；并且其中actx肽是具有根据seq idno:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

17、此外，本公开描述了一种组合，该组合包含苹果蠹蛾(cydia pomonella)颗粒体病毒(cpgv)和actx；其中cpgv是苹果蠹蛾颗粒体病毒分离株v22病毒；并且其中actx肽是具有根据seq id no:61所示氨基酸序列的氨基酸序列的u+2-actx-hv1a毒素。

18、此外，本公开描述了一种使用包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)和杀昆虫剂(ia)的组合来防治昆虫的方法，所述方法包括提供至少一种crip和至少一种ia的组合，将包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)和杀昆虫剂(ia)的组合施用到昆虫所在处。

19、此外，本公开描述了一种使用包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)和杀昆虫剂(ia)的组合来防治苏云金芽孢杆菌毒素抗性昆虫的方法，该方法包括提供至少一种crip和至少一种ia的组合；然后将所述组合施用到昆虫所在处。

20、此外，本公开描述了一种对抗、防治或抑制害虫的方法，该方法包括将杀虫有效量的包含富含半胱氨酸的杀昆虫肽(crip)和杀昆虫剂(ia)的组合施用到害虫所在处，或施用到易受害虫侵袭的植物或动物。