几种烷烃类物质作为昆虫病原线虫引诱剂的应用

carpocapsae。
8.在上述技术方案中，所述烷烃类物质的使用浓度是10-140mg/ml，优选 10-130mg/ml或者11-130mg/ml或者12-120mg/ml。
9.在上述技术方案中，所述烷烃类物质采用正己烷或者二氯甲烷稀释。
10.本发明还提供了一种昆虫病原线虫引诱剂，所述引诱剂包含烷烃类物质，所述烷烃类物质是二十一烷、二十七烷或者二十八烷。
11.所述昆虫病原线虫为斯氏属昆虫病原线虫，优选为小卷蛾斯氏线虫 steinernema carpocapsae。
12.本发明还提供了一种昆虫病原线虫引诱剂诱芯，所述诱芯包含上述的引诱剂。
13.优选地，所述诱芯还包括载体，引诱剂溶液置于所述载体内；优选所述引诱剂溶液的溶剂为正己烷或者二氯甲烷。
14.本发明还提供上述的引诱剂或诱芯在制备引诱昆虫病原线虫的产品中的应用。
15.在上述的应用技术方案中，所述昆虫病原线虫为斯氏属昆虫病原线虫，优选为小卷蛾斯氏线虫steinernema carpocapsae。
16.本发明的有益效果是：本发明通过对不同化学物质的筛选，发现右旋香芹酮和部分烷烃类物质对昆虫病原线虫小卷蛾斯氏线虫具有显著的引诱活性，可以作为引诱剂引诱昆虫病原线虫用于其寄主昆虫的防治中，帮助昆虫病原线虫找到寄主昆虫提高寄生率，从而提高epn生防效率。
附图说明
17.图1是琼脂皿画线实验方法示意图。
18.图2是筛选出的烷烃类物质的不同浓度设置对于小卷蛾斯氏线虫的引诱效果。
具体实施方式
19.下面结合实施例对本发明作进一步说明，但并不因此而限制本发明。
20.下述实施案例中所述的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
21.实施例1、不同化合物对小卷蛾斯氏线虫引诱实验
22.现有的线虫行为试验以“琼脂皿”平板法测定行为活性，但是我们在铺有琼脂的培养皿进行线虫行为测试发现，该方法检测效率低，主要原因是线虫在琼脂板上的移动能力较差，时间较久。针对这一技术难点，本发明在培养皿内的琼脂板上划一条水线，水线的两端分别设置为不同处理，水线的中间放置待测试的昆虫病原线虫。这样有利于线虫快速做出行为选择，也避免了线虫在整个培养皿四处游动不利于计数，同时提高了线虫对化学物质的反应效率。
23.行为生测试验：
24.(1)琼脂皿的制作：称取3.2g琼脂，同时加入400ml蒸馏水于锅内，搅拌均匀，加热，煮沸之后分装于250ml锥形瓶中，待冷却至50℃左右，倒入预先灭过菌的玻璃培养皿(直径9cm)内，在室温下冷却凝固得到琼脂皿。
25.(2)准备待测试剂：
26.待测试剂如表1中所示，其中，本身为固体的试剂用表中对应的溶剂配制为溶液后用于线虫引诱实验；本身为液态的试剂，直接使用购得的原液进行线虫引诱实验。
27.表1实验试剂
28.化合物名称外文名cas号纯度实验浓度溶剂二十烷eicosane112-95-8\10mg/ml正己烷软脂酸palmitic acid57-10-3\10mg/ml正己烷己醛caproaldehyde66-25-197％原液\1-辛醛octanal124-13-099％原液\3-甲氧基苯乙酮3-methoxyacetophenone586-37-898％原液\丁酸芳樟酯linalyl butyrate78-36-495％原液\乙酸正壬酯nonyl acetate143-13-597％原液\甲基庚烯酮methylheptanone110-93-098％原液\右旋香芹酮(s)-(+)-carvone2244-16-897％原液\香茅醇β-citronellol106-22-995％原液\丁香酚eugenol97-53-099％原液\2,4-二甲基-3-戊醇2,4-dimethyl-3-pentanol600-36-297％原液\二十一烷heneicosane629-94-799.0％120mg/ml，12mg/ml正己烷二十七烷heptacosane593-49-798.0％120mg/ml，12mg/ml正己烷二十八烷octacosane630-02-498.0％120mg/ml，12mg/ml正己烷
29.(3)将“琼脂皿”倒扣，在皿底用记号笔划出一条直径黑线，在直径线的两端(a、b)与中间(c)各标记一个观测点(如图1所示)，中间的观测点(c)滴加10ul的含有一定数量的线虫的悬浮液，两端的观测点(a、b) 分别加入10ul待测试剂和空白对照，其中a端为处理端，滴加待测试剂；b 端为对照端，滴加对照，采用溶剂配制为溶液的试剂其对照即为溶剂，试剂本身为液体的采用清水作为对照。同时在a与c之间、b与c之间用10ul移液枪逐步滴加小水滴，轻轻滑动使水滴连成一条完整的直水线，水线用于方便线虫的快速移动，加速实验。
30.(4)计数：准备好的“琼脂皿”置于26℃的培养箱中暗培养2h，在体视显微镜下观察并记录昆虫病原线虫所在位置及数量。
31.(5)结果分析：
32.引诱率(％)＝处理端线虫数量/(线虫总数)
×
100
33.其中，线虫总数为整个琼脂皿内观察到的线虫数量。
34.使用spss 18.0tukey检验不同试剂处理对小卷蛾斯氏线虫引诱率的均值间的显著性差异。显著性差异以p值为判断依据，当p值＞0.05时，处理间的引诱率无显著差异；当p值＜0.05时，处理间的引诱率存在显著差异。平均引诱率(％)后的小写字母代表物质间的显著性差异，当字母不同时，则存在显著差异；字母相同时，则无显著差异，以不同的小写字母代表处理间的差异性。
35.(6)结果与分析：
36.对小卷蛾斯氏线虫的引诱活性详见表2。
37.由表2可见，供试化合物中，酮类物质和部分烷烃类物质对小卷蛾斯氏线虫具有显著引诱活性。其中，其中甲基庚烯酮对小卷蛾斯氏线虫的平均引诱活性为49.63％，右旋香芹酮对小卷蛾斯氏线虫的平均引诱活性为80.81％。烷烃类物质中，二十一烷、二十七烷和
二十八烷对小卷蛾斯氏线虫有明显的引诱效应。当烷烃类物质浓度为120mg/ml时，二十一烷、二十七烷和二十八烷对小卷蛾斯氏线虫的引诱率分别为72.75％、86.73％、63.14％；浓度为12 mg/ml时，二十一烷、二十七烷和二十八烷对小卷蛾斯氏线虫的引诱率分别为70.26％、66.81％、59.74％。3种烷烃物质不同浓度对小卷蛾斯氏线虫的引诱效果如图2所示，当浓度为120mg/ml时，二十七烷引诱效果最高，但与二十一烷没有显著差异；120mg/ml的二十七烷引诱效果显著优于二十八烷的引诱效果；12mg/ml的二十一烷、二十七烷和二十八烷之间的引诱效果不具有显著性差异。
38.表2不同化合物对小卷蛾斯氏线虫的引诱活性
[0039][0040]
实施例2、草地贪夜蛾对小卷蛾斯氏线虫引诱实验
[0041]
草地贪夜蛾spodoptera frugiperda属鳞翅目lepidoptera夜蛾科noctuidae，是一种种杂食性的世界性害虫。联合国粮农组织对12个非洲国家评估表明，草地贪夜蛾2018年为害玉米损失达1770万吨，相当于数千万人一年的口粮。昆虫病原线虫具有防治草地贪夜蛾的应用潜力，尤其小卷蛾斯氏线虫分布广泛且对草地贪夜蛾及致病力强。小卷蛾斯氏
线虫依靠其灵敏的嗅觉功能锁定草地贪夜蛾并成功寄生，本实施例通过考察天然寄主昆虫草地贪夜蛾对小卷蛾斯氏线虫的引诱活性，以此评价右旋香芹酮对草地贪夜蛾的引诱效应。按照实施例1的方法进行，在处理端a端放置1头草地贪夜蛾2龄幼虫或雌、雄蛹，将幼虫固定在双面胶上防止其逃跑，对照端b端为空白对照。实验结果如表3所示。
[0042]
表3草地贪夜蛾对小卷蛾斯氏线虫引诱活性
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对比实施例1中酮类物质和烷烃类物质对小卷蛾斯氏线虫的引诱率结果和图2的结果，可以看出，筛选出的供试化合物对小卷蛾斯氏线虫的引诱率能达到与草地贪夜蛾本身对其引诱相近的效果，进一步证实了筛选出的右旋香芹酮和烷烃类物质二十一烷、二十七烷和二十八烷对小卷蛾斯氏线虫的引诱作用是显著的。
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实施例3、制备昆虫病原线虫引诱剂诱芯
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制备本发明的昆虫病原线虫引诱剂诱芯：将右旋香芹酮或者二十一烷或者二十七烷或者二十八烷溶解于正己烷中，然后将溶液装于载体中，即得本发明诱芯，可用于引诱昆虫病原线虫，尤其是用于引诱小卷蛾斯氏线虫。